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       【摘要】 
       目的研究大蝎子草抗炎镇痛的活性作用部位，为进一步寻找活性成分奠定基础。方法采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀及皮肤毛细血管通透性实验、醋酸致小鼠扭体反应与小鼠热板致痛等实验动物模型进行整体动物生物活性评价。结果大蝎子草提取物水层、醋酸乙酯层和氯仿层能够显著减少醋酸致小鼠扭体次数，延长热板痛反应时间，水层还能显著抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀及皮肤毛细血管通透性增高，与对照组比较均有显著性差异。结论大蝎子草提取物水层有较好的抗炎镇痛作用， 醋酸乙酯层和氯仿层具有镇痛作用，为活性成分的寻找提供了研究基础和方向。
       【关键词】  大蝎子草 抗炎 镇痛
       活麻药用历史悠久，在《楚彝本草》《滇药录》《藏本草》等均有记载，主要用于治疗中风不语，咳嗽多痰、风湿疼痛、跌打损伤、骨折等。根据文献资料我国大部分地区所用活麻为荨麻科荨麻属的植物，因此，目前国内外在荨麻属药用植物的活性研究较多，由于其明确的疗效，引起相关科研人员的日益重视［1］。
       
       活麻作为治疗药物以红禾麻药名被2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》收录，该标准收载的活麻原植物为荨麻科珠牙艾麻Laportea bulbifera (Sieb. et Zucc.) Wedd.的新鲜或干燥全草［2］。我们经过广泛的调查，贵州不少民族地区以荨麻科蝎子草属植物大蝎子草Girardinia diversifolia (Link) Friis的全草或根作为活麻药材广泛使用，而目前对该植物的相关研究未见报道。为促进植物资源的合理开发和利用，本研究以大蝎子草Girardinia diversifolia (Link) Friis为研究对象，按照传统部位分离的方法，采用经典抗炎镇痛模型研究其活性部位，为进一步指导大蝎子草的研究开发提供实验依据。
       1  材料
       1.1  药材与药物制备
       大蝎子草，采集于贵州省贵阳市花溪区，经贵阳医学院龙庆德老师鉴定为蝎子草属植物大蝎子草Girardinia diversifolia (Link) Friis的地上部分，药材标本留于贵阳医学院药学院药用植物学和生药学教研室。药材经低温干燥后，取1 kg 加入95%乙醇8 L进行提取，回流提取3次，抽滤，合并滤液在旋转蒸发仪上进行浓缩，浓缩液依次经石油醚、醋酸乙酯、氯仿萃取，分别得到各部位萃取物21.4，3.2，1.0 g和剩余水层34.8 g。
       1.2 试剂阿司匹林，中国医药公司上海分公司产品（批号840130）；醋酸，上海申博化工有限公司产品，AR（批号0501101）；甲酰胺，天津市科密欧化学试剂开发中心产品，AR（批号20030909）；二甲苯，重庆川江化学试剂厂产品，AR（批号20070716）；伊文思蓝，中国医药集团上海化学试剂公司进口分装（批号F20020913）；氯化钠，重庆川江化学试剂厂产品，AR（批号20060109）。
       1.3 动物昆明种小鼠，♀♂兼有，体重18～22 g，由贵阳医学院动物实验中心提供［动物合格证号：SCXK（黔）2002-0001］。
       1.4 仪器BS223S型分析天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司产品； HH-601超级恒温水浴锅，江苏金坛市环宇科学仪器厂产品；GJ28402型热板测痛仪，浙江宁海白石电子医药仪器厂产品；722光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂产品。
       2 方法
       2.1 抗炎实验
       2.1.1 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响
       参照文献方法［3］，选取体重（20 ±2）g小鼠 60只，随机分为6组，即模型组、阿司匹林组（300mg/kg）、大蝎子草石油醚部位（103mg/kg）、氯仿部位(16 mg/kg)、醋酸乙酯部位（5 mg/kg）及水层（174 mg/kg）。各给药组均相当于大蝎子草生药剂量为 5g/kg，每组10 只小鼠，给药容积为10 ml/kg，连续给药5d，末次给药40 min后，于小鼠右耳(两面)均匀涂抹二甲苯20 μl/只致炎，左耳不涂，同时立即尾静脉注射1%伊文思蓝 0.1 ml/10 g。20 min后将小鼠颈椎脱臼处死，用直径为 8 mm的打孔器沿左右耳片同一部位打下圆耳片，在电子天平上称重，右耳与左耳重量之差即为肿胀度。并计算肿胀抑制率，肿胀抑制率（%）=（模型组平均肿胀度-给药组平均肿胀度）/模型组平均肿胀度×100%。
       2.1.2 伊文思蓝标准曲线的的制作［4］
       精密称取伊文思蓝粉末 0.010 g，置于100 ml容量瓶中，用甲酰胺溶解并定容，配成100 μg·ml-1溶液，在分别精密吸取 0.25，0.5，1，2，4，6，8 ml该溶液于10 ml容量瓶中并再次用甲酰胺定容，以620 nm波长，1 cm光径测定其吸光度（A），甲酰胺调零，以吸光度 （A） 对溶液中伊文思蓝的浓度（C）求得回归方程为：A=0.122 8C+0.006 8，r=0.999 2，伊文思蓝浓度在2.5～ 80 μg·ml-1与吸光度值呈良好的线性关系。
       2.1.3 对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响
       参照文献方法［5］，将致炎右耳片剪成数片浸入2 ml甲酰胺中，38℃水浴48 h将染料渗出，离心，上清液于620 nm处测吸光度A值，按“2.1.2”项伊文思蓝标准曲线计算伊文思蓝的含量。
       2.2 对热板致痛的影响［6］
       取雌性昆明种小鼠，体重在（20±2）g，置于（55±0.5）℃的热板上，记录小鼠自放置于热板上至出现舔后足反应所需的时间，即为痛阈值，凡小于5 s或大于30 s及跳跃的均淘汰，合格小鼠再测1次痛阈值，取两次平均值作为各鼠痛阈值。选取合格小鼠60只，按体重与痛阈值随机分为6组，10只/组，分组与给药同“2.1.1”项。于末次给药40 min后测定痛阈值（用药后小鼠痛阈大于60 s者中止实验并计以60 s），计算痛阈提高百分率，痛阈提高百分率（%）=（给药后平均痛阈值-给药前平均痛阈值）/给药前平均痛阈值×100%。
       2.3 冰醋酸致小鼠扭体法［7］
       取昆明种小鼠60只，♀♂各半，按体重随机分为6组，分组与给药同“2.1.1”项，于末次给药40 min后，小鼠腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 ml/10 g，观察并记录20 min内小鼠的扭体次数并计算镇痛抑制率，镇痛抑制率（%）=(模型组平均扭体次数-给药组平均扭体次数)/模型组平均扭体次数×100%。实验过程中室温维持在（18±1）℃。
       2.4 统计学处理
       实验数据用SPSS10.0 统计分析软件进行分析，两两比较用t检验，P<0.05为差异显著，P<0.01为极显著差异。
       3 结果
       3.1 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响
       小鼠右耳涂二甲苯后，耳廓显著肿大，肿胀度高达（11.20±0.53）mg，阿司匹林显著抑制二甲苯所导致小鼠耳廓肿胀的急性炎症反应，表现为肿胀度降低，抑制率为63.17%，大蝎子草各提取部位中，水层对二甲苯所导致的急性炎症反应具有显著的抑制，抑制率为45.68%，而醋酸乙酯、氯仿及石油醚等部位未见显著抑制作用。结果见表1。表1  大蝎子草各提取部位对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度的影响（略）
       3.2 对二甲苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性的影响
       小鼠尾静脉注射伊文思蓝后，由于二甲苯导致小鼠耳部充血、水肿，因此伊文思蓝随血流到达小鼠耳部分布较多。抗炎药物抑制二甲苯所致耳廓炎症，小鼠耳片伊文思蓝含量减少。表2实验结果提示，阿司匹林和大蝎子草水层部位具有显著的抑制炎症渗出，降低皮肤毛细血管通透性的作用。表2  大蝎子草各提取部位对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响（略）
       3.3 对热板致小鼠疼痛反应的影响连续给药5d后，阿司匹林组、大蝎子草水层部位、醋酸乙酯层、氯仿层均显著延长小鼠的痛阈值，与模型组比较差异显著，痛域值提高百分率分别为43.92%，31.95%，19.95%，20.56%。结果见表3。表3  大蝎子草提取部位对小鼠热板法痛阈的影响（略）
       3.4 对醋酸所致小鼠扭体反应的影响结果显示大蝎子草水层、醋酸乙酯和氯仿部分能够有效抑制醋酸刺激腹腔黏膜引起的痛反应，减少扭体次数。结果见表4。表4  大蝎子草各提部位对醋酸致小鼠扭体反应的影响（略）
       4 讨论
          
