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       【摘要】 
       目的考察注射用银杏叶提取物与木糖醇输液的配伍稳定性。方法利用高效液相色谱法测定银杏叶提取物在木糖醇输液中于4℃、25℃和37℃条件下0～6 h内含量变化情况，并同时观察记录配伍溶液0～6 h内外观、pH值变化情况。结果0～6 h内，银杏叶提取物在木糖醇输液中的含量、颜色及pH值无显著变化。结论银杏叶提取物与木糖醇输液配伍后0～6 h内稳定。
       【关键词】  银杏叶提取物注射液；配伍稳定性；木糖醇输液；高效液相色谱法
       Study on the Compatible Stability of the Ginkgo biloba Extract Injection and Xylitol Injection
       GAO Yuanyuan, TANG Daoquan, WEI Yaqin, LIU Yan
       Experimental Center for Pharmacology, Xuzhou Medical College, Xuzhou, Jiangsu 221004,China
       Abstract:ObjectiveTo study the compatible stability of Ginkgo biloba extract (EGb) injection and xylitol injection. MethodsVariations of EGb content in xylitol injection were determined by HPLC, the pH was determined with pH meter and the color and clarity were assessed at 4℃，25℃，37℃ during 0～6 hours . ResultsNo obvious variations were found in the content of EGb injection, the color and the pH value within 6 hours. Conclusion EGb injection can be used with xylitol injection for 6 hours.
       Key words:Extract of Ginkgo biloba Injection；  Compatible stability；  Xylitol injection；  HPLC
       
       银杏叶提取物为银杏叶经现代工艺制成的提取物，其主要活性化学成分为两大类：黄酮类及萜类［1］。黄酮类成分包括单黄酮、黄酮醇苷、乙酰化黄酮醇苷、双黄酮、黄烷-3-醇类以及原花色素等，其中黄酮醇苷在银杏叶中含量最丰富，大部分黄酮醇苷结构已经通过其水解后的苷元如槲皮素、山柰酚、异鼠李素等得到证实［2］。银杏叶提取物中另一类重要成分是萜类银杏内酯，目前已经证实结构的有银杏内酯A、B、C、J、M及白果内酯。中国古代即用银杏治疗哮喘、支气管炎等呼吸系统疾病，现代药理研究表明银杏叶中黄酮类成分具有清除自由基、抗氧化等药理作用［3～5］，银杏内酯类成分具有抑制血小板活化因子及炎症分泌物的作用。另有研究报道银杏叶提取物可用于阿尔茨海默症、抑郁症、糖尿病、神经疾病、阳痿、记忆障碍、外周血管疾病、间歇性跛行、脑转耳鸣等疾病的治疗［6～9］。在临床上常用于输液配伍进行静脉滴注。木糖醇注射液（xylitol injection）是一种输液型制剂，具有体内代谢完全，又不受胰岛素影响的特点，主要作为糖、蛋白质、脂肪代谢异常调整剂及营养剂广泛应用于临床，如用作糖尿病及其他体弱危重患者和各种手术前后患者的能量与营养补液。由于银杏叶提取物注射液常用于老年人心脑血管疾病的治疗，糖尿病在老年患者中发病率较高，为补充老年患者的营养与能量，将银杏叶提取物与木糖醇注射液进行配伍可用于该类患者的疾病治疗。尽管银杏叶提取物注射液与临床常用输液的配伍已见报道［10，11］，但与木糖醇注射液的配伍稳定性研究尚未见报道。为此模拟临床常用药物浓度，对银杏叶提取物与常用输液木糖醇配伍的稳定性进行外观、pH值及含量变化的考察，并对影响其稳定性的外部条件也进行了考察，为临床用药提供依据。
       1 试药与仪器
       1.1 试药
       银杏叶提取物注射液（舒血宁，黑龙江珍宝岛制药有限公司，批号20070503）；木糖醇注射液（徐州远恒药业有限公司，批号：080318）；对照品槲皮素(100081-200406)、山柰酚(110861-200606)、异鼠李素(110860-200407)，均购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯，其他均为分析纯；双蒸水，自制。
       1.2 仪器
       Shimadzu LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津制作所），包括SCL-10Avp System Controller，SPD-M20A diode array Detector，LC-10ADvp两元泵，7725i进样器；LcSolution 色谱数据工作站； UV2450紫外分光光度计（日本岛津制作所）。自动双重纯水蒸馏器(型号SZ一93，上海亚荣生化仪器厂)，Ultrasonic Generator (型号H66MC，无锡超声电子设备有限公司)，梅特勒托利多AE240电子天平(十万分之一，瑞士Mettler Toledo)。
       2 方法与结果
       2.1 标准贮备液的配制
