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       【关键词】  开口箭；,,皂苷；,,抗炎
       摘要：目的评价开口箭总皂苷的抗炎活性。方法采用系统溶剂萃取，运用角叉菜胶所致小鼠足肿胀模型和脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮细胞模型对开口箭不同提取部位的抗炎活性进行研究。结果开口箭水溶性浸膏、正丁醇萃取物、石油醚萃取物对角叉菜胶所致小鼠足肿胀及肿胀足中前列腺素 E2含量升高均具有显著抑制作用（P＜0.01）。其总皂苷经大孔树脂吸附，30%，70%，95%乙醇洗脱，各洗脱部分对脂多糖刺激腹腔巨噬细胞产生 NO均有显著抑制作用（P＜0.01）。结论开口箭具有良好的抗炎作用，具有良好的开发利用价值。皂苷是其抗炎的重要物质基础之一。抑制炎症介质 PGE2，NO的产生是其作用机理之一。
       关键词：开口箭；  皂苷；  抗炎
       Study on Anti-inflammatory Activity of Total Saponin from Tupistra chinensis Bak.
       WANG Junzhi, ZOU Kun, XU Hongwei
       (Three Gorges University, Hubei Provincial Key Laboratory for Natural Product Research and Utilization,Yichang  443002,China)
       Abstract:ObjectiveTo evaluate the anti-inflammatory activity of total saponin from Tupistra chinensis Bak.MethodsCompared the anti-inflammatory activity of the different parts, adopted systematic solvent extraction,used the mouse"s foot swell model caused by carrageenin ,used the cell model that lipopolysaccharide excited preitoneal macrophage produced nitrogen monoxidum.ResultsWater-soluble extract,n-butanol extract and petroleum benzine extract inhibited the foot swell ,decreased the quantity of prostaglandin E2(P＜0.01).The total of saponin was absorbed by macroporous resin,then eluted by 30% alcohol,70%alcohol and 95% alcohol.Different parts decreased the quantity of nitrogen monxidum produced by peritoneal macrophage(P＜0.01).ConclusionTupistra chinensis Bak.has good anti-inflammatory activity and favorable exploitation value.Saponin is very important substance for anti-inflammation. The mechanism is to decrease the quantity of mediators of inflammation like prostaglandin E2,nitrogen monoxidum.
       Key words:Tupistra chinensis Bal;  Saponin;  Anti-inflammation
   
　　开口箭为百合科植物开口箭Tupistra chinensis Bak.的干燥根茎。味甘微苦，性寒，具有清热解毒、益气活血、散瘀止痛等多种功效，主治咽喉疼痛、劳热咳嗽、跌打损伤等［1］。开口箭使用方便，疗效显著，已有数百年的应用历史，在土家族医药中享有极高声誉，亦为神农架四大名药之一。为了更好地利用开口箭，为人类健康服务，我们对开口箭的抗炎活性进行了研究。
       　　1  材料
       1.1  药材开口箭，采自湖北省神农架林区，经三峡大学生物技术中心陈发菊副教授鉴定为T. chinensis Bak。
