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       【摘要】 
       目的研究微波提取杜仲总黄酮的最佳工艺条件。方法利用微波技术通过正交实验方法，探讨杜仲总黄酮最佳提取工艺条件。结果因素相关性为:乙醇浓度＞提取温度＞提取时间＞料液比；杜仲总黄酮提取的最佳工艺条件为微波时间9min，乙醇浓度60%，提取温度80℃，料液比1∶10。结论微波技术具有提取效率高，提取速度快，能量消耗小等特点，应用于中草药有效成分提取的前景广阔。
       【关键词】  微波技术 杜仲 总黄酮 正交实验
       杜仲Eucommia ulmoides是杜仲科杜仲属植物，它含有绿原酸、桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、黄酮类物质、地普黄内酯、多糖等活性成分，具有补肝肾、强筋骨、降压、抗菌、利尿、抗肿瘤、抗衰老、增强免疫等药理作用, 被广泛用于药品和疗效食品的研究与开发中［1，2］。微波技术作为一种新兴的技术，近年在提取天然植物（特别是中草药）中的有效成分得到广泛应用［3，4］，与常规提取方法比较，具有选择性高、快速高效、溶剂消耗少、活性成分得率高、不产生噪音、适合于热不稳定物质等特点。黄酮类化合物是杜仲的主要有效成分之一，具有多种生物活性。杜仲黄酮类化合物含量的高低，是判断杜仲相关产品的重要指标［5］。近年来，对杜仲黄酮类化合物的提取方法研究是热点，本实验采用微波技术通过正交实验提取杜仲总黄酮。
       1  器材
       1.1  原料杜仲，购于湖南长沙康尔佳药店，粉碎过40目筛，80℃烘干备用。
       1.2  试剂与仪器乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、NaOH等，均为分析纯；芦丁对照品，购于中国上海医药化学试剂公司；721型分光光度计，MDS-6型温压双控微波萃取仪，粉碎机。
       2  方法
       2.1  标准曲线的绘制精密称取在105℃下干燥至恒重的芦丁对照样品10 mg，加80%乙醇溶解后定容至25 ml。分别移取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml置10 ml容量瓶中，各加5%亚硝酸钠0.3 ml，6 min后加10%硝酸铝0.3 ml，放置6 min，加4%氢氧化钠溶液4ml，以80%乙醇稀释至刻度，摇匀。在510 nm波长下，以空白试剂为参比测定吸光度，得到回归方程为：A＝0.102 8 C-0.011 2（R2=0.990 5）。
       2.2  样品黄酮含量的测定称取2.0 g杜仲粉，加入提取溶剂，放入MDS-6 型温压双控微波萃取仪提取。定时取出，过滤，滤液移至100 ml容量瓶，定容。分别用分光光度仪，按标准曲线制备各项处理，在510 nm波长测定吸光度，代入回归方程，计算总黄酮含量。
       2.3  最佳微波提取条件的确定分别称取2.0 g杜仲粗粉，根据预实验结果，选择提取温度，提取时间，乙醇浓度，料液比为实验因素，采用L9（34）按表1方法进行微波提取，提取液过滤，合并滤液，定容至100 ml，摇匀备用。
       2.4  对比实验
       
       煎煮法：称取杜仲粉10 g，加水200 ml，浸泡30 min，煮沸后，文火煎60 min，过滤，共煎煮两次，合并滤液，定容至100 ml，摇匀备用。
       
       连续回流提取法：称取杜仲粉10 g，加60%乙醇200 ml，水浴回流90 min，过滤，共提取两次，合并滤液，定容至100 ml，摇匀备用。
       表1  因素水平（略）
       3  结果
       3.1  正交实验结果见表2。
       
       由表2可知，影响杜仲总黄酮提取率的因素主次顺序为：乙醇浓度(C)>提取温度(A)>提取时间(B)>料液比(D)，杜仲总黄酮微波提取的最佳工艺条件为：A3B3C1D1，即提取温度为80℃，提取时间为9 min，乙醇浓度为60%，料液比1∶10；正交实验的方差分析(见表3)结果显示，乙醇浓度差异显著，对杜仲总黄酮提取率的影响起最主要作用，其它在此实验范围内没有显著差异，对测定结果的影响较小，与直观分析结果(见表2)相吻合。
       3.2  验证实验为考察正交实验得到优选工艺条件的稳定性，按其重复实验6次，杜仲黄酮提取率为2.13 mg/g，RSD＝0.833%(n＝6)，说明该工艺稳定可行。
       表2  正交实验结果（略）
       3.3  对比实验结果见表4。
       
       由表4可知，微波提取方法的黄酮提取率明显高于其它两种方法，且提取时间最短，提取溶剂用量最少。
       表3  正交实验方差分析结果（略）
       *表示显著影响,Δ表示影响不显著；F0.1(2,2)=9; F0.05(2,2)=19.0; F0.01(2,2)=99.0
       表4  提取方法比较（略）
       4  结论
          
       微波提取杜仲总黄酮的最佳条件为：提取温度80℃，提取时间9 min，乙醇浓度60%，料液比1∶10，此时黄酮得率最高，为2.130  mg/g。
       
       与传统的煎煮法和回流提取法相比，微波提取法具有提取时间短，效率高，而且提取物中杂质相对少等优点。煎煮法和回流提取法由于高温时间较长，很容易使杜仲中的蛋白质、糖类等极性大的物质溶出，造成提取液成分复杂，需要进一步提纯的工序，较微波提取要繁琐。
       
       微波提取法应用于中药有效成分的提取是非常有发展前途的。在耗材、提取所用时间、提取得率等方面都有传统方法不可比拟的优势。但目前大多集中于实验室的小批量研究，对于工业化生产的潜在价值，还需要进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］ 刘 宁, 栗克喜, 刘春山. 杜仲国内外研究进展［J］.西南国防医药,2002, 12(5): 449.
       
       ［2］ 辛晓明,冯 蕾,王 浩，等.杜仲的化学成分及药理活性研究进展［J］.医学综述,2007, 13(19):1507.
       
       ［3］ 张代佳,刘传斌,修志龙，等.微波技术在植物胞内有效成分提取中的应用［J］.中草药,2000,31(9): 附5.
       
       ［4］ Camel V. Microwave-assisted solvent extraction of environmental samples［J］.Trends in analytical chemistry,2000,19(4): 229.
       
       ［5］ 陈 伟,刘青梅,杨性民，等.微波技术在杜仲黄酮提取工艺中的应用研究［J］.食品科学,2006,27 (10):285.