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       【关键词】  漏芦；,,衰老；,,小鼠
       摘要：目的研究漏芦乙醇提取物对D半乳糖致衰老小鼠影响。方法D半乳糖制作小鼠衰老模型，比色分析法测定小鼠大脑皮质超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、单胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）的活性及丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量，同步观察电子显微镜下的组织学变化。结果漏芦提取物可提高D半乳糖所致大鼠脑组织SOD活性、降低MDA含量，抑制MAO活性；电子显微镜观察到漏芦提取物可以减轻D半乳糖导致的线粒体等超微结构的改变。结论漏芦提取物对D半乳糖致衰老小鼠具有抗衰老作用。
       关键词：漏芦；  衰老；  小鼠
       Antisenile Effect of  Rhaponticum uniflorm（L.）DC.  Extract on Dgalgctose Inducing Senile in Rats
       PIAO Long， ZHANG Xuewu， JIN Xiangzi
       （Affiliated Hospital, Yanbian University, Yanji 133000, China;  Medical College, Yanbian University, Yanji 133000, China）
       Abstract：ObjectiveTo study the alcohol extract of Rhaponticum uniflorm（L.）DC.  in the senescent mice induced by Dgalactose.MethodsThe senescent mice induced by Dgalactose; the activities of SOD, MAO and the content MDA were measured with colorimetric method，and the histological changes were synchronously observed by electronic microscope. Results Rhaponticum uniflorm（L.）DC. extract significantly increased the  activity of SOD in brain tissue, decreased the content MDA, inhibited the MAO activity. It was observed under microscope that: Rhaponticum uniflorm（L.）DC.  could retrieve the degeneration of mitochondrion.ConclusionRhaponticum uniflorm（L.）DC.  extract has antisenile effect on Dgalgctose induced senescent in mice.                
       Key words：Rhaponticum uniflorm（L.）DC. ;  Senescence;  Mice
   
　　漏芦Rhaponticum uniflorm（L.）DC.为菊科多年生草本植物，产于东北、华北和西北诸省区，药源丰富。早在《神农本草经》中就有“下乳汁，……轻身益气、耳目聪明、不老延年”的记载。近年来研究发现漏芦有提高细胞免疫［1］、抗动脉粥样硬化［2］、抗炎［3］等作用。本实验观察漏芦对D半乳糖致大鼠衰老模型，通过生化指标检测及电子显微镜的观察，阐明漏芦对大脑衰老的保护作用，为进一步开发应用漏芦提供一些实验依据。
       1  材料与方法
       1.1  药物漏芦采自吉林省长白山，将漏芦切碎后，用90%乙醇回流提取（1 h）3次，温度100℃，合并3次滤液，减压浓缩，得漏芦乙醇提取物（1 g漏芦有效成分相当于7.3 g漏芦生药）。
       1.2  试剂D半乳糖系上海试剂二厂产品（批号为980218）；SOD、MAO、MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所；其他试剂均为国产分析纯。
       1.3  仪器 JEM1200透射电镜，UV2501PC型紫外分光光度计，722型分光光度计，旋转蒸发仪，电热恒温水浴箱。
       1.4  动物昆明种小鼠（雌雄各半），体重为18~22 g，由延边大学医学院动物科提供。
       1.5  方法
