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       【摘要】 
       目的测定了益津降糖口服液中人参皂苷Rg1及Re的含量。方法用高效液相色谱法，以ODS C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）为固定相，乙腈-0.05%磷酸溶液（99∶400）为流动相，检测波长为203 nm，流速为1.0 ml·min-1。结果人参皂苷Rg1在0.16～6.4 μg范围内，人参皂苷Re在1.225～4.9 μg范围内呈现良好线性关系，相关系数Rg1：r = 0.999 9；r=0.999 6。平均加样回收率Rg1=96.63%；Re=95.20%，Rg1的RSD为1.34%（n=6）；Re的RSD为1.14%（n = 6）。结论 方法简便、准确、重复性好。
       【关键词】  益津降糖 人参皂苷Rg1 人参皂苷Re 高效液相色谱法 含量测定
       益津降糖口服液是吉林敖东药业集团延吉股份有限公司生产，处方由人参、白术、茯苓、仙人掌、甘草与几种辅料组成。具有健脾益气，生津止渴。用于气阴两虚引起的消渴病等症。方中人参含有多种皂苷类，生物碱类化合物，其中人参皂苷为该制剂的主要活性成分,参照2005年版《中国药典》（Ⅰ部）“人参叶”项下条件［1］及相关文献［2］。采用高效液相色谱法，以乙腈、磷酸为流动相，测定其含量，该法简便、准确、精密度高、重现性好，为控制质量标准提供了可靠的依据。
       1  器材
       1.1  仪器
       日本岛津LC10Avp系列高效液相色谱仪,包括DAD检测器，Chem Station色谱工作站(美国Agilent公司)；AE163型十万分之一电子分析天平（瑞士Mettler公司）。
       1.2 试药
       益津降糖口服液由吉林敖东药业集团延吉股份有限公司提供（批号060601，060602，060603，061201，061202，061203，070501，070502，070503，070504），对照品，人参皂苷Re（0754200216），人参皂苷Rg1（0703－200322）均由中国药品生物制品检定所提供；甲醇，乙腈为色谱纯，水为纯净水，其它试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件 
       色谱柱：Kromasil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈0.05%磷酸溶液（99∶400）；检测波长203 nm；柱温40℃；流速1.0 ml/min；灵敏度0.08AUFS。
       
