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       【摘要】 
       目的优化绞股蓝中槲皮素的提取条件。方法以绞股蓝中槲皮素为指标，用液相色谱法测定，采用正交实验设计L9 (34 )优化实验条件，对比研究了微波辅助提取法(MAE)与索氏提取和室温浸渍法提取绞股蓝中槲皮素的提取率。结果确定了MAE提取绞股蓝中槲皮素的最佳条件为：粒度160～250 μm，水分含量为15%，功率为100 W，萃取时间为10 min。优化的MAE提取绞股蓝中槲皮素提取产率分别比索氏提取法和室温浸渍法提高约46.2 %和63.3 %，提取时间仅是索氏提取法的1/24倍，是室温浸渍法的1/144倍。结论MAE不仅提取率高，而且提取时间大大缩短，是一种适合于绞股蓝中槲皮素快速高效的提取方法。
       【关键词】  绞股蓝 槲皮素 正交设计 微波辅助提取 高效液相色谱
       绞股蓝Gynostemm apentaphyllum (Thunb.) Makino,GP,又名七叶胆、五叶参、七叶参等,是葫芦科绞股蓝属植物,为多年生蔓生草本。具有广泛的药理作用，在抗衰老、抗疲劳、抗辐射和消除自由基的同时，还能改善神经系统功能、抗溃疡、抑制胆结石形成和调节内分泌活动［1］，具有保护心、脑、血管和肝脏，降低血脂、降胆固醇、降转氨酶、调节免疫和抗诱变等作用［2～4］。因此，对绞股蓝的研究引起了国内外广大学者的兴趣，冠以绞股蓝名称的药品、保健品、饮料、食品添加剂等的开发已成为一个研究热点［5］。绞股蓝所含化学成分复杂［1］，绞股蓝含槲皮素(Quercetin)等多种成分［6］。提取绞股蓝中槲皮素有乙醇渗漉法［1］、索氏提取法［7］等；采用微波辅助萃取（microwave assisted extraction，简称 MAE）绞股蓝中槲皮素的方法未见文献报道。本实验建立微波辅助萃取绞股蓝中槲皮素的方法，优化绞股蓝中槲皮素的提取条件，可望为绞股蓝中有效成分提取方法提供一些理论依据。
       1  器材与材料
       日本岛津LC-10Avp 高效液相色谱仪；SPD-10Avp 紫外可见光检测器；CLASS- VPV5103色谱数据处理工作站；AEL-200电子分析天平（湘仪天平仪器厂，湖南长沙）；改装的NBC-微波炉(苏州三星电子有限公司，江苏苏州)。
       
       槲皮素对照品(中国药品生物制品检验所)；绞股蓝采自湖南邵阳市，经邵阳医学高等专科学校药学系鉴定；乙腈为色谱纯,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯。
       2 方法
       2.1  样品处理
       2.1.1 微波辅助萃取将绞股蓝晾干、粉碎过筛，精确称取某一粒度的绞股蓝10 g，加乙醇50 ml，按设定的微波功率和时间进行提取，然后过滤分离，用乙醇洗涤3遍，合并滤液，定容至100 ml。然后取1 ml定容后的滤液稀释至10 ml，取一定量的稀释后的溶液经0.45 μm滤膜过滤后,取10 μl直接进样。
       2.1.2  索氏提取精确称取某一粒度的绞股蓝10 g样品于索氏提取器中，,加乙醇50 ml，连续回流4 h，过滤后的操作步骤与“2.1.1”项相同。
       2.1.3  室温渗漉精确称取某一粒度的绞股蓝10 g,加乙醇50 ml，室温放置24 h，过滤后的操作步骤与“1.2.1”项相同。
       2.2 色谱条件Diamonsil C18柱 (200 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相：乙腈：0.02% H3PO4水溶液(60∶40,V/V）；流速：1 ml/min；柱温：30℃；检测波长：254 nm。在本色谱条件下，对照品和样品的色谱图见图1。
       3 结果与讨论
       3.1  微波辅助萃取参数的优化微波加热具有选择性，即不同介电常数的物质，其吸收微波能的程度不同，由此产生的热能及传递给周围环境的热能也不相同［8］。鉴于此特性，在实验的过程中，我们考虑了影响微波辅助萃取的4个参数（粒度、水分含量、萃取时间及功率），按照4因素3水平L9(34)对实验进行设计（见表1），选择了最佳萃取条件。实验结果见表2。表1  正交实验设计因素与水平（略）表2  正交设计及实验数据处理（略）
       