       1.5.1  衰老小鼠模型的制备及药物投入  60只小鼠随机分为正常组，模型组，给药组、阳性对照组。各组动物在实验前禁食12 h进行实验，给药组分别灌服漏芦乙醇提取物7.12，3.56，1.78g/(kg・d)1、阳性对照组灌服脑复康0.4 g/kg及等体积蒸馏水。除正常组外，给药组和模型组小鼠每天皮下注射D半乳糖0.12 mg/kg，连续40 d。第41天处死小鼠，迅速取出大脑，进行组织学观察。
       1.5.2  观察指标超微结构观察  左侧小块中央回皮质1 mm×1 mm×1 mm，用0.1 mol/L磷酸缓冲液冲洗3次，经3%戊二醛固定2 h，1%锇酸后固定1 h，梯度丙酮脱水，Epon812环氧树脂包埋,做超薄切片，铀铅双重染色后，在JEM1200透射电镜下观察并拍片。生化指标检测  剩余脑组织除去丘脑、小脑和延髓，以pH 7.4的磷酸缓冲液冰浴中制成匀浆液后，2 000 r/min离心10 min，取上清液，用比色分析法检测SOD、MAO的活性及MDA的含量。
       1.6  统计学处理应用SPSS10.0统计软件进行方差分析。
       　2  结果
       2.1  超微结构观察正常组细胞器形态基本正常，模型组神经元胞体内溶酶体大小和形态不规则，线粒体出现肿胀变性和空泡样变，且核膜不规则；给药组、阳性对照组锥体细胞内溶酶体、LPF大小和形态较规则，线粒体轻度肿胀，核膜较规则。
       2.2  生化指标检测 结果见表1。漏芦提取物对D半乳糖导致的大鼠脑组织的SOD活性的降低有明显的升高作用(P<0.05)，而对MAO活性、MDA含量的升高有明显的降低作用(P<0.05)。
       表1  漏芦提取物对D半乳糖致衰老大鼠脑组织SOD，MAO活性及MDA含量的影响（略）
       与模型组比较，*P<0.05；n=10
       　　3  讨论
       衰老是生命过程中正常而又复杂的生物过程，有关衰老的学说很多，如代谢废物学说、免疫功能衰退学说、基因程序学说、自由基学说等，每种学说都有一定的实验依据，而自由基学说与其它学说有直接或间接的关系，受到众多实验的支持。自由基学说认为引起人体衰老的主要原因是人体细胞代谢过程中不断产生的自由基，因其具有高度的化学活性，并能与活细胞的大部分发生反应，损伤DNA分子，造成键的断裂，使细胞死亡或发生突变。SOD作为体内重要的抗氧化酶，它能促使超氧化物阴离子自由基变为过氧化氢和氧离子，从而减少脂质过氧化反应，使机体细胞和组织免受损害。MDA是过氧化脂质的分解产物之一，它能使膜交联和聚集，并最终导致DNA的交联，引起突变，因此通过测定MDA可以间接反应体内自由基产生和老化程度。MAO在正常肝、肾、大脑、脑干等区活性较强，其定位于线粒体外膜及线粒体嵴，可催化单胺氧化脱氨基，参与神经元去甲肾上腺素、5羟色胺等递质的分解［4］。既往研究表明，D半乳糖可致SOD活性降低，MAO活性增高等，从而引起大脑功能衰退［5］。本实验研究结果与其相符。本实验结果表明模型组与正常组、草苁蓉组、人参皂甙组锥体细胞SOD活性、MDA含量及MAO活性均有显著差异，说明漏芦能使亚急性衰老大鼠的脑组织的SOD活性增强，降低MDA的含量，抑制MAO活性。本实验超微结构观察表明，模型组锥体细胞内溶酶体、脂褐素大小和形态不规则，线粒体出现肿胀变性和空泡样变，且核膜不规则；而漏芦组锥体细胞内线粒体轻度肿胀，核膜较规则。总之， 漏芦作为一种抗衰老的药物，具有广泛的开发前景，对其确切的作用机理今后应从其有效成分中进一步研究。
       　　参考文献：
       ［1］  龚树生，阎汝南，党  毅，等. 白何首乌总磷脂及漏芦蜕皮甾酮对小鼠细胞免疫的影响［J］.中华老年医学杂志，1983，2（4）：193.
       ［2］  刘晓青，卢咏才，郭肇铮，等. 漏芦对鹌鹑动脉粥样硬化形态学变化的影响［J］.中国医药学报，1989，4（3）：22.
       ［3］  邹莉波，于庆海. 祁州漏芦抗缺氧作用及机制的研究［J］.中国药理与临床，1993，6（3）：30.
       ［4］  Zhang XW, Zhang XB, Quan JS, et al. Inhibitory effect of Sorbaria sorbifolia on DENinduced precancerous hepatic foci and its antioxidative activies in rats［J］.china j cancer prev treat, 2003，10(11):1137.
       ［5］  Giardino R, Giavaresi G, Fini M, et al. The role of different chemical modifications of superoxide dismutase in preventing a prolonged muscular ischemia/reperfusion injury［J］. Artif Cells Blood Substit Immobil Biotechnol,2002，30:189. 
       基金项目：延边大学大学自然科学基金资助项目（No.200405）
       (延边大学医学院附属医院， 吉林 延吉  133000；   延边大学医学院，吉林 延吉   133000）