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       【摘要】 
       目的研究紫苏体外抗氧化活性。方法在测定紫苏各酚性成分含量基础上，采用体外抗氧化实验，研究其DPPH清除能力、总还原力和抗脂质体氧化能力。结果75%乙醇和50%丙酮提取物具有良好的抗氧化活性；紫苏提取物中总黄酮、原花色素含量与其抗氧化能力之间呈正相关。结论紫苏有显著的抗氧化活性，呈一定的量-效关系。其抗氧化活性可能与黄酮类化合物有关。紫苏提取物可作为一种良好的天然抗氧化剂应用于临床。
       【关键词】  紫苏 总黄酮 原花色素 抗氧化活性
       紫苏为唇形科紫苏属Perilla frutescens (L.) Britt.一年生草本植物，是传统的药食两用中药，在江浙各地均有种植，资源丰富，价格低廉。其主要含有紫苏苷、原花色素、紫苏素、木犀草素和芹黄素等多酚类化合物，具有抗炎、镇痛、抗衰老、清除和抑制自由基等作用［1］。有研究表明，紫苏叶中含有丰富的黄酮类化合物，具有清除自由基、抗衰老作用；紫苏的水溶性色素亦具有一定的抗氧化活性［2～3］。目前国内外研究主要集中在紫苏籽挥发油成分上，对紫苏尤其是紫苏的酚性成分研究较少。本文通过体外抗氧化实验，确定紫苏有效部位抗氧化活性及酚性成分组成，为其临床应用及各种成分的抗氧化药理作用研究提供理论依据。
       1  仪器及试剂
       1.1  仪器BS224S精密电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司),TU-1900双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），KQ-250DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
       1.2  试剂和材料紫苏采自浙江杭州，经浙江中医药大学资源鉴定教研室姚振生教授鉴定为唇形科紫苏属植物Perilla frutescens (L.) Britt.，粉碎后过40目筛。芦丁（批号100080-20030）、儿茶素（批号877-200001）、没食子酸（批号110831-200302），均购自中国药品生物制品检定所；大豆卵磷脂（批号2075523）、DPPH（批号095K1452），均购自sigma公司。其他试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  供试品溶液的制备取5 g紫苏药材粉末，分别按表1加入20倍量提取溶剂，70℃水浴提取2次，1 h/次，合并滤液，浓缩至干，临用前配成所需浓度，作为供试品溶液。
       2.2  紫苏酚性物质的含量测定［4～6］采用FeCl3-K3Fe(CN)6比色法，以没食子酸为标样制作标准曲线，测定紫苏中总酚酸含量；采用香草醛/硫酸比色法，以儿茶素为标样制作标准曲线，测定其原花色素含量；采用碱式铝盐比色法，以芦丁为标样制作标准曲线，测定其总黄酮含量。
       2.3  抗氧化活性实验［7～9］
       2.3.1  清除自由基活力取提取物适量，加入25 μg/ml的DPPH甲醇溶液3.5 ml，快速混匀，30 min后测定在516 nm处的吸光度。计算DPPH清除率：清除率(%)=（1- ［DPPH］t/［DPPH］t=0）×100%。
       
       其中［DPPH］t表示30 min时体系的吸光度；［DPPH］t=0表示0时刻体系的吸光度。
       2.3.2  还原力测定取提取物适量，加入磷酸缓冲液（0.2 mol/L，pH 6.6）2.5 ml及1%铁氰化钾溶液1.5 ml，50℃保温20 min后，加入10%三氯乙酸1.5 ml，混匀后取2.5 ml，加入蒸馏水2.5 ml及0.1%三氯化铁0.3 ml。在700 nm处测定反应液吸光度值。吸光度值越大，表示还原力越强。
       2.3.3  脂质体氧化法将大豆卵磷脂分散于去离子水中，20 kHz超声波处理30 min，周围以冰水冷却，制得大豆磷脂浓度为0.8%的人工脂质体。取20 ml脂质体，加入提取物，以10 mmol乙酸铜20 μl催化氧化反应，混匀后放置于回转式恒温水浴振荡器上，于暗处37℃、100 r/min进行开口氧化实验，每隔一定时间测定共轭二烯氢过氧化物及丙二醛生成量。
       
       共轭二烯氢过氧化物(CD)的测定：取1 ml氧化液，溶于3 ml甲醇，于234 nm处测定其吸光度，以摩尔消光系数ε=26 000 L·mol-1·cm-1计算脂质体体系中共轭二烯氢过氧化物的生成量（mmol/kg卵磷脂）。
       