       从表2的分析结果来看，粒度对槲皮素提取率的影响随着颗粒粒径增加，槲皮素提取产率相应减少,当粒径小于160 μm时,对产率的影响不显剧。从功率对槲皮素提取产率的影响可看出，100 W的功率提取效率最好，在该功率下微波就足以能穿透整个萃取体系，整个萃取体系（样品内外部）能同等程度地接受微波辐射。在给定的实验条件中，在10 min效果最好。适量的水分含量有利于目标物的提取，水分含量在15%时，提取效率最好。
       综合表2分析来看，在各影响参数中，按照对槲皮素提取产率影响的主次（Deltak大小）来分，依次为样品的粒度、功率、时间和水分。而最佳萃取条件应为：粒度160～250 μm，功率为100 W，萃取时间为10 min，水分含量为15%。
       3.2 MAE、索氏提取法与室温浸渍法的比较按照“3.1”项优选的最优条件，进行优化实验，得到MAE、索氏提取法和室温浸渍法3种方法提取绞股蓝中槲皮素的产率分别为：0.018%，0.013%和0.011%，结果与文献［7］的报道接近。从实验结果看出：在设定的实验条件下，微波辅助提取绞股蓝中槲皮素的提取产率最高，提取绞股蓝中槲皮素的提取率分别比索氏提取法和室温浸渍法相提高约46.2%和63.6%，而且提取时间仅是索氏提取回流的1/24倍，是室温浸渍法的1/144倍。因此，MAE具有快速高效的特点，大大节省了能源。
       4 结论
       本实验优化了微波辅助萃取绞股蓝中槲皮素的提取条件，即粒度160～250 μm，水分含量为15 %，功率为100 W，萃取时间为10 min。比较研究了MAE与索氏提取法和室温浸渍法提取绞股蓝中槲皮素的提取产率，MAE适合于绞股蓝中槲皮素的提取。该方法不仅提取率高，而且提取时间大大缩短，节省了能源，是一种适合于绞股蓝中槲皮素的提取技术。
       【参考文献】
         　　［1］刘欣,叶文才,萧文鸾,等.绞股蓝的化学成分研究［J］.中国药科大学学报,2003, 34(1): 21.
       
       ［2］张瑞哲,张常胜,于慧敏.绞股蓝药理及临床作用研究进展［J］.黑龙江医药,2000, 13(5): 295.
       
       ［3］任颖,王秋玉,吴泽民,等.绞股蓝皂甙的药理研究进展［J］.中国实用中西医杂志,2001, 14(1): 988.
       
       ［4］江波,兰小中.药用植物绞股蓝的研究新进展［J］.西藏科技,2005, 12:52.
       
       ［5］史先振，周建俭.绞股蓝的研究进展［J］.食品研究与开发, 2003, 24(5): 38.
       
       ［6］方乍浦,曾先仪.绞股蓝化学成分初步研究.中国药学会庆祝建会八十周年学术会议论文集［C］.1987: 14-A-3.
       
       ［7］卢金清，喻樊，陈黎,等. RP-HPLC测定绞股蓝中芦丁和槲皮素的含量［J］.中成药, 2007, 29(8):1193.
       
       ［8］陈猛,袁东星,许鹏翔. 微波萃取法研究进展［J］.分析测试学报, 1999, 18(2): 82.