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       【摘要】 
       目的建立血浆中东莨菪碱的高效液相色谱（HPLC）测定方法，为含东莨菪碱的中药复方动物体内药动学研究提供基础。方法采用ZORBAX SB-C18 (5 μm，250 mm×4.60 mm)色谱柱；以甲醇-0.001 mol·L-1磷酸（70∶30）（流动相含0.02 mol·L-1十二烷基硫酸钠）为流动相，流速为1.00 ml·min-1，检测波长为203 nm 。结果东莨菪碱在4.5～249.5 μg·ml-1范围内与峰面积比值呈良好的线性关系(r=0.998 8，r=0.999 4)。回收率分别为113.51%，97.16%和97.59%。两者日内、日间精密度的RSD<5%。结论建立的高效液相色谱测定方法为动物体内东莨菪碱的测定提供了一个可靠的方法。
       【关键词】  东莨菪碱 高效液相色谱 血浆
       Determination of ScopoLamine in Plasma by HPLC
       FENG Zhong, ZHU Shengshan, LI Xiaoyan, WU Yanhong
       Guangdong Pharmacological College，Guangzhou 510006，China
       Abstract:ObjectiveTo establish the determining method of ScopoLamine in plasma with high performance liquid chromatography. MethodsScopolamine was separated on ZORBAX SB-C18 column (4.6 mm×250 mm，5 μm)，with mobile phase consisted of methanol-0.001 mol·L-1 phosphoric acid (containing 0.02 mol ·L-1 Laurel sodium sulfate) (70∶30) at a flow rate of 1.0 ml ·min-1，and the detective wavelength was set at 203 nm. ResultsThe recoveries of this method were 113.51%，97.16% and 97.59%，and the repeatability RSDs were <5% .ConclusionThe method can be used to determine ScopoLamine in vivo.
       Key words:ScopoLamine;  HPLC;  Plasma
       
