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       【摘要】 
       目的考察灵雷菌质的抗炎镇痛作用。方法通过二甲苯致耳肿胀及醋酸引起毛细血管扩张法观察灵雷菌质的抗炎作用；采用热板法观察灵雷菌质的镇痛作用。结果灵雷菌质对二甲苯所致小鼠耳肿胀和醋酸引起的毛细血管扩张有良好的抑制作用；并能提高热致痛小鼠的痛阈。结论双向固体发酵后的灵雷菌质仍保留一定的抗炎与镇痛作用。
       【关键词】  双向性固体发酵；灵雷菌质；耳肿胀；痛阈
       Research on Anti-inflammatory and Analgesic Effects of the Fungal Fermentative Products in Tripterygium wilfordii Hook
       ZHOU Xuee， LIU Minliang， XIE Xiaomei*
       Key Laboratory of Modern Preparation of TCM of Ministry of Education,Jiangxi University of TCM,Nanchang 330004,China
       Abstract：ObjectiveTo research the anti-inflammatory and analgesic effects of fungal fermentative products in Tripterygium wilfordii Hook(ling lei fungal substance).MethodsThe models of ear swelling induced by dimethylbenzene and capillary permeability induced by acetic acid were used to observe the anti-inflammatory effect. Hot-plate method was used to observe the analgesic effect.ResultsThe Fungal Fermentative Products in ling lei fungal substance could significantly reduce the capillary permeability of mice，inhibit ear swelling induced by dimethylbenzene in mice，and elevate pain threshold．ConclusionThe fungal fermentation substances on ling lei fungal substance has anti-inflammatory and analgesic effects.
       Key words：Bi-directional solid-state fungal fermentation；  Ling lei fungal substance；  Ear swelling；  Pain threshold
       
       雷公藤Triterygium wilfordii Hook，为卫矛科雷公藤属植物。药理学研究表明其有免疫抑制、抗肿瘤、抗生育、抗炎等作用。临床已被广泛用于类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、儿童原发性和继发性肾病综合征、成人各种肾炎、系统性红斑狼疮、血管炎和银屑病等各种皮肤病［1～3］，但雷公藤对人体有严重的不良反应［4］。近年来，对雷公藤减毒持效的研究已经成为热点，但一直未有满意结果［5，6］。本实验室研究表明，应用双向性固体发酵技术能显著降低雷公藤急性毒性并保持免疫抑制作用（另文发表）。为探讨在降低雷公藤毒性的同时是否仍能保持其抗炎镇痛的作用，我们进行了以下研究。现报道如下。
       1  材料与仪器
       1.1  药物灵雷菌质(本实验室提供)，G30代表发酵30 d的灵雷菌质；地塞米松(浙江仙琚制药股份有限公司，批号060432)；阿司匹林（南京白敬宇制药有限公司，批号071118）。
       1.2  动物
       昆明种小鼠,体重18～22 g，由江西医学院实验动物中心提供。
       1.3 仪器
       UV-2102C型紫外分光光度仪(尤尼柯上海仪器设备有限公司)；BS系列电子天平(塞多利斯)；TGL-16G型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；ＤＫ－８ＡＸ型电热恒温水槽（上海一恒科技有限公司）。
       2 方法与结果
       2.1  统计学处理
       通过SPSS11.5软件进行独立样本t检验。数据以±s表示。
       2.2 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响［7］ 
       取昆明种雄性小鼠60只（18～22 g），随机分为6组，每组10只，分别为雷公藤生药组，G30高、中、低剂量组，地塞米松（阳性）组，生理盐水（NS）组即空白组。根据小鼠体重按每10 g 灌胃0.2 ml计算给药量，G30高、中、低的浓度分别为其LD50的1/8，1/12，1/16，地塞米松的浓度为0.003 75 g/kg，空白组按体重灌服等量生理盐水。连续灌胃给药4 d。末次给药后1 h，用移液枪在小鼠左耳涂抹二甲苯正反两面各10 μl。30 min后，将小鼠颈椎脱臼致死，沿耳廓基线剪下两耳。用6 mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，电子天平称重。计算肿胀抑制率。结果见表1。
       