       大蝎子草为荨麻科蝎子草属植物Girardinia diversifolia (Link) Friis系贵州少数民族民间习用的活麻原药材之一。根据苗族用药经验，大蝎子草具有舒筋活络、消肿止痛等功效，主要用于治疗腰腿痛、风湿痛、跌打损伤、前列腺炎等，具有独特的疗效，且通过民间广泛应用证明其作用安全可靠。
       
       本研究采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、皮肤毛细血管通透性增高两种非特异炎症模型评价大蝎子草对早期急性炎症的影响，以热板法和醋酸所致扭体实验两种用于镇痛药初筛的经典常用方法评价其镇痛作用及可能的活性部位。实验结果证实，大蝎子草提取物的水层部分能够有效抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀及皮肤毛细血管通透性增高，提高小鼠热刺激体表的痛阈，抑制醋酸刺激腹腔粘膜引起的痛反应，减少扭体次数。氯仿层和醋酸乙酯层也能够提高小鼠热刺激体表的痛阈，抑制醋酸刺激腹腔粘膜引起的痛反应,减少扭体次数；但是本次研究未见明显的抗炎作用。而石油醚层在本次研究中未见抗炎镇痛作用，这可能与石油醚主要成分为油脂等成分相关。
       
       以上实验结果证实，民间采用水煎煮的用药方法可以最大程度地得到药效的活性部位，发挥药物的抗炎镇痛作用；同时为进一步研究其活性成分提供了研究方向。其抗炎作用的活性成分及可能的作用机制有待于进一步深入研究。
       【参考文献】
         　　［1］李宁,张庆林.荨麻属植物化学成分和药理作用研究进展［J］.中国新药杂志,2007,16(21): 1746.
       
       ［2］贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准［S］.贵阳:贵州科技出版社, 2003: 187.
       
       ［3］高莹莹,敖明章,万军梅,等.维药刺山柑醇提取物抗炎镇痛作用的实验研究［J］.中药材,2007,30(6): 702.
       
       ［4］姚静,周建平,平其能,等.类透明质酸壳聚糖微乳对小鼠血脑屏障通透性的影响［J］.药学学报,2006,41(7): 615.
       
       ［5］徐叔云.药理实验方法学，第3版［M］.北京:人民卫生出版社,2001:911.
       
       ［6］王平.竹节人参抗炎镇痛作用的实验研究［J］.四川中医,2007,25(12): 17.
       
       ［7］李燕婧,陈学芬,钟正贤,等. 岗松水提取物药理作用的实验研究［J］.中药材,2007,30 (11): 1429.