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       【摘要】 
       目的为充分利用马鞭草植物资源，避免资源的浪费，探讨马鞭草黄酮类化合物的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从马鞭草中提取黄酮类化合物，对所提取的黄酮类化合物进行验证，并用紫外分光光度法测定其含量。结果测得马鞭草样品中黄酮类化合物的总含量为8.36 mg/g，回收率为99.56%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取马鞭草中黄酮类化合物的有效途径。
       【关键词】  超声波提取 马鞭草 黄酮类化合物
       Extraction Technology of Flavonoids from Verbena officinalis L.by the Supersonic Wave Method
       BIAN Jiesong,  DENG Bin,  WANG Cunchang,ZHANG Aihua,LIU Zhiwei
       1.Department of Chemistry and Life Science, Xiangnan University, Chenzhou, Hunan, 423000, China; 2.College of Chemistry and Chemical Engineering, Jishou, University, Jishou Hunan 416000, China;3.Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co.Ltd,Taizhou 318000, China
       Abstract：ObjectiveTo study the methods of extraction and identification of  flavonoids from verbena officinalis L. MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Verbena officinalis L. with ultrasonic wave. Spectrophotometry was used to determine and identify the flavonoids from Verbena officinalis L. Hunan.ResultsBy this method the contents of the flavonoids from Verbena officinalis L. was 8.36mg/g and the rate recovery was 99.56 %.ConclusionThis method is a pure physical process, and has not any pollution. It is an ideal way to extract the flavonoids from Verbena officinalis L.
       Key words：Ultrasonic wave treatment; Verbena officinalis L.; Flavonoids
       
       马鞭草Verbena officinalis L.又叫铁马鞭、自马鞭、疟马鞭，皆以穗类鞭鞘而得名。为马鞭草科(Verbenaceae)多年生草本植物马鞭草的全草或根。常生于河岸、草地、荒地、路边、田边及草坡等处，全国各地均有分布［1］。体内富含糖、淀粉、蛋白质、氨基酸、维生素、矿物质、黄酮、类胡萝卜素等许多活性成分［2］。药用部分为其全草或带根全草，作为一种传统的中草药，具有清热解毒、截疟杀虫、治痢、利水消肿、通经散瘀等功效，被广泛用于治疗伤风感冒、水肿、痢疾、黄疸等病症［3］。现代研究还发现马鞭草具有抗癌［4］、抗早孕［5］以及免疫调节作用［6］。
       
       有文献报道马鞭草中黄酮类化合物的提取方法采用乙醇提取［2］， 但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道［7～9］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［10］。超声技术应用于提取马鞭草中黄酮类化合物的研究尚未见报道,本文报道用超声波提取马鞭草黄酮类化合物及鉴别。
       1 材料
       1.1 仪器  
       UV-752紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；AL104 电子天平（Mettler-Toledo仪器公司）；KQ-500DE型医用超声波清洗机（昆山超声仪器有限公司）；F120型粉碎机（北京中仪金叶科技有限公司）；pH213型酸度计（上海雷磁仪器有限公司）；SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵（郑州市亚荣仪器有限公司）。
       1.2 试剂　
       95%乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、三氯化铝、镁粉、正丁醇、氨水、盐酸、冰醋酸、乙酸镁、醋酸乙酯(均为AR)；芦丁标样(含量≥98%)由广东药学院药物化学研究室提供；马鞭草样品采于湖南省吉首大学校园内，并经湖南省药材公司李树胜执业药师鉴定为Verbena officinalis L.全草。
       2 方法
       2.1 黄酮类化合物成分提取　
       取新鲜马鞭草，洗净，晾干，粉碎。精密称取马鞭草粉末10.0 g，加100 ml 95%乙醇，超声波提取2 h，抽滤。滤渣再加100 ml 95%乙醇，超声波提取2 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5～8 ml为止，放置100 ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，得待测样品溶液。
       2.2 测定方法依据　
       以芦丁为对照品测定马鞭草中黄酮类化合物的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
       3  结果
       3.1  定量实验-黄酮类化合物的含量测定
       3.1.1  波长的选择　
       取样品溶液适量，在0.5 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在400～700 nm波长范围测定螯合物的吸光度，螯合物于502 nm 波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
       3.1.2 标准曲线的绘制　
       分别精密吸取芦丁对照液 (0.10mg/ml) 0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.50 ml，摇匀，静置5 min；再加10%硝酸铝溶液0.50 ml，摇匀，静置5 min；再加4%氢氧化钠溶液5.00 ml，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15 min，以试剂作空白，于502 nm处测吸光度。结果见表1。根据表1得回归方程：A=-1.233 6×10-2+15.011C，r=0.999 8。表1  紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度值（略）
       3.1.3 提取物含量的测定　
       精密吸取样品液0.5 ml，置10 ml容量瓶，按标准曲线的制备操作测定吸光度A=0.615，根据回归方程：A=-1.233 6×10-2+15.011C，计算样品中黄酮类化合物的含量为8.36 mg/g。
       3.1.4 回收实验　
       精密量取样品液1.0 ml，加入标准芦丁对照品1.0 ml (0.1 mg/ml)，同“3.1.3”方法操作测定吸光度，求出平均回收率为99.56%。
       3.2 定性实验-黄酮类化合物的鉴别
       3.2.1 颜色反应　
       乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁（指质量浓度）的甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。
       盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液2 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴(1次加入)，在泡沫处呈紫红色。
       三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝（指质量浓度）的乙醇溶液，吹干，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。
       浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏2.0 min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。
       紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。
       3.2.2 纸层析　
       取样品溶液15 μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5 为展开剂，上行展开3.0 h，取出晾干。喷1%氯化铝的乙醇溶液，吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。
       4 讨论
       黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分，具有很高的药用价值。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它衍生物还有黄烷醇、查尔酮、双氢黄(醇)、双黄酮、异黄酮、花色苷、橙酮及新黄酮类等［10］。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，进入脂肪组织，进而体现出诸多功能，如消除疲劳、保护血管、防止动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抵抗脂肪氧化、抗击衰老、活化大脑及其他脏器细胞等功能。此外，黄酮类化合物还具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［11］。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然、低毒、绿色、可再生等特点备受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用已越来越引起人们的注目。我国马鞭草资源十分丰富，分布也极为广泛。本实验结果表明，马鞭草体内富含黄酮类化合物，采用超声波乙醇浸提法，可以达到省时、高效、节能的目的，提取效率高于传统方法，样品的平均回收率达99.56 %；而且利用该法提取、纯化得到的黄酮类化合物，其产率和纯度均很高；再者本方法采用全物理过程，无任何污染，因此是一条理想的提取黄酮类化合物途径，具有广阔的应用前景。
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