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       【关键词】  益气活血复方；,,左室肥厚；,,醛固酮；,,血管紧张素Ⅱ；,,高血压
       摘要：目的观察益气活血复方对自发性高血压大鼠 (SHR)左室肥厚的影响，并探讨其作用机制。方法14周龄雄性 SHR 40只，随机分为5组，即SHR空白对照组、硝苯地平治疗组及益气活血复方高、中、低剂量组。治疗8周后，测量大鼠尾动脉收缩压(SBP)，心脏重量指数 (HWI)，左心室肥厚指数 (LVMI)，采用HE染色、VG染色观察心肌细胞及间质胶原的变化，放免法测定循环血及心脏局部醛固酮(ALD)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的浓度。结果经益气活血复方治疗8周后，SHR血压下降，左室肥厚明显消退，间质胶原的含量减少。益气活血复方不仅能够抑制循环肾素血管紧张素醛固酮系统 (RAAS)的活性，同时也能明显抑制心脏局部 RAAS的活性。结论益气活血复方具有逆转高血压左室肥厚的作用，各剂量组呈现一定的量效关系，其疗效优于硝苯地平。其作用机制可能与降低血压和抑制 RAAS活性有关。
       关键词：益气活血复方；  左室肥厚；  醛固酮；  血管紧张素Ⅱ；  高血压
       Experimental Study of Effect of Yiqihuoxue Recipe on Reverse Left Ventricular of Spontaneously Hypertensive Rats
 
　　CHEN  Liguo ,  DAI Yong ,ZHANG Chun,   HU Xiaoqin
       (Medical College, Jinan University, Guangzhou, Guangdong 510632，China； Nanhai Hospital of Traditional Chinese Medicine, Foshan, Guangdong 528200,China; First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou, Guangdong 510632, China)
       Abstract：ObjectiveThe research was to investigate the effects of Yiqihuoxue recipe on left ventricular in spontaneously hypertensive rats(SHRs) and its mechanism.Methods14weekold SHRs were assigned randomly into 5 groups: the control groups,the groups treated with nifedipine,the other three groups treated with different doses of YiqiHuoxue recipe.After 8weektreatments, systolic blood pressure (SBP),heart weight index(HWI), left ventricular mass index(LVMI).  Were measured sections of heart tissue was stained with VanGieson method. The changes of structure and shape in the myocardial cells and volume fraction in collagen were determined by automatically quantitative morphometry;  The concentration of aldosterone(ALD) and angiotensin Ⅱ(AngⅡ) of plasma and myocardium with radioimmunoassay were detected. ResultsYiqihuoxue recipe restrained left ventricular and then decreased collagen contents after 8weektreatments. Yiqihuoxue recipe not only restrain the RAAS activity of plasma, but also of myocardium.ConclusionYiqiHuoxue recipe can reverse left ventricular, the effect of YiqiHuoxue recipe is better than that of nifedipine. Both decreasing blood pressure and restraining RAAS activity may be the mechanism of YiqiHuoxue recipe reversing left ventricular.
