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       【摘要】 
       目的探讨三七超细粉体对家兔心肌缺血再灌注损伤的影响。方法将40只家兔随机分为5组：假手术组、缺血再灌注组、三七颗粒组、三七超细粉体小剂量组、三七超细粉大剂量组。三七颗粒组、三七超细粉体小剂量组、三七超细粉体大剂量组家兔于术前1周分别灌胃三七颗粒0.6 g/（kg·d），三七超细粉体0.3 g/（kg·d），三七超细粉体0.6 g/（kg·d），另两组给等量生理盐水。采用结扎冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型。缺血30 min再灌注60 min后，观察家兔心电图变化;检测血浆磷酸肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果三七超细粉体小剂量组和三七超细粉体大剂量组家兔室性心律失常发生率低于缺血再灌注组、三七颗粒组；三七超细粉体小剂量组和三七超细粉体大剂量组家兔血浆CK、LDH、MDA值显著低于缺血再灌注组、三七颗粒组，SOD活性显著者高于缺血再灌注组、三七颗粒组。结论三七超细粉体较三七普通颗粒对家兔心肌缺血再灌损伤有更显著的保护作用。
       【关键词】  三七超细粉体 缺血再灌注损伤 心肌保护作用
       目前，缺血心肌再灌注治疗的技术如溶栓治疗，经皮冠状动脉腔内成形术和冠状动脉旁路移植术等仍是治疗缺血性心脏病普遍采用的措施［1］。但是国内外大量的研究表明，缺血再灌注后已经受损的心肌不一定能恢复正常的功能和结构，甚至还会出现损伤加重的表现，如再灌注心律失常、心肌顿抑、内皮损伤等。探索防治心肌缺血再灌注损伤的药物是当今医学研究热点之一。中药三七是五加科人参属多年生草本植物三七的根。多项实验证实普通三七粉及提取物三七总皂苷（PNS）对大鼠、家兔、犬的心肌缺血再灌注损伤有较强的保护作用［2～4］。本研究利用兔心肌缺血再灌注模型，以心律失常发生情况、血清酶活性等为观察指标，进一步研究经超细粉碎的三七超细粉体对心肌缺血再灌注损伤的影响，为中药剂型改革以防治再灌注损伤提供实验依据。
       1  器材
       1.1   动物健康成年日本大耳白兔40只，雄性，体重2.0～2.5 kg，由江苏大学医学院实验动物中心提供。实验前饲养于安静通风，光线充足环境中，室温15～25℃。
       1.2   药品与试剂三七为云南产，经作者鉴定为Panax notoginseng （Burk）F.H.Chen的根。三七超细粉体，系三七超微粉碎由南京理工大学化工学院加工，粒径20 μm以下；三七颗粒，由江苏大学药学院制备，普通粉碎机粉碎，过40目筛。丙二醛（malondialdehyde, MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）试剂盒购于南京建成生物工程研究所。
       1.3   仪器 日产岛津CL-7300全自动生化分析仪，日产KOHDENE（G-651）型心电图机，美产LIFDAK9P型心电监护仪，国产Feb-80电动离心机。
       2  方法
       2.1   实验分组 将40只兔随机分为5组，每组8只，假手术组每天以生理盐水4 ml/kg连续灌胃共7d，末次灌胃后1h后行假手术；缺血再灌注组每天以生理盐水4 ml/kg连续灌胃共7 d，末次灌胃后1 h手术造模；三七颗粒组以三七颗粒0.6 g/kg溶于生理盐水4 ml中，以4 ml/kg连续灌胃7d后处理同缺血再灌注组；三七超细粉体小剂量组以三七超细粉体0.3 g/kg溶于生理盐水4 ml中后处理同缺血再灌注组；三七超细粉体大剂量组，以三七超细粉体0.6 g/kg溶于生理盐水4 ml中后处理同缺血再灌注组。
       2.2  动物模型的制备［5］ 3%戊巴化妥钠30mg/kg耳缘静脉注射麻醉，仰卧固定，常规记录肢体II导联心电图。沿胸部中线纵切皮肤，暴露胸骨和软骨部分，沿左胸骨边缘切断3.4肋软骨，避免损伤胸膜和胸廓内血管，维持自主呼吸，暴露心脏，剪开心包膜，于左冠状动脉前降支近起始部6～8 mm处穿一3-0丝线，假手术组只穿线不结扎，余组用丝线结扎阻闭血管，以心电图II导联ST段升高，T波高耸和结扎线以下心肌组织颜色由正常变苍白再变暗为心肌缺血造模成功，30 min后松开血管，恢复左前降支血流，再灌注60 min。
       2.3  心电图检测 各组实验动物均于心肌缺血模型复制成功后进行心电监护：模拟标II导联至再灌注后60min，记录再灌注性心律失常发生的时间、类型。
       2.4  血清酶学CK，LDH，SOD活性及MDA含量测定 各组实验动物均于再灌注60 min时自颈内动脉取动脉血2 ml，按4 500 r/min离心，取血清，采用全自动生化分析仪检测血清中的LDH、CK水平。另严格按说明书操作，采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴化妥酸盐法分别测定血清中的SOD活性、MDA含量。
       2.5  统计学方法所有数据均以±s表示，采用SPSS10.0软件对各组间差异进行方差分析，t检验及q检验。
       3  结果
       3.1  对各组再灌注性心律失常的影响  结果见表1。由表1可见结扎冠状动脉30 min再灌注60 min后各组室性心律失常的发生率显著高于未结扎的假手术组，应用三七颗粒及三七超细粉体（大小剂量）预处理的组别室性心律失常发生率显著低于缺血再灌注生理盐水组，而三七超细粉体大小剂量两组室性心律失常发生率又显著低于三七颗粒组。三七超细粉体大小剂量两组之间差异无统计学意义。提示三七超细粉体具有更加明显抗再灌注性心律失常的作用。
       表1  各组再灌注性心律失常的发生情况（略）
       与假手术组比较，aP<0.01；与缺血再灌注组比较，bP<0.05；与三七颗粒组比较，cP<0.05；n=8
       3.2  对各组血清CK，LDH含量的影响结果见表2。由表2可见，与假手术组比较，其余各组再灌注后60 min后血清CK活性与LDH活性均明显升高。与缺血再灌注组比较，三七颗粒组及三七超细粉体大、小剂量组CK活性与LDH活性均明显降低，而三七超细粉体大、小剂量组较三七颗粒组降低更显著，但三七超细粉体大、小剂量组之间无显著性差异。提示三七超细粉体较三七颗粒更明显抑制兔缺血再灌注时心肌酶的溢出，具有保护心肌细胞膜的作用。
       表2  各组再灌注60min时CK及LDH值（略）
       与假手术组比较，aP<0.01；与缺血再灌注组比较，bP<0.05；与三七颗粒组比较，cP<0.05；n=8
       3.3  对各组SOD活性及MDA含量的影响见表3。由表3可见，与假手术组比较，缺血再灌注组、三七颗粒组的SOD明显降低，MDA明显升高；与缺血再灌注组比较，其他各组SOD明显升高，MDA明显降低；三七超细粉体小、大剂量组SOD，MDA之间无显著差异，提示三七超细粉可明显升高缺血再灌注心肌组织SOD水平降低MDA含量。
       4  讨论
          