       丙二醛（MDA）的测定：取1.5 ml氧化液，加入1 ml MDA溶液，测定在532 nm处的吸光度，以摩尔消光系数ε=1.56×105 L·mol-1·cm-1计算丙二醛的生成量（mmol/kg卵磷脂）。
       
       抗氧化效果用抑制率表示：抑制率(%)=（1-处理氧化产物生成量/空白氧化产物生成量）×100%
       
       结果见表1及图1～4。
       表1  紫苏酚性物质组成及抗氧化作用结果（略）
       图1  紫苏提取物的还原力
       图2  紫苏提取物对DPPH的清除作用（略）
       图3  丙二醛的生成（略）
       
       由表1和图1～4可知，紫苏各提取物均具有较强的抗氧化活性，可提高自由基的清除率，促进Fe3+的还原和抑制卵磷脂氧化产物的生成。其中，75%乙醇提取物自由基的清除率最强，50%丙酮提取物的还原力最强，两者均可显著抑制自由基的产生，延长CD生成的峰值时间，减少同期各时段MDA的生成量。
       图4  共轭二烯氢过氧化物的生成（略）
       2.4  酚性物质组成与抗氧化活性相关性分析以原花色素(X1)、总黄酮(X2)和总酚酸(X3)含量为横坐标，还原力(Y)为纵坐标，采用SPSS11.5软件对表1结果进行线性关系考察，得方差分析结果(见表2)和回归标准残差正态P-P图（图5）。
       表2  方差分析表（略）
       由表2和图5可知，P<0.01，自变量(Xn)与因变量(Y)服从正态分布，证明紫苏各酚性物质含量与还原力之间存在显著的线性关系。进而作多元线性回归分析，得回归系数分析。结果见表3。
       图5  回归标准残差正态P-P图（略）
       表3  回归系数分析（略）
       由表3可知，紫苏酚性物质含量对还原力的总体回归方程为：Y=0.160-0.534X1+0.024 92X2+0.018 29X3。
       
       为消除度量单位的影响，进一步采用标准化计算，得标准化回归方程：Y=-0.491X1+0.468X2+0.056X3。
       
       在95%可信区间内，线性相关系数r=0.982 8。证明回归方程真实、可靠，具有统计学意义。可用于替代实验点对实验结果进行分析，并对回归方程各项作显著性检验。
       
       其中，总酚酸含量对还原力的影响P>0.05，无显著性差异。而原花色素及总黄酮含量P<0.05，存在显著性差异，具有统计学意义。对还原力与紫苏提取物进行线性关系考察。结果见图6～7。原花色素及总黄酮含量与还原力具有较强的相关性，相关系数分别为0.960 6和0.955 5。
       图6  紫苏提取物抗氧化活力与原花色素含量的关系（略）
       图7  紫苏提取物抗氧化活力与总黄酮含量的关系（略）
       
       同法，对紫苏提取物与自由基清除率、CD抑制率及MDA抑制率进行相关性研究，结果表明，总黄酮及原花色素含量与自由基清除率之间相关系数分别为0.827 1和0.807 3，具有一定相关性。其余相关性均较差（R2≤0.6，P>0.10），无统计学意义。
       
       因此，紫苏体外抗氧化作用主要可能与其总黄酮及原花色素含量有关，并且其抗氧化作用随着提取溶剂极性增大而增强。
       3  讨论
          
       自由基是生物体生化反应的普遍介质。现代研究表明，许多疾病如心脑血管疾病、肝硬化、癌症以及人体衰老等过程都与自由基的作用有关［10］。目前在医疗和食品领域使用较多的是合成抗氧化剂，如BHT、BHA等，对生物体有潜在的毒副作用。黄酮类化合物是一种天然的抗氧化剂，具有抗衰老、增强机体免疫力的作用。其主要通过酚羟基与自由基进行抽氢反应生成稳定的半醌自由基，从而中断链式反应，达到抗氧化作用，且高效、低毒［11］。因此，越来越受到国内外医药工作者的重视。
       
       现代研究表明，紫苏中黄酮类化合物具有抗炎、镇痛、抗衰老、清除和抑制自由基等作用,几乎可与人工合成抗氧化剂BHA 媲美,且安全无毒副作用［12］。本研究通过体外抗氧化实验，考察紫苏各提取部位DPPH清除能力、总还原力和抗脂质体氧化能力，并对各酚性成分进行含量测定。实验表明，75%乙醇和50%丙酮提取物具有良好的抗氧化活性；其中总黄酮和原花色素含量与自由基清除率、还原力呈正相关，黄酮类化合物可能是其抗氧化作用的主要物质基础，可为紫苏的开发利用及其药理作用机制的研究提供参考。
       【参考文献】
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