       Key words：YiqiHuoxue recipe;   Essential hypertension with left ventricular remodeling;   Aldosterone;   Angiotensin Ⅱ；  Hypentension
   
　　高血压病患者约有1/3出现左室肥厚(LVH)，LVH是心血管系统疾病的一项独立危险因素［1］。心脏机械负荷过重和许多非血流动力学因素如肾素－血管紧张素－醛固酮系统 (RAAS)的刺激均可诱发 LVH。益气活血复方是在长期临床实践中发现的有一定的防治高血压 LVH作用的药物，通过实验研究我们发现，益气活血复方能够降低胞内游离钙的浓度，具有钙通道阻断剂样的作用［2］。为此，本实验以 SHR为研究对象，观察益气活血复方对高血压左室肥厚的影响，并探讨其可能的作用机理。
       　　1  材料与方法
       1.1   材料14周龄 SHR 40只，雄性，清洁级，购自上海斯莱克实验动物有限公司 (许可证号：SCXK沪2003－0003)。实验药物：硝苯地平购自广东华南制药厂；益气活血复方(当归、川芎、赤芍、丹参、葛根、人参、黄芪、降香等)购自广州二天堂医药公司。主要试剂：ALD、AngⅡ放免药盒购自北京北方生物技术研究所。
       1.2   方法
       1.2.1   分组与治疗实验大鼠采用随机数目表法随机分为5组：SHR空白对照组、硝苯地平组及益气活血复方高、中、低剂量组，每组8只。硝苯地平组每日硝苯地平5.4 mg・Kg-1加蒸馏水至5 ml灌胃，益气活血复方高、中、低剂量组每日分别给予益气活血复方39，13，4.3 g・kg-1加蒸馏水至5 ml灌胃，SHR空白对照组给予等量蒸馏水灌胃。治疗8周后处死大鼠进行检测，处死前称取体重和测量大鼠收缩压。大鼠给予相同的标准饲料和自来水喂养，饲养在恒温(22±2)℃，恒湿(55±5)％，人工光照明暗各12 h的安静饲养室内。
       1.2.2   血压测定大鼠40℃预热5 min，采用 RBP1B型大鼠尾压心率测定仪（中日友好临床医学研究所）。测量大鼠安静、清醒状态下尾动脉 SBP(KPa)，连续测量3次，取其均值。分别于治疗前，治疗后4周，8周各测量1次。
       1.2.3   心脏重量指数、左心室肥厚指数的测定以3％戊巴比妥钠行大鼠腹腔麻醉(30 mg・kg-1)，迅速开胸，取出心脏用4℃生理盐水冲洗血污，滤纸吸干水份称取心脏重量。沿房室交界处去除心房和大血管及右心室游离壁，将左室游离壁和室间隔准确称重，作为左心室重量。心脏重量、左心室重量与动物体重的比值分别作为心脏重量指数 (HWI，mg・kg-1)，左心室肥厚指数 (LVMI，mg・kg-1)。
       1.2.4   心肌细胞形态学观察取左室游离壁中部横断面心肌组织块留做 HE染色和 VG染色，置于4％多聚甲醛溶液，采用 QWin显微图像分析软件(德国 leica公司)进行图像分析。
       1.2.5   循环血 ALD，AngⅡ浓度的测定3％戊巴比妥钠腹腔麻醉，从大鼠眼球取血4ml，其中2ml迅速注入放在冰水浴冷却的酶抑制 (EDTA20μl，8羟基喹林20 μl，2巯基丙醇10 μl混匀)抗凝管中，摇匀，立刻放回冰水浴中，40℃，1 000 min离心5 min，分离取血浆置于80℃冰箱保存。另2 ml注入含10 μl肝素的抗凝管中，方法同上。
       1.2.6   心脏局部 ALD、AngⅡ浓度的测定取心尖组织约150 mg，称重后加入0.5mol/L乙酸1.5ml(按照W∶V=1∶10)，然后在100℃煮沸15min，4℃，4 000 min离心20 min，取上清液，置于80℃冰箱保存，待测心肌局部 ALD、AngⅡ。采用放免法测定 ALD、AngⅡ，批内变异系数＜5％，批间变异系数＜10％。
       1.2.7   统计学处理应用SPSS10.0软件进行统计分析，数据以±s表示，组间比较用 ANOVA法进行分析。
       2  结果
       2.1    各组 SBP、HWI、LVMI的变化各治疗组均能明显降低收缩压，与治疗前比较有显著差异(P＜0.05)，各治疗组之间比较差异不明显。各组 HWI、LVMI比较显示：益气活血复方高、中剂量组及硝苯地平组低于空白对照组(P＜0.05)，中药各剂量组之间存在一定的量效关系。结果见表1。
       表1  益气活血复方、硝苯地平对 SBP、HWⅠ、LVMⅠ的影响（略）
       与SHR空白组比较，☆P＜0.05，★P＜0.01；与用药前血压比较，△P＜0.05，▲P＜0.01；与中药低剂量组比较，◇P＜0.05
       表2  益气活血复方、硝苯地平对 ALD和AngⅡ的影响（略）
       与SHR空白组比较，☆P＜0.05，★P＜0.01；与用药前血压比较，△P＜0.05，▲P＜0.01；与中药低剂量组比较，◆P＜0.01
