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薏苡非种仁部位及不同产地不同采收期茎中多糖的含量测定
作者:李厚聪 刘圆 李莹    
作者单位:西南民族大学少数民族药物研究所,四川 成都 610041

《时珍国医国药》 2009年 第7期

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       【摘要】 
       目的对薏苡非种仁部位(根、茎和叶)及不同产地、不同采收期茎的多糖进行含量测定,并进行品质评价,寻找薏苡新的药用部位。方法采用苯酚-硫酸法。结果非种仁部位中多糖含量分别为:根54.374 mg·g-1,茎56.932 2 mg·g-1和叶52.754 9 mg·g-1;不同产地茎中多糖含量分别为:陕西汉中汉台区82.775 9 mg·g-1,广西恭城79.766 1 mg·g-1,云南大度岗74.305 2 mg·g-1,四川峨眉山69.89 mg·g-1,四川成都中医药大学植物园63.378 4 mg·g-1,四川新津59.698 6 mg·g-1,云南景洪55.782 9 mg·g-1,湖北恩施52.754 9 mg·g-1,四川大学华西植物园38.585 1 mg·g-1;不同采收期(6~11月)茎中多糖含量呈递增趋势。结论非种仁部位多糖含量中,根、茎和叶的含量差异不大,并稳定在比较高的水平上,从资源的综合和可持续利用的角度考虑,建议薏苡的非种仁部位可作为薏苡多糖的稳定来源,可以入药;不同产地中薏苡茎的多糖含量差异较大,说明产地的气候、土壤等条件对薏苡多糖含量有明显影响;不同采收期(6~11月)中薏苡茎的多糖含量随着时间的推移而逐渐增加,表明薏苡花期(7~9月)、果期(8~10月)间多糖积累增多。
       【关键词】  薏苡;根; 茎; 叶;多糖;含量
       Determination of Polysaccharides in Root, Stem and Leaf, Different Places and Different Collecting Time from Coix lacryma-jobi L.  var. mayuen (Roman.) Stapf
       LI Houcong, LIU Yuan,LI Ying
       Ethnic Pharmaceutical Institute of Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041,China
       Abstract:ObjectiveTo determine polysaccharides from root, stem and leaf of C. lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf, evaluate its quality and find new medical recource. MethodsThe phenol-sulfuric acid method was adopted. ResultsThe content of polysaccharides from root, stem and leaf of C. lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf was 54.374 mg·g-1, 56.932 2 mg·g-1and 52.754 9 mg·g-1 respectively. The content of polysaccharides in different places was as follow: Hantai of Hanzhong in Shanxi Province of 82.775 9 mg·g-1, Gongcheng in Guangxi Province of 79.766 1 mg·g-1,Dadugang in Yunnan Province of 74.305 2 mg·g-1, Emei Mountain in Sichuan Province of 69.89 mg·g-1, the Medical Plant Garden of Traditional Chinese Medical University in Sichuan Province of 63.378 4 mg·g-1, Xinjin in Sichuan Province of 59.698 6 mg·g-1, Jinghong in Yunnan Province of 55.782 9 mg·g-1, Enshi in Hubei Province of 52.754 9 mg·g-1,the West China Medicaly Plant Garden of Sichuan University in Sichuan Province of 38.585 1 mg·g-1. The content of polysaccharides in different collecting time (from June to November) was increased. ConclusionThis method is simple, accurate, reproducible and suitable for the determination of polysaccharides in C. lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf. Considered the polysaccharides, the root, stem and leaf of C. lacryma-jobi L.  var.  mayuen (Roman.) Stapf can be medical used for polysaccharide resources. The content of polysaccharides in different places is different, and its content can be obviously influenced by its surroundings. The results in different collecting time (from June to November) showed that the content polysaccharides from its flower phase (from July to September) and fruit phase (from August to October) is increasing.
       Key words:C.lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf;   Root; Stem; Leaf;Polysaccharides;   Content
