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       【摘要】 
       目的通过对多个产地不同批次麻黄药材质量进行分析比较，确定符合课题需要的麻黄药材，保证制剂疗效稳定和质量可控，并为该新药质量控制提供检测方法。方法 采用薄层法对药材进行初步筛选，用液相法对互为差向异构体的两成分麻黄碱、伪麻黄碱进行含量测定。结果不同产地不同批次麻黄药材中麻黄碱及伪麻黄碱含量差异较大，麻黄碱与伪麻黄碱含量不是成正比关系。结论根据中医辨证论治理论使用麻黄药材的方剂，应根据不同需求选用不同产地的麻黄。该实验经过系统的方法学考察，所建立的含量测定方法具有操作简便、稳定、专属、可重复的特点，可用于麻黄药材及含麻黄复方制剂的质量控制。
       【关键词】  麻黄 麻黄碱 伪麻黄碱 质量控制
        喘平复方制剂是广东药学院中药开发研究所自主研发的新药，主治支气管哮喘、喘息性支气管炎。方中主药麻黄，具有发散风寒、宣降肺气及平喘止咳作用。据现代药理研究，麻黄主要有效成分为麻黄碱，具有兴奋呼吸中枢及舒张支气管平滑肌、解除支气管痉挛的作用［1］。在研究中发现，麻黄药材按照《中国药典》2005年版Ⅰ部麻黄含量测定项下检测合格后使用，但是不同产地麻黄对药效影响较大。大量文献报道表明麻黄草中含有两种主要生物碱——麻黄碱和伪麻黄碱，它们化学结构互为差向异构体，但药理作用有所不同，作用强度也有差异［2］。为了保证喘平复方制剂疗效稳定，质量可控，本课题组用薄层色谱法和高效液相色谱法对不同产地麻黄药材的质量进行了系统的研究，筛选符合喘平复方制剂功效要求的麻黄药材。
       1  仪器与试药
       麻黄药材从广州市药材公司、清平市场、药店等采购，经广东药学院李书渊教授鉴定为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinica Stapf. 的草质茎。盐酸麻黄碱对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：171241200404），盐酸伪麻黄碱购自国家麻醉品实验室（批号：1237200103）。甲醇为色谱纯试剂，水为三蒸水，其它试剂均为分析纯。薄层色谱用硅胶G（浙江台州路桥四甲生化塑料厂），高效液相色谱仪（美国Agilent 1100 型组合式全自动取样），色谱柱phenomenex C8柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），电子分析天平(Sartorius BP211D)。
       2 方法与结果
       2.1 对照品溶液制备取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品，精密称定，分别加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品1，2溶液。
        
       2.2 供试品溶液制备取麻黄药材，粉碎，过40目，取粉末1 g，加浓氨水数滴，再加三氯甲烷10 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 ml充分振摇，滤过，滤液作为供试品溶液。
       2.3 薄层层析取对照品溶液和供试品溶液各5 μl，点于同一硅胶G薄层板(10 cm ×10 cm)上，以醋酸乙酯甲醇正丁醇浓氨试液（10∶1∶0.5∶0.5）为展开剂，展开至约9 cm 时，取出，晾干，喷茚三酮试液，在105 ℃加热至斑点清晰。于可见光下检视。色谱图见图1。
       
       《中国药典》2005版Ⅰ部麻黄项下的展开系统是：三氯甲烷甲醇浓氨试液（20∶5∶0.5）。结果见图2。该展开条件麻黄碱和伪麻黄碱的Rf值非常接近，温度和湿度对其影响较大，有些条件下麻黄碱和伪麻黄碱Rf值有重叠，不利于分析。本课题经过反复摸索，得到以醋酸乙酯甲醇丙酮浓氨试液（10∶1∶0.5∶0.5）展开条件下展开，两成分完全分开，且不易受温度影响。结果见图1。
       2.4 含量测定
       2.4.1 色谱条件
       色谱柱：phenomenex C8柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相：甲醇 0.01 mol·l-1磷酸二氢钾溶液（磷酸调pH2.5）（5∶95），检测波长：210 nm，流速：1.0 ml·min-1。在上述色谱条件下，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱可达基线分离，分离度大于1.5，且无其它峰干扰。结果见图3。
       2.4.2 混合对照品溶液的制备
       精密称取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品0.025 g、0.025 g，置100 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过（0.22 μm），即得每毫升分别含0.25 mg，0.25 mg的对照品混合储备液。
       2.4.3 供试品溶液的制备
       取麻黄细粉约0.2 g，精密称定，用13，10倍量0.05%盐酸水溶液提取两次，第1次1.5 h，第2次1 h，合并煎液，滤过，滤液取1 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，静置30 min后过滤，取续滤液，即得。
       2.4.4 线性范围的考察
       精密吸取上述混合对照品储备液0.5，1，2，3，4，5 μl进样，测定其峰面积积分值，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，盐酸麻黄碱回归方程为：A＝2 203.900 87C+39.962 83，r＝0.999 97；盐酸伪麻黄碱回归方程为：A＝2 019.135 67C+35.564 85，r＝0.999 97。结果表明盐酸麻黄碱在0.125 5～1.255 μg范围内、盐酸伪麻黄碱在0.125～1.25 μg范围内具有良好的线性关系。
       2.4.5 精密度实验
       精密吸取供试品溶液，重复进样6次，按“2.4.1”项色谱条件，测定其峰面积积分值，RSD均小于2％，精密度合格。
       2.4.6 稳定性实验
       精密吸取混合对照品溶液，按上述色谱条件，于0，1，2，4，6，8，10 h时进样，测定峰面积积分值，麻黄碱和伪麻黄碱色谱峰峰面积RSD均小于2％，结果10 h内测定结果稳定。
       2.4.7 重复性实验
        