       2.2    大鼠心肌细胞形态学观察结果HE染色结果显示：空白对照组心肌纤维断裂排列紊乱，部分心肌肿胀间隙不清，有些出现较为明显的大面积心肌水样变性，心肌细胞体积增大，内容物成颗粒状，断裂融合，甚至有坏死，血管壁增厚。而中药高、中剂量组大鼠上述病变程度较轻，其中硝苯地平组也可以减轻上述心肌细胞的病理损伤，但作用不及中药组作用明显。VG染色结果显示：心肌胶原呈粉红色，肌纤维呈黄色。分布于心肌内冠状动脉周围，向细胞间质呈放射状分布。空白对照组分布最多。硝苯地平组胶原有所减少，而中药高、中剂量组胶原纤维较硝苯地平组减少更显著。
       2.3    循环血及心脏局部 ALD、AngⅡ浓度的变化中药高、中剂量组循环血及局部的AngⅡ、Ald浓度明显低于空白对照组(P＜0.05)，硝苯地平组局部 AngⅡ和 Ald浓度低于空白对照组(P＜0.05)。中药高剂量组 AngⅡ和循环 Ald浓度低于硝苯地平组(P＜0.05)，中药高剂量组 AngⅡ浓度明显低于中药低剂量组(P＜0.05)。结果见表2。
       　3  讨论
       中医虽无高血压左室肥厚之名，但归纳高血压左室肥厚患者的临床特征，多有年龄偏大、病程较长、反复发作、迁延难愈的特点，多表现为心悸健忘、气短神疲、腿软无力、胸闷、舌质紫暗等气虚血淤证表现。因此，结合中医“久病必虚，久病必淤”的理论，我们认为：高血压左室肥厚主要病机是本虚标实，气虚血淤。故将益气活血作为逆转左室肥厚的主要治法，并拟定益气活血复方。益气活血复方主要由黄芪、川芎、当归、赤芍、人参、丹参、葛根、降香等组成，方中重用黄芪，加强益气之功；川芎、降香，活血理气。全方补而不滞，活血而不伤血，共呈益气活血之功效。现代研究亦发现：丹参能够降低心肌局部醛固酮的含量，并能使 AngⅡ1型受体 (AT1R)表达减少，能够防治 SHR左室肥厚的形成［3～5］。离体研究发现，活血中药丹参、川芎及其有效成分丹参素、川芎嗪可抑制 AngⅡ引起的心肌肥大并呈一定的量效关系［6］。在我们过去的工作中发现：该方能降低血淤证大鼠血管内皮细胞内游离钙的浓度和血浆内皮素含量，具有钙通道阻断剂样的作用。同时，我们进一步研究发现，益气活血复方能减少血淤证大鼠血管内皮细胞黏附分子的表达，高、中、低剂量组间呈现明显的量效关系，也具有钙通道阻断剂样作用。Ca2＋超负荷是心肌肥厚发生的重要环节。心脏容量超负荷时，机械牵张可导致 AngⅡ、ET－1等致肥厚因子的释放，也可直接作用于心肌细胞膜上牵张激活的离子通道［7］，从而使Ca2＋内流增加，Ca2＋作为细胞内第二信使，可通过与钙调素结合，激活丝裂原激活的蛋白激酶 (MAPK)，导致核内原癌基因表达［8］，心肌细胞蛋白质合成增加，导致心肌肥厚。本实验发现，益气活血复方能够降低血压，并使得 HWI、LVMI等反映LVH的敏感指标的值明显降低，说明益气活血复方能使LVH发生逆转。我们以前的研究亦证明益气活血复方对钙离子通道有阻断作用，提示这可能是益气活血复方预防心肌肥厚的作用机理之一。在非血流动力学因素中，RAASLVH的形成关系较为密切［9］。AngⅡ不仅对心肌细胞的生长有直接作用，还可通过增强交感神经活性等途径，促使心肌细胞肥大［10］。 Ald可以促进 Na+H2O潴留，增加血容量，进而导致心肌肥厚。本实验结果发现：经不同剂量益气活血复方治疗后，血浆和局部组织中 AngⅡ和 Ald浓度亦有所降低，并呈明显的量效关系。而硝苯地平仅对心脏局部的 ALD、AngⅡ浓度有明显降低。这说明抑制 RAAS活性可能是益气活血复方防治心肌肥厚的另一重要机理，且益气活血复方逆转LVH疗效明显优于硝苯地平。
       　　参考文献：
       ［1］  Franz HM，Reingard K．Left ventricular hypertrophy:a pressure independent cardiovascular risk factor［J］．J Cardiovasc Pharmacol，1993：22.
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       ［5］  张代富，阮长武，刘中民，等．丹参对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响［J］．上海医学，2003，26(9)：669.
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       ［9］  张维忠．高血压与左室肥厚［J］.临床心血管病杂志，1993，9(6)：323.
       ［10］  盛  勇，杨源烈．血管紧张素Ⅱ及转换酶抑制剂在高血压左室肥厚中的作用［J］．心血管病学进展，1995，16(2)：92.

　　基金项目：广东省中医药管理局资助项目（NO.1050116）
       (暨南大学医学院，广东 广州  510632  ；广东省佛山市南海中医医院  528200； 暨南大学附属第一医院，广东 广州  510632)