       肿胀抑制率（%）=（A﹣B）／A×100%
        式中，A代表空白组肿胀度，B代表受试药物组或阳性对照药物组肿胀度。
       
       肿胀度(g)=左耳重量-右耳重量
        从表1可见G30明显减轻小鼠耳肿胀程度（P＜0.01)，以G30中剂量组为佳。表1  药物对小鼠耳肿胀度的影响（略）
       2．3  对毛细血管通透性的影响［7］  　
       所选动物、分组和给药方法同“2.2”项。末次给药后1 h各鼠尾静脉注射1%伊文思蓝0.1 ml/10g，随即腹腔注射0.6%醋酸0.1 ml/10 g。20 min后将小鼠颈椎脱臼致死，腹腔注射NS 6 ml。轻揉小鼠腹部后，沿腹中线剪1小口，倾出腹腔溶液约5～6 ml，1 000 r/min离心5 min。在紫外分光光度计590 nm处测定吸收度(OD值)。结果见表2。表2  药物对小鼠腹腔染料渗出的影响（略）
        从表2可见生药和G30高剂量组可减少小鼠腹腔伊文思蓝渗出量（P＜0.05，P＜0.01)，但地塞米松组无明显变化，可能与用药量和时间有关。
       2.4  热板法镇痛试验［7］  
       将雌性小鼠置于(55.4±0.5)℃恒温热板上，以舔后足为指标，筛选痛阈值大于5 s小于30 s的合格小鼠60只。将筛选的合格小鼠随机分为6组，分别为空白组、G30 3个剂量组(即G30高，G30中，G30低)、阿司匹林组（0.2 g/kg）、雷公藤生药组。各组按0.2 ml/10 g体重ig给药，空白组给予同等剂量的生理盐水，连续4 d。第4天给药后15，60，90，120，180 min依次测量各小鼠痛阈值，并计算痛阈提高百分率。结果见表3～4。表3  药物对小鼠痛阈值的影响（略）表4  给药后不同时间点小鼠的痛阈提高百分率（略）
       
       痛阈提高百分率（%）=（用药后平均痛阈-用药前平均痛阈）/用药前平均痛阈值×100%
        从表3中可见，与空白对照比较，阿司匹林给药组、G30组均能升高热致痛小鼠痛阈，且G30组中剂量组的镇痛维持时间、痛阈提高百分率较阳性对照组高。
       3 讨论
        双向性固体发酵是根据中药被某些真菌污染霉变（发酵）后引起中药药性药效变化的原理，用现代科学技术在人工严密控制条件下接种有益的药用真菌对中药进行发酵，产生的菌丝体发酵物质（简称菌质）将赋有新的成分与药效，该药性菌质是人工制造的新药材［8］。中国早在1500年前就有“制曲工艺”生产多种曲、酒等供药用，其生产工艺可以认为是双向性固体发酵的雏形。庄毅教授带领的科研组在20世纪90年代运用药用真菌固体发酵技术研制了中药一类新药“槐耳菌质”“槐耳颗粒”，并在此基础上进行了“槐芪菌质”的研究，十余年的研究表明药性菌质较药用菌质可能有更好更广的药效，主要表现在增效、扩用、解毒等方面［9］。
       
       本实验室采用双向性固体发酵技术已经获得了毒性降低仍然保持免疫抑制作用的G30灵雷菌质。在此基础上我们用常规方法考察了G30的镇痛、抗炎作用，结果表明灵雷菌质（G30）具有较好的抗炎镇痛作用，进一步表明了双向性固体发酵后灵雷菌质减毒持效作用，为研制减毒持效的灵雷菌质新药材奠定了基础。目前，本实验室正在对灵雷菌质治疗肾炎、类风湿性关节炎模型等方面开展实验研究。
          
       致谢：感谢庄毅教授在本研究中给予的指导！
       【参考文献】
         　　［1］黄怀鹏,牛联改, 陈志强，等，雷公藤对系膜增生性肾炎大鼠ICAM-1及其mRNA影响的研究［J］.中华实用中西医杂志，2002，2 (15) ：9.
       
       ［2］刘春芳 ，林娜 ，贾红伟，等.雷公藤甲素对Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠免疫功能的影响［J］.中国中医药信息杂志,2004，7（11）：7.
       
       ［3］张壤之，孙先进，王宗泽.雷公藤多甙片配合中药治疗寻常型银屑病67例［J］.皮肤病与性病，2007，29（1）：22.
       
       ［4］李龙．雷公藤及昆明山海棠引起的肾损害［J］.中国临床医生，2006，34（12）：713.
       
       ［5］梁文波．中药复方对抗雷公藤多甙毒性的研究［J］.中草药，1999，30（12）：916.
       
       ［6］罗雪芹，刘家玉，陈东辉，等．对雷公藤的减毒增效作用研究［J］.中药药理与临床，2002，18(1)：17.
       
       ［7］陈奇．中药药理实验方法学，第1版［M］．北京：人民卫生出版社，1993：303.
       
       ［8］庄毅 ，池玉梅 ，陈慎宝，等．药用真菌新型固体发酵工程与槐芪菌质的研究［J］．中国药学杂志，,2004，39(3)：175.
       
       ［9］庄毅．真菌抗癌药物槐耳颗粒的研制［J］.中国肿瘤，1999，8（12）：540.