       按“2.4”项含量测定方法，取同一批样品平行制备6份，按上述色谱条件，测定其峰面积积分值，RSD均小于3％。表明本方法重复性较好。
       2.4.8 回收率实验
       精密称取已知含量的同一批样品（麻黄碱含量为0.8039%，伪麻黄碱含量为0.6485%），分别精密加入麻黄碱对照品溶液（0.212 mg·ml-1），伪麻黄碱对照品溶液（0.193 mg·ml-1）各1 ml，按“2.4.3”项下操作，最后定容为10 ml，平行操作6份，按上述色谱条件测定峰面积，计算回收率。麻黄碱、伪麻黄碱回收率均在95.1%～100.5%，RSD分别为0.65％，1.8％，显示该方法准确稳定。
       2.4.9 不同产地、批次麻黄药材含量测定
       取各不同产地，不同批次麻黄药材，按“2.4.3”项下操作，每批样品平行操作3份，按上述色谱条件测定峰面积，计算含量。结果见表1～2。表1  不同产地麻黄药材含量测定（略）表2  不同批次麻黄药材含量测定（略）
       从表1～2 可见，不同产地不同批次的麻黄药材，除两主要生物碱总量相差较大外，两个主要成分麻黄碱含量和伪麻黄碱含量比例相差较大。6组麻黄药材中，有4组符合《中国药典》规定的麻黄碱限量要求，但是伪麻黄碱的含量差异较大：第1组、第5组伪麻黄碱含量约为麻黄碱含量的50%，第2、第3组伪麻黄碱含量竟然达到麻黄碱的两倍，第4组麻黄碱和伪麻黄碱含量相当。同一产地不同批次药材，质量相对比较稳定。
       3 讨论
        现代药理对麻黄碱和伪麻黄碱的研究表明，麻黄碱在体内大部分是与肾上腺素能受体结合而产生直接作用，提高机体应激反应，同时激动β受体，舒张气管平滑肌，故有中医理论的发汗解表，宣肺平喘的功效。而伪麻黄碱主要通过刺激交感神经末梢释放去甲肾上腺素，以间接作用方式起拟交感神经作用，突出的特点是选择性地收缩呼吸道血管，并可选择性收缩鼻黏膜血管，目前主要用于感冒初期的打喷嚏流鼻涕等症状［2，3］。所以不同的使用目的对麻黄药材的要求不一样，如根据中医辨证论治使用麻黄的方剂麻黄汤、麻杏石甘汤等，应采用麻黄碱含量高的麻黄药材，以达到方剂中采用麻黄碱发汗解表，宣肺平喘的功效［4，5］；而像越婢汤，小青龙汤，防风通圣散等方剂具有疏散水湿、消炎止痛之功效［6～8］，则应采用伪麻黄碱含量高的药材。而本课题研究的喘平复方制剂，采用的是麻黄碱宣肺平喘功效。所以在麻黄药材筛选中，一定要保证麻黄碱的含量达到要求。本文的意义在于对中医药理论指导辨证用药理论的进一步发展，不同症状不仅要选择不同药物而且对同一种药物还要对其不同药理活性成分进行选择。
       
       本课题对麻黄的质量从鉴别和含量两个方面建立了新的控制方法，定性研究方面通过对展开系统的筛选，使麻黄碱和伪麻黄碱得到很好的分离，温度、湿度对其影响不大，可以快捷有效的对不同产地麻黄药材做出评价，定量研究方面建立了HPLC方法同时对麻黄碱、伪麻黄碱进行含量分析，结果可靠，方法简便，回收率及灵敏度高。质量控制的研究为本课题麻黄药材的质量稳定提供了保证。
       【参考文献】
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