        薏苡为禾本科薏苡属植物薏苡Coix lachrymal-jobi L.的干燥全草、果实和种仁。《中国药典》从1963年版开始收载禾本科植物薏苡Coix lacryma-jobi L.var.mayuen (Roman.) Stapf的干燥成熟种仁;2005年版《中国药典》记载薏苡仁粉末的鉴别、油脂类成分的薄层鉴别和甘油三油酸酯的含量测定项;其功效为健脾渗湿、除痹止泻、清热排脓;主要用于水肿、脚气、小便不利、湿痹拘挛、脾虚泄泻、肺痈、肠痈、扁平疣的治疗[1]。薏苡根被收载于1994年版《上海市中药材标准》中。
        薏苡仁及薏苡根中含有丰富的多糖成分。国内外学者从薏苡中分离得到多糖成分,经现代药理学研究证明这些多糖成分具有免疫兴奋、抗补体活性以及降血糖等多种药理作用[2~6]。
        薏苡的根、茎、叶、果实、种仁等药用部位在蒙古族、藏族、苗族、彝族、侗族、佤族、傈僳族、傣族、壮族、毛难族、瑶族、哈尼族、景颇族、水族、基诺族等民族中均有大量使用,薏苡根功用与薏苡仁基本相同,清热,利尿并有驱虫作用,能治虫积腹痛,薏苡叶具有降压等作用[7],而现有文献中,薏苡根、茎、叶的研究涉及较少。
        目前对薏苡非种仁部位中多糖的研究报道很少,仅见于刘春兰等[8]对薏苡根中水溶性多糖的研究,发现其单糖组成为阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖。本课题拟以多糖为指标,对薏苡非种仁药用部位及不同产地、不同采收期茎进行品质评价,以期能寻找到薏苡新的药用部位。
       1  仪器与试剂
        Unicam UV-500(Thermo electron corporation)紫外-可见分光光度计; METTLER AE240电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);SHB-3循环多用真空泵(郑州杜甫仪器厂);SENCOR系列旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司); DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);800型离心沉淀器(上海手术器械厂)。
        (+)葡萄糖(AR,105 ℃干燥至恒重);4%重蒸苯酚溶液(使用前配制);其他试剂均为国产分析纯。薏苡药材样品来源见表2,经刘圆、戴斌、彭朝忠副教授鉴定。
       2 方法与结果
       2.1 葡萄糖标准曲线的绘制
       称取干燥至恒重的葡萄糖标准品28.11 mg,精密称定,置100 ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,配成浓度为281.1 μg·ml-1的对照品溶液,贮藏备用。精密吸取3.0 ,5.0 ,7.0 ,9.0  ,11.0  ,13.0 ml 的葡萄糖标准溶液分别置于50 ml容量瓶中,稀释至刻度,再精密吸取1.0 ml 于具塞试管中。分别滴加4.0 %苯酚溶液1.0 ml,摇匀,迅速分别滴加浓硫酸5.0 ml,摇匀后置沸水浴中加热30 min,取出用冰水浴迅速冷却至室温后,以蒸馏水显色溶液为空白,于490 nm处测定吸光度值。以取样量X(mg)为横坐标,吸光度Y为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程为:Y=4.991 1X-0.025 1(r=0.999 8)。结果表明,在0.016~0.064 mg范围内,葡萄糖取样量与吸收度呈良好线性关系。
       2.2 换算因子的测定
       精密称取40℃干燥至恒重的薏苡多糖50 mg,置100 ml容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。经脱蛋白、脱色、去小分子等处理后,精密量取处理后溶液的体积,精密吸取处理液0.5 ml按标准曲线项下操作,测定吸光度,求出薏苡多糖供试液中葡萄糖浓度,按公式f=W/C×D计算换算因子,式中W为多糖质量(g),C为多糖液中葡萄糖的浓度(μg·ml-1),D为多糖的稀释倍数。结果f=2.153。
       2.3 样品溶液的制备
       按照前期优化的薏苡多糖的提取工艺,分别精密称取薏苡药材粉末(过2号筛)0.5 g,置100 ml圆底烧瓶中,分别加入15 ml石油醚脱脂30 min,回收石油醚,蒸干得残渣,加20倍蒸馏水回流提取2次,1.5 h/次。合并滤液,稀释,定容至500 ml的容量瓶中,作为样品溶液。
       2.4 精密度实验
       取同批样品溶液,重复测定吸光度5次,RSD为1.06 %。结果表明精密度良好。
       2.5 稳定性实验
       取样品溶液适量,显色后每隔0.5 h测定1次吸光度,共6次,结果薏苡多糖在显色后3.0 h内稳定性良好。
       2.6 重复性实验 
       分别取同一批样品,制备样品溶液,分别测定吸光度,结果RSD为0.86 %(n=5)。结果表明重复性良好。
       2.7 加样回收率
       实验精密吸取1 ml样品液分别置于5个容量瓶中,分别精密吸取0.1,0.2 ,0.3 ,0.4 ,0.5 ml葡萄糖标准溶液,按标准曲线项下方法,自“加苯酚试剂1 ml”起操作,测定吸收度,计算多糖回收率为98.62 %,RSD为1.27 %(n=5)。
       2.8 样品含量测定
       精密称取不同部位及不同产地和不同采收期茎的19批薏苡药材0.5 g,按“2.3”项下方法制备样品溶液。精确量取样品液0.5 ml,按“2.1”项下方法,自“加苯酚试剂1 ml”起操作,测定吸收度,按下式计算多糖含量。结果见表1~3。表1  不同药用部位的薏苡多糖含量(略)表2  不同产地茎中的薏苡多糖含量(略)表3  不同采收期茎中的薏苡多糖含量(略)
        多糖含量(%)=C×D×f/W×100%
        式中:C为样品溶液的葡萄糖的浓度(μg);D为样品溶液的稀释倍数,f为换算因子,W为样品的重量(μg)。
       实验结果表明,根、茎和叶的含量差异不大,但含量均比较高。
        实验结果表明,不同产地间薏苡茎的多糖含量差异较大。
        结果表明,不同采收期(6~11月)的薏苡多糖含量呈递增的趋势。
       3 讨论
       用热水浸提薏苡多糖时,很容易使部分多糖发生水解,从而破坏多糖的活性结构,所以用水反复浸提比较合适。还有报道提取多糖时采用不同pH值的水溶液提取,但是不同pH值的水溶液对多糖结构和药理的影响不清楚,所以我们采取的是中性水溶液提取。
        用透析袋除去小分子后的多糖溶液经显色后,测定吸光度值出现负值,可能是选择的透析袋规格不对,而薏苡多糖的分子量比较小,使大量的多糖被透析损失掉。
       