       检测波长的选择：用UV2401PC型紫外分光光度仪，对人参皂苷Re对照品，在 200～400 nm波长下进行紫外扫描，结果在 20 3nm波长处有最大吸收，因此选择 203 nm为检测波长。理论塔板数按人参皂苷Rg1，人参皂苷Re峰计算均不低于2 000。
       2.2 对照品溶液的制备 
       精密称取经110℃干燥至恒重人参皂苷Rg1及Re对照品各10.1 mg，加甲醇溶解，并稀释至刻度，制成每毫升中各含0.3 mg的人参皂苷Rg1及Re混合溶液，即得。
       2.3 供试品溶液的制备
       精密量取供试品5 ml，加水15 ml摇匀，加氯仿萃取2次，20 ml/次，弃去氯仿层，水层用水饱和正丁醇萃取4次，20 ml/次，合并正丁醇液，正丁醇层用氨试液洗涤2次，20 ml/次，洗涤液层再用水饱和正丁醇20 ml振摇提取1次，合并前后两次正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解并移至 5 ml 量瓶中 ，加甲醇至刻度，摇匀，用 0.45μm 微孔滤膜过滤，即得。
       2.4 阴性供试品溶液的制备 
       按处方比例制备不含人参皂苷的阴性样品，按“2.3”项下方法制备成阴性供试品溶液。
       2.5 系统适应性实验 
       分别精密吸取“2.2”，“2.3”，“2.4”项下溶液各10 μl，按“2.1”项下色谱条件进样。结果，阴性供试品溶液摘在与人参皂苷Rg1及人参皂苷Re对照品相同保留时间处未见明显色谱峰，故认为辅料等对主药的测定无干扰。色谱见图1。
       2.6 线性范围的考察 
       精密量取人参皂苷Rg1（0.320 mg/ml），人参皂苷Re（0.245 mg/ml）对照品混合溶液5，7.5，10，15，20 μl注入高效液相色谱仪中。测定其峰面积，人参Rg1峰面积分别为590523，888 502，1 189 789，1 815 921，2 400 446。并以峰面积值（A）对进样量（C）进行回归，得标准曲线方程，以峰面积值（A）对进样量（C）作图，得一直线，A = 121 258.093 1C- 17 431.871，r = 0.999 9。 人参Re峰面积分别为472 305，700 232，938 757，1 418 136，1 835 231。以峰面积值（A）对进样量（C）作图，得一直线，A = 91 613.410 34C- 19 379.181 03，r=0.999 6。以上结果表明，在0.16～6.4 μg范围内，人参Rg1峰面积值与进样量有良好的线性关系；在1.225～4.9 μg范围内，人参Re峰面积值与进样量有良好的线性关系。 
       2.7 精密度实验
       精密量取样品（批号060601）供试液10 μl，重复进样5次，测定其峰面积，人参皂苷Rg1的峰面积分别为914 848，916 945，905 253，927 827，913 214。人参皂苷Re峰面积分别为528 608，521 613，519 375，520 186，513 891。结果人参皂苷Rg1，人参皂苷Re的RSD分别为0.89%，1.02%，表明仪器精密度较好。 
       2.8 稳定性实验
       取样品（批号060601）供试液分别于0，2，4，6及8 h，分别进样10 μl，测得样品中人参皂苷Rg1峰面积值分别为914 840，927 827，91 2315，92 118，910 423，平均值为917 105。Re峰面积值分别为528 608，520 186，516 530，518 912，520 475，平均值为520 942。RSD分别为0.76%，0.88% 。实验结果表明，样品供试液在8 h内稳定性良好。 
       2.9 重复性实验
       按拟定的含量测定方法，对同一批供试品（060601）分别制备样品供试液5份，按“2.3”项下方法制备。并按“2.1”项下色谱条件进样10μl,测得峰面积值人参皂苷Rg1分别为910 852，909 816，919 572，920 545，912 256，平均值为914 608。人参皂苷Re峰面积值分别为509 402，513 273，509 341，517 554，509 373，平均值为511 789。人参皂苷Rg1的RSD =0.55%；人参皂苷Re的RSD=0.71%；人参总皂苷含量的RSD=0.69%，表明本方法重复性良好。
       2.10 回收率实验 
       精密量取6份已知含量的供试品（批号060601）2.5 ml，分别加入人参皂苷Rg1（0.65 mg/ml）、人参皂苷Re（0.35 mg/ml）对照品溶液各取0.8 ml，1.0 ml，1.2 ml按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，以下列公式计算回收率。结果见表1。结果表明，回收率在95%～100% 之间，加样回收良好。表1  回收率实验结果（略）
       2.11  空白实验 
       按处方比例及工艺自制不含人参的空白供试品，按供试品溶液的制备方法制备，测定，记录色谱图，在对照品人参皂苷Rg1，人参皂苷Re的保留时间处未出现色谱峰，因此不干扰测定。
       2.12  样品含量测定 
       依上述方法测定3批益津降糖口服液中人参皂苷Rg1及Re的含量。结果见表2。表2  样品含量测定结果（略）
       3 讨 论
       本法在样品提取方法中曾试用过正丁醇合并液洗涤、氨试液洗涤、1％氢氧化钠试液洗涤、以及通过D101树脂等几种方法，实验结果表明用氨试液洗涤的样品含量最高，峰形尖锐。样品回收率高。
       提取次数考察：按照“2.3”项下的测定方法，分别用水饱和正丁醇提取1，2，3，4，5，6次，依次测定。测定结果分别为0.210，0.311，0.325，0.338，0.339，0.337 mg/ml，结果表明提取4次以后，人参皂苷Rg1及Re总皂苷基本提尽。
       本法在除脂溶性杂质萃取过程中曾试用过三氯甲烷、乙醚、二氯甲烷等三种溶剂萃取，实验结果表明，用乙醚、二氯甲烷萃取时易产生乳化层，三氯甲烷萃取分层效果好，阴性无干扰。
       
       流动相的选择：本文分别用乙腈-0.05mol/ml磷酸二氢钾（15∶29），乙腈-水-甲酸（25∶75∶1），甲醇-0.1%甲酸水溶液（30∶70），乙腈-0.05%磷酸溶液（99∶400），这4种流动相进行试验，结果表明流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液（99∶400）时，效果最佳，柱压低，峰型尖锐，阴性无干扰。综上所述，本法操作简单、快速、准确可靠，可用于益津降糖口服液的质量控制［3］。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2005：8.
       
       ［2］伍毅. 高效液相色谱测定复方田七滴丸中人参皂苷Re1含量［J］.中国药房，2005，16（22）：1737.
       
       ［3］罗云，金城，李果，等.高效液相色谱法同时测定姜参胶囊中人参皂苷Rg1及Re的含量［J］.中国药房，2007，6（18）：451.