天贞子胶囊对血小板聚集和血栓形成的抑制作用
作者：王敏，孙安盛*，吴芹
作者单位：遵义医学院附属医院，贵州 遵义 563000； 遵义医学院，贵州 遵义 563003
《时珍国医国药》 2009年 第5期
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【摘要】
目的研究天贞子胶囊 (简称TZZ)对血小板聚集与血栓形成的影响。方法比浊法测定TZZ体外和灌胃给药对大鼠血小板聚集的影响，采用动-静脉旁路血栓形成法制作大鼠血栓模型，观察TZZ对血栓形成的作用。结果灌胃给药TZZ 0.75 g/kg，1.5 g/kg 及体外给药 TZZ 2 mg/ml和4 mg/ml，对ADP和凝血酶诱导的大鼠血小板聚集均有显著抑制作用( P< 0.01) ；明显降低大鼠血栓形成湿重( P< 0.01) 。结论TZZ能明显抑制血小板聚集与大鼠血栓形成。
【关键词】 天贞子胶囊 天麻 女贞子 血小板聚集 血栓形成
Inhibitory Effect of Tianzhenzi Capsule on Thrombosis and Platelet Aggregation
WANG Min,SUN Ansheng*,WU Qin
（Affiliated Hospital of Zunyi Medical College,Zunyi，563003,China;Department of Pharmacology, Zunyi Medical College, Zunyi 563003, China）
Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of Tianzhenzi Capsule (TZZ) on platelet aggregation and thrombosis and its mechanism.MethodsThe effect of TZZ on thrombosis was observed in rats with the thrombogenesis model of artery-vein bypass. Platelet aggregation was induced respectively by ADP, and thrombin was determined.ResultsTZZ could markedly inhibit the rat (in vitro) and rabbit (in vivo)platelet aggregation induced byADP or thrombin. TZZ 0.75 g/kg and 1.5 g/kg significantly inhibited the rat thrombosis of artery-vein bypass. ConclusionTZZ can inhibit the platelet aggregation and thrombosis.
Key words：Tianzhenzi Capsule; Platelet aggregation; Thrombosis
血栓形成的原因复杂，与血小板聚集密切相关。天贞子胶囊（TZZ）是在苗药验方基础上研制的药物，主要由兰科植物天麻Gastrodia elata BI，木樨科植物女贞子Ligustrum lucidum Ait等组成。天麻具有熄风、祛麻木等功效。化学成分有天麻素、苷元等，据报道天麻液能对抗大鼠肾上腺素的缩血管效应，显示对微循环障碍有预防及阻止血栓形成等作用［1］；女贞子可补肝肾，治头晕等症，其含萜类、黄酮类等成分，具有清除自由基、抗脂质过氧化及抗衰老作用等［2］。本实验观察TZZ防治实验性血栓形成和对血小板聚集的影响。
1 材料与仪器
1.1 药品与材料 TZZ由贵阳春科药业技术研发有限公司提供，0.3 g/粒，每克相当于生药6.5 g，批号:2007001，临用时蒸馏水溶解, 微孔滤膜过滤后备用，调pH至6.5左右，再用蒸馏水稀释到实验所需浓度。阿司匹林(ASP)美国Alfa Aesar公司产品，批号：AD4831C，临用时用蒸馏水溶解， NaHCO3 调pH至7.0左右。二磷酸腺苷(ADP) 华美生物工程公司产品。凝血酶(thrombin, Thr)珠海经济特区生物化学制药厂，国药准字H44023936。
1.2 仪器LBL-NJ2血液凝聚仪,北京普利生仪器中心。
1.3 动物 SD大鼠，雌雄兼用，体重280～300 g，购于第三军医大学大坪医实验动物中心，合格证号:2002003。雄性家兔，体重2.6～3.1 kg，本院实验动物中心提供。
2 方法