       不同药用部位多糖含量中,根、茎和叶的含量差异不大,并稳定在比较高的水平上,从资源的综合和可持续利用的角度考虑,建议:薏苡的非种仁部位可作为薏苡多糖的稳定来源,可以入药。
       
       不同产地中薏苡茎的多糖含量差异较大,说明产地的气候、土壤等条件对薏苡多糖含量有明显影响;由于大多数样品均是野生,很难控制其正确的生长期,所以正在进行栽培种的进一步研究。
        不同采收期(6~11月)中薏苡茎的多糖含量随着时间的推移而逐渐增加,表明薏苡花期(7~9月)、果期(8~10月)间多糖积累增多。由于采样不全的原因,其它月份正在进一步的研究之中。
       【参考文献】
           [1]国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:260.
       
       [2]徐梓辉,周世文,黄林清.薏苡仁多糖的分离提取及其降血糖作用的研究[J].第三军医大学学报,2000,6:578.
       
       [3]徐梓辉,周世文,黄林清,等.薏苡仁多糖对实验性2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响[J].中国糖尿病杂志,2002,10(1):45.
       
       [4]徐梓辉,周世文,黄林清.薏苡仁多糖对四氧嘧啶致大鼠胰岛细胞损伤的保护作用[J].中国药理学通报,2000,18(6):639.
       
       [5]徐梓辉,周世文,陈卫,等.薏苡仁多糖对2型糖尿病大鼠主动脉内皮素1基因表达的影响[J].中国动脉硬化杂志,2006,14(3):194.
       
       [6]苗明三.薏苡仁多糖对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响[J].中医药学报,2002,30(5):49.
       
       [7]贾敏如, 李星炜.中国民族志要[M].北京:中国医药科技出版社,2005:174.
       
       [8]刘春兰,周宜君,巴特.薏苡多糖的提取及其单糖组分的分析[J].中央民族大学学报(自然科学版),2005,14(1):49.

经典中医古籍

中药学教材(附图片)

穴位数据库(附图片)