       1.2  药品甲醇（宜昌市红塔第二化工厂），石油醚（天津市天茂化学仪器供应站），醋酸乙酯（武汉市江北化学试剂厂），角叉菜胶（Sigma公司），阿司匹林（石家庄神威药业股份有限公司）。细胞培养板、小牛血清（上海华病美生物工程公司，PRMI1640培养基Gibco公司）。
       1.3  动物KM种雄性小鼠，体重18~22 g，华中科技大学同济医学部实验动物中心提供。合格证号：19-052。
       1.4  仪器药物粉碎机（河北黄骅市航天仪器厂）；多用强制渗漉罐（温州鸿驰化工医药设备有限公司），旋转蒸发仪（无锡市星海王生化设备有限公司）。电子天平（上海第二天平仪器厂），UV-2100分光光度计［尤尼柯（上海）仪器有限公司］，全自动多功能酶标仪（芬兰 Labsystem Multiskan MK3）。
       　2  方法与结果
       2.1  药物提取见图1。
       图1  药物提取流程（略）
       2.2  抗炎实验
       2.2.1  对角叉菜胶所致小鼠足肿胀的影响取 KM种雄性小鼠，随机分成6组，每组10只，分组灌胃给药（给药溶积为0.1 ml/10 g），连续3 d，末次给药30 min后断颈处死小鼠，剪下其后足，称重，计算肿胀率［（右足-左足）/左足×100%］。剪碎右后足没于2 ml生理盐水中，不时振摇，2 h后取出，将浸泡液离心，取上清液0.2 ml，加0.5 mol/L KOH-甲醇溶液0.5 ml，50℃水浴异构化20 min，加甲醇2 ml，于278 nm波长处测定OD值。以每克组织相当的吸收光密度值表示致炎足中前列腺 E2（PGE2）的含量。结果见表1。
       表1  开口箭对角叉菜胶所致小鼠足肿胀的影响（略）
       与模型组比较*P＜0.01，n=10
       结果表明：开口箭水溶性浸膏、正丁醇萃取物、石油醚萃取物对角叉菜胶所致小鼠足肿胀及肿胀足中前列腺素 E2含量升高均具抑制作用。醋酸乙酯萃取物作用不显著。开口箭石油醚萃取物量少，含有甾体皂苷等多种成分［2~4］。正丁醇萃取物量最大，其中主要含皂苷，我们对皂苷进行了精制，用大孔树脂吸附进行了初步分离，并进一步进行了实验。
       2.2.2  对脂多糖刺激腹腔巨噬细胞产生 NO的影响取 KM雄性小鼠6只腹腔注射1%的可溶性淀粉，每只1 ml。3 d后断头处死。腹腔注射 Hank"s液冲洗，收集腹腔巨噬细胞，进行细胞计数，用含20%新生小牛血清的 PRMI1640培养基调整细胞浓度至106 cell/ml。将细胞接种于48孔培养板中，每孔0.4 ml，37℃，5% CO2培养箱内培养3 h。分别加入不同药物50 μl，使终浓度为20 μg/ml,LPS（脂多糖）0.1 ml,培养24 h，收集上清液，-20℃保存。按一氧化氮（NO）试剂盒（酶法）说明书测定 NO的含量。结果见表2。
       表2  对脂多糖刺激腹腔巨噬细胞产生 NO的影响（略）
       表示与模型组比较，*P＜0.05，P＜0.01;n=8
       结果表明总皂苷经大孔树脂吸附,30%，70%，95%乙醇洗脱，各洗脱部分对脂多糖刺激腹腔巨噬细胞产生 NO均有一定的抑制作用。70%乙醇洗脱物效果更好。
       　3  讨论
       开口箭是土家族常用药物，亦为神农架四大名药之一，其漱口液治疗咽喉炎、扁桃体炎疗效显著［5］。开口箭资源丰富，疗效肯定，使用方便，值得进一步系统研究，开发利用。开口箭不同提取物均具有抗炎作用，表明其抗炎作用是多种成分协同作用的结果。临床主要用饮片热水泡服，因此水溶性成分对临床治疗具有重要作用。开口箭水溶性成分中含有多种甾体皂苷，是其抗炎作用的重要物质基础，但需要对皂苷进一步分离、鉴定和进行活性评价，寻找主要药效成分和表征性成分。开口箭良好的抗炎作用是其治疗咽喉炎、扁桃体炎的药理学基础之一，抑制 PGE2，NO等炎症介质的释放是其发挥抗炎作用的一种可能途径。
       　　参考文献：
       ［1］  江苏新医学院.中药大辞典，上册［M］.上海：上海科学技术出版社，1985：907.
       ［2］  黄  丽，廖全斌，邹  坤，等.开口箭中甾体皂甙元的含量测定［J］.三峡大学学报（自然科学版），2003，25（6）：562.
       ［3］  Pan ,W.B.;Chang,F.R.;Wu,Y.C.J.Nat .Prod.2000,63:861
       ［4］  Pan ,W,B.;Chang,F.R.;Wu,Y.C.Chem.Bull. 2000,48,1350
       ［5］  瞿士辉.土家族药开口箭漱口液临床应用治疗咽喉炎45例［J］.中国民族民间医药杂志,1999,(3):140.
       (三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室，湖北 宜昌  443002)