2.1 分组、给药及血栓制模大鼠50只随机均分为5组:生理盐水对照组, ASP组(0.1 g/kg), TZZ低(0.375 g/kg)、中（0.75 g/kg）、高(1.5 g/kg)剂量组，每组10只。灌胃给药1次/d，连续3 d，末次给药后1h制模［3］。大鼠戊巴比妥钠30 mg/kg静脉麻醉后仰位固定，分离右颈总动脉及左颈外静脉备用。取内径1.5 mm，长12 cm的硅化聚乙烯管，在其中段置入长6 cm的一丝线，管内充满肝素（50 U/ml）生理盐水溶液。然后将管两端分别插入左颈外静脉和右颈总动脉，形成颈动脉-颈静脉通路，开放血流15 min，迅速取出管内丝线称重，总重量减去丝线原重量，即为血栓湿重。血栓形成抑制率（%） =（生理盐水对照组栓重-给药组栓重）/ 生理盐水对照组栓重×100%。
2.2 血小板聚集的测定
2.2.1 体外法大鼠麻醉同上，颈总动脉插管取血,加入3.8%的枸橼酸钠抗凝(血∶抗凝剂=9∶1), 离心800 r/min，10 min，吸上清液即为富血小板血浆（PRP）。将剩余部分再离心4 000 r/min,10 min，吸上清液制得贫血小板血浆（PPP）。用PPP将PRP调数为(400～450)×109/L,待用。取上述调好的PRP 200 μl, 分别加入TZZ低浓度(1 mg/ml)、中浓度(2 mg/ml)和高浓度(4 mg/ml)，ASP(1.4 mol/ ml)的药液各5 μl，生理盐水对照组PRP中加入生理盐水5 μl。37℃恒温孵育5 min,诱导剂ADP (终浓度1.5 ×10-2 mol/ ml)和Thr (终浓度3 U/ml)，记录5 min 聚集曲线，取最大聚集率，计算聚集抑制率。血小板聚集抑制率（%）=（空白管血小板聚集率-给药管血小板聚集率）/ 空白管血小板聚集率×100%。
2.2.2 体内法家兔35只，分组及给药同“2.1”项，每组7只，测定方法同“2.2”项。
2.3 统计学处理实验数据均以±s表示，用t检验判断显著性。
3 结果
3.1 TZZ对大鼠血栓形成的影响 与生理盐水对照组比较，TZZ 0.75 g/kg，1.5 g/kg明显抑制大鼠血栓形成，且呈剂量依赖性，抑制率分别为39.12%和48.30% ( P< 0.01) ，低剂量则无明显影响。见表1。
3.2 TZZ体外给药对大鼠血小板聚集的影响 与生理盐水对照组比较，TZZ 2，4 mg/ml明显抑制ADP诱导的血小板聚集，抑制率分别为26.21%，36.47%；对Thr诱导的血小板聚集产生类似的抑制作用。见表2。
表1 TZZ对大鼠血栓形成的影响（略）
与生理盐水组比较，**P＜0.01，n=10
表2 TZZ体外给药对ADP，Thr诱导大鼠血小板集聚的影响（略）
与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=7
3.3 TZZ灌胃给药对家兔血小板聚集的影响 大鼠灌胃给药，与生理盐水对照组比较，TZZ 0.75 g/kg，1.5g/kg对ADP,Thr 诱导的血小板聚集产生明显抑制。见表3。
表3 TZZ灌胃给药对ADP、Thr诱导家兔血小板集聚的影响（略）
与生理盐水组比较，* P＜0.01， **P＜0.01；n=7
4 讨论
本实验采用动-静脉旁路血栓形成模型，观察TZZ对血栓形成的影响。结果显示TZZ体内给药可剂量依赖性地减轻血栓的湿重，表明TZZ具有抗血栓形成的作用。体外和体内给药观察到TZZ对ADP，Thr诱导大鼠、家兔血小板集聚产生明显抑制作用，这一作用与其减轻血栓湿重作用呈平行趋势，提示TZZ的抗血栓作用与抗血小板聚集作用具有一致性，表明药物的抗血栓作用与抑制血小板聚集有关。实验选用了两种不同的致聚剂，代表了不同的血小板激活途径。Thr可以激活血小板，表现为伪足生成、颗粒成分减少［4］；TZZ可能抑制了血小板的这种活化过程。ADP在血小板膜上的受体与腺苷酸环化酶有关［5］ ，ADP通过抑制该酶而降低cAMP，从而使血小板聚集。TZZ是否通过腺苷酸环化酶-cAMP途径产生抗血小板聚集作用，有待于进一步研究。
【参考文献】
［1］ 罗 海,孙中吉.天麻素的基础药理研究和临床应用［J］.武警医学院学报, 2007,16(4):465.
［2］ 邱蓉丽,李 磷.中药女贞子化学与药理研究进展［J］.中药材，2007, 30(7): 891.
［3］ 孔祥英,龚培力. 蝙蝠葛酚性碱对血栓形成和血小板聚集的影响［J］. 药学学报, 2005, 40(10):916.
［4］ 阮长耿. 血小板基础与临床［M］. 上海:上海科学技术出版社,1989:118.
［5］ Gachet C, Hechler B, Léon C，et al. Activation of ADP receptors and platelet function［J］. Thromb Haemost，1997,78(1):271.