       精密称取槲皮素、山柰酚、异鼠李素对照品适量，用甲醇溶解并定容至25 ml棕色容量瓶中，摇匀即得含槲皮素201.6 μg·ml-1，山柰酚49.2 μg·ml-1，异鼠李素39.2 μg·ml-1的混合对照品标准贮备液， 4℃保存，备用。
       2.2 样品溶液（配伍液）的配制
       根据药品说明书最大用量配制配伍液，精密量取银杏叶提取物注射液20 ml（含银杏叶提取物70mg）置250 ml容量瓶中，用木糖醇溶液稀释至刻度，摇匀，分别置于25℃，37℃，4℃冰箱中，备用。
       2.3 供试品溶液的制备
       分别于配伍后0，1，2，4，6 h各取10 ml样品溶液置于50 ml烧瓶中，加甲醇-25%盐酸（4∶1）混合液25 ml，摇匀，加热回流30 min，冷至室温，转移至50 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取滤液即得。
       2.4 含量测定方法学考察
       2.4.1 最大波长的确定
       取槲皮素、山柰酚、异鼠李素标准品。适量混匀，以甲醇-0.1%甲酸溶液（30∶70）溶解，于Shimadzu UV2450紫外分光光度计上在200～400 nm范围内进行扫描，根据所得的紫外吸收光谱，确定检测波长为360 nm。
       2.4.2 色谱条件［12］
       色谱柱为Kromasil C18（大连依利特有限公司，250 mm×4.6 mm，5μm），柱温：35℃，检测波长：360 nm，进样量：20 μl，流速1.0 ml·min-1。流动相：A为甲醇，B为0.1%甲酸水溶液；线性梯度洗脱，洗脱程序：0～5 min，70～65%B；5～40 min，65～60%B；40～50 min，60～55%B；50～70 min，55～50%B。
       2.4.3 线性关系
       考察精密量取混合对照品标准贮备液适量，用甲醇-0.1%甲酸水溶液（30∶70）分别稀释2，5，8，10，20，40倍。按已建立的色谱条件，取标准贮备液及各浓度对照品溶液分别进样20 μl分析，每个浓度点分别在实验开始、实验中间、实验结束时各进样1次，以浓度（X，μg·ml-1）对峰面积平均值（Y）回归，得回归方程。见表1。
       表1  线性关系实验结果（略）
        结果表明，槲皮素在5.04～201.6 μg·ml-1，山柰酚在1.23～49.2 μg·ml-1，异鼠李素在0.98～39.2 μg·ml-1浓度范围内线性关系良好。
       2.4.4 稳定性实验
       取银杏叶提取物注射液，按“2.3”项下制备样品溶液，0.45 μm过滤，室温条件下分别在0，1，3，5，10，15，24 h取20 μl注入高效液相色谱仪，记录色谱峰并分析，计算3个黄酮类成分色谱峰面积的RSD分别为2.6%，2.9%，2.2%。结果表明，在测定条件下银杏叶提取物与木糖醇配伍溶液稳定。
       2.4.5 精密度实验
       取银杏叶提取物注射液，按“2.3”项制备供试品溶液，连续进样6次，以峰面积计算，3个成分日内精密度（RSD）分别为1.9%，1.2%，1.5%。连续分析6 d，每天进样1次，以峰面积计算，3个成分日间精密度（RSD）分别为2.9%，2.3%，2.5%。结果表明本方法精密度好。
       2.5  配伍溶液稳定性考察
       2.5.1 外部条件对银杏叶提取物木糖醇配伍溶液稳定性的影响
       精密吸取供试品溶液20 μl，在“2.4.2”项色谱条件下进样分析，记录色谱峰（见图1）。按外标法分别计算槲皮素、山柰酚和异鼠李素的含量，按：总黄酮醇苷含量=（槲皮素含量+山柰酚含量+异鼠李素含量）×2.51式换算成总黄酮醇苷的含量，并以0 h浓度为100%，计算其他时间的百分含量。结果见表2。由表中结果可以看出，在4，25，37℃条件下，银杏叶提取物与木糖醇配伍溶液中总黄酮醇苷的含量均无显著性变化（RSD均小于3%），而且不同条件对配伍溶液中银杏叶提取物含量的影响无显著性差异（P＞0.05）。
       2.5.2 不同外界条件对银杏叶提取物注射液与木糖醇配伍液pH值的影响
       取银杏叶提取物注射液，按“2.2”项配制样品溶液，用精密数显温度计分别于0,1，2，4，6 h测定保存在4，25，37℃条件下溶液的pH值。结果见表2。
         
       由表2中实验结果可以看出，在4，25，37℃的外部条件下，银杏叶提取物与木糖醇配伍溶液的pH值的变化率都不大（RSD均小于2%）。
       2.5.3 不同外界条件对银杏叶提取物注射液与木糖醇配伍液颜色的影响
       取银杏叶提取物注射液，按“2.2”项配制样品溶液，分别观察在4，25，37℃条件下溶液在0，1，2，4，6 h的颜色变化，结果表明在6 h内溶液澄清透明，显淡黄色，没有发生变化。无浑浊、无沉淀产生，微粒计数无明显增加，符合2005年版《中国药典》中对输液中微粒的规定。表2  外部条件对银杏叶提取物与木糖醇注射液配伍稳定性的影响（略）
       3 讨论
        实验结果表明银杏叶提取物注射液与木糖醇注射液配伍后，6 h内溶液的颜色、pH值（RSD均小于3%）无明显变化，银杏叶提取物总黄酮苷的含量均保持在90%以上（RSD均小于3%）。因此，银杏叶提取物注射液可以与木糖醇在任意温度条件下配伍，该配伍液在6 h内是稳定的。以上结论可以为医院临床用药提供参考依据。
        木糖醇在体内所释放的能量与葡萄糖相当，且在机体缺乏胰岛素引起糖利用障碍时不会妨碍代谢，静脉滴注木糖醇不会引起血、尿糖升高［13］，故对于合并心血管疾病的糖尿病患者，银杏叶提取物加木糖醇不失为一个好的治疗选择。
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