       三七的主要活性成分为三七总皂苷，现代药理研究表明，三七总皂苷具有明显的降低心肌耗氧量、改善心肌缺血、降血脂、防止动脉粥样硬化、抗心律失常等作用［6，7］。目前微粉化技术在中药材不断得到运用，我们前期的对比研究表明三七超细粉体较三七颗粒的有效成分的溶出度，提高吸收明显优于三七常规颗粒，证实了微粉化技术在三七应用中的可行性。
       表3  各组灌注60 min时SOD、MDA值 （略）
       与假手术组比较，aP<0.01；与缺血再灌注组比较，bP<0.05；与三七颗粒组比较，cP<0.05；n=8
       
       心肌缺血再灌注损伤过程中，由于黄嘌呤氧化酶的形成增多以及中性粒细胞的激活等原因，导致自由基大量生成，形成脂性自由基和脂过氧化物，使膜受体、膜蛋白酶、离子通道和膜转运系统等脂质环境改变，引起它们的功能障碍；同时导致膜的基本特性如变构、离子转运、酶活性等发生改变，从而导致心肌细胞的结构以及功能障碍，如细胞膜通透性增加，细胞内的酶弥散致细胞外［8］，因此测定血浆中酶如LDH及CK等活性可评价缺氧所致组织受损的程度，而SOD和MDA等是反映脂质过氧化损伤的指标，可间接反应细胞内脂质过氧化反应损伤的程度。本实验结果表明，在同等用量及较小用量下的三七超细体较常规三七颗粒有更显著的抗再灌注性心律失常作用，可以显著降低再灌注性室性心律失常的发生，同时可减少心肌细胞LDH、CK逸出，增加心肌细胞SOD活性，并使MDA生成显著减少。大剂量组及小剂量组三七超细粉体之间实验结果差异无统计学意义。表明三七超细体较常规颗粒有更显著的心肌细胞膜结构和功能稳定作用，这可能与其清除氧自由基等抗氧化作用密切相关。
       
       本实验结果提示，三七经超细粉碎处理后，对兔心肌缺血再灌注损伤较常规颗粒有更显著的保护作用，为三七超细粉体进一步开发及临床应用提供了整体实验依据。
       【参考文献】
         　　［1］ Staat P, Rioufol G, Piot C,et al. Postconditioning the human heart ［J］. Circulation, 2005,112：2143.
       
       ［2］ 刘 季，陈 朋，方功德. 三七总皂甙对犬心肌的保护作用［J］. 中国循环杂志，1998，13（2）：109.
       
       ［3］ 郭渝成，唐旭东，顾大勇，等. 三七总皂苷对心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究［J］. 中国微循环 ,2004,8(5) ：344.
       
       ［4］ 顾国嵘，黄培志，葛均波，等. 缺血及三七总皂甙预处理对心肌缺血-再灌流损伤的保护作用［J］. 中华急诊医学杂志,2005,14(4) ：307.
       
       ［5］ 徐叔云，卞如濂，陈 修. 药理实验方法学，第3版［M］. 北京：人民卫生出版社，2005：1042，1053.
       
       ［6］ 周晓慧，周晓霞，杨鹤梅. 三七总皂甙防治动脉粥样硬化的研究进展［J］. 承德医学院学报, 2003,20(4): 350.
       
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       ［8］ 丁延峰，张蔓蔓，何瑞荣. 缺血预处理减轻在体家兔心肌细胞凋亡［J］ . 生理学报,2000,52（3）：220.