       洋金花是我所新药“喘平”的主要成分之一，为茄科植物白曼陀罗Datura metel L.的干燥花，具平喘止咳、镇痛、 解痉之功效，用于哮喘咳嗽、脘腹冷痛、风湿痹痛、小儿慢惊的治疗及外科麻醉。洋金花中主要有效成分为莨菪烷类生物碱， 其中又以东莨菪碱含量最高［1］。故本次实验选东莨菪碱作为指标成分，研究东莨菪碱在生物体内的行为，为含洋金花的中成药质量控制、剂型设计提供科学依据，为“喘平”缓释制剂的研制提供参考。利用薄层色谱(TLC)及气相色谱(GC)分析东莨菪碱大鼠尿样中的代谢物已有报道［2,3］，但这些方法灵敏度低，选择性差，且样品处理复杂。目前还没有使用高效液相色谱法（HPLC）对大鼠血浆中东莨菪碱鉴定的报道。本实验建立了血浆中东莨菪碱高效液相色谱测定新系统，以期为含洋金花中成药生物体内东莨菪碱的测定提供可靠的方法。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器
       BS124S型电子分析天平(德国Sartorius)， AgiLent-1100型高效液相色谱仪。ZORBAX SB-C18(5 μm，250 mm×4.60 mm)色谱柱；Phenomenex Security Guard 保护柱，Vortex QL-901涡旋器。
       1.2 药品与试剂
       氢溴酸东莨菪碱对照品(中国药品生物制品检定所，100049-200308)，超纯水，甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。实验用SD大鼠购自广东省医学实验动物中心。
       2 方法与结果
       2.1 色谱条件以甲醇－0.001 mol·L-1磷酸（70∶30）（流动相含0.02 mol· L-1十二烷基硫酸钠）为流动相，流速为1.00 ml·min-1，检测波长为203 nm。
       2.2 对照品制备精密称取干燥至恒重的东莨菪碱对照品适量，用色谱纯甲醇溶解配制成1.042 mg·ml-1对照品贮备液。
       2.3 样品制备取血浆0.5 ml，加入氨水试液0.5 ml，混匀1 min，加入醋酸乙酯－正己烷（５∶1）5 ml混匀1 min，5 000 r/min离心5 min，取有机相氮气吹干，加入0.05 mol·L的硫酸0.5 ml溶解残渣，用0.22 μm滤膜过滤后进样，预实验给药后血样色谱图见图1。由图1可见空白血浆无干扰。
       2.4 标准曲线取空白血浆0.5 ml，加入不同量的东莨菪碱对照品液， 配成浓度为4.5，22.7，45.4，102.6，170.1，249.5 μg·ml-1的系列溶液，按“2.3”项下样品处理方法操作，每个浓度平行操作５次，分别进样10 μl，测定峰面积。以东莨菪碱的浓度(X) 对峰面积(Y) 进行回归分析，得回归方程Y= 0.805 5 X - 1.593 9(n=6)，R2=0.999 1，结果表明在4.5～249.5 μg·ml-1范围内线性关系良好。
       2.5 精密度实验取空白血浆0.5 ml，加入不同量的东莨菪碱对照品液， 配成浓度10.42，312.6， 885.7 μg·ml-1 3个浓度，按“2.3”项下样品处理方法操作，测定日内与日间精密度，得3个浓度日内RSD为3.21%，0.97%，0.30%，日间RSD为2.37%，0.79%，0.35%（n=5），表明分析方法精密度良好。
       2.6  回收率取空白血浆0.5 ml，加入不同量的东莨菪碱对照品液，配成浓度10.42，312.6，885.7 μg·ml-1 3个浓度，按“2.3”项下样品处理方法操作后测定，所得浓度与配置浓度之比即为回收率，为113.51%，97.16%，97.59%（n=5）。表1  样品回收率（略）
       3 讨论
       3.1 氨水浓度的单因素实验配置系列浓度的氨水溶液（分别取0.05，0.15，0.25，0.5，0.75，1.0，1.25，1.5 ml氨水，定容到100 ml），按照样品处理方法操作，吸取进样，以氨水浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图2。
       可以看出，随着氨水浓度的增加，东莨菪碱的峰面积也不断增大，但是当氨水浓度到0.75 ml/100 ml之后，基本不再改变，所以选择0.75 ml/100 ml的氨水溶液作为碱化溶液。
       3.2 萃取液的单因素实验分别使用醋酸乙酯，丙酮，醋酸乙酯-丙酮（3∶1），醋酸乙酯-正己烷（3∶1），丙酮-正己烷（3∶1）6 ml作为萃取液，使用0.75 ml/100 ml的氨水作为碱化溶液，处理样品进样，丙酮疏水性很差，和加入的酸水溶液完全互溶，无法用来作为萃取溶剂。所以我们选择醋酸乙酯-正己烷（3∶1）作为萃取液。 分别配置1∶1，2∶1，3∶1，4∶1，5∶1，6∶1的醋酸乙酯-正己烷萃取液，按照“2.3”样品处理方法，所得样品进样，以其比例为横坐标，峰面积为纵坐标作图。见图3。
       由此可以看出，当醋酸乙酯-正己烷比例为5∶1的时候，萃取率最高，峰形良好。所以选取醋酸乙酯-正己烷（5∶1）为萃取液。
       分别使用醋酸乙酯-正己烷（5∶1）3，4，5，6，7 ml作为萃取液进行实验。结果见图4。
       可以看出，当萃取液体积为5ml的时候，萃取率最高。所以，选择0.75 ml/100 ml的氨水溶液碱化血浆，选用醋酸乙酯-正己烷（5∶1）5 ml作为萃取溶液来处理样品，可以达到理想效果。
       经大鼠预试验结果表明东莨菪碱口服生物利用度较低，因而在用于动物体内测定时取样量应稍大。
       【参考文献】
         　　［1］张俐，王玉.HPLC法测定洋金花中东莨菪碱的含量［J］.首都医药，2007，4：47.
       
       ［2］Wada S, Yoshimitsu T, Koga N. Metc Metablism in vivo of the tropane alkaloid, Scopolamine, in several mammalian spcies［J］.Xenobiotica， 1991， 21(10):1289.
       
       ［3］韩国柱.中草药药代动力学［M］.北京：中国医药科技出版社，1999:275.