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       【摘要】 
       目的优化白附子最佳提取工艺。方法以β-谷甾醇得率为指标，在提取次数、提取工艺、浸渍剂浓度等条件相同时，考虑乙醇溶液pH 值、提取时间、提取温度，选用L16(45)正交进行实验，确定最佳提取工艺。结果最佳提取工艺为第1煎提取液pH为7，第2煎提取液pH为9, 提取温度85℃,提取时间6 h。结论半仿生提取法优选白附子最佳提取工艺，方法简便，可行。
       【关键词】  白附子；半仿生提取法；β-谷甾醇；正交设计
       Optimization of Semi-bionic Extraction of Rhizoma Typhonii
       CAO Zhiyou, WANG Xincheng, OUYANG Jin, LEI Juntao
       1.Directly Subordinated Hospital of Jilin Medical and Pharmacological College; 2.School of Pharmacyology,Jilin Medical College Jilin 132013, China
       Abstract：ObjectiveTo optimize the semi-bionic extraction of Rhizoma Typhonii.MethodsUnder the unchanged conditions including extracting frequency, extracting course and concentration of solvent , with the yield rate of isoflavonoids of Rhizoma Typhonii as index as index, L16(45) orthogonal design was used to investigate the effects of pH, extraction temperature, and extraction time. ResultsThe first extraction pH was 7. The second extraction pH was 9. The extraction temperature was 85 ℃. The extraction time was 6 hours. ConclusionOptimization of semibionic extraction methods of Rhizoma Typhonii by orthogonal design is available.
       Key words：White aconite;  SBE law;  β-sitosterol;  Orthogonal design
       
       白附子Typhonium giganteum Engl属天南星科植物，《神农本草经》中被列为上品。功能祛风痰，通经络，镇痉止痛，散结解毒，主要用于中风痰壅，口眼斜，半身不遂，破伤风，头痛，风湿痹痛，肢体麻木，瘰疬痰核，阴疽肿毒，毒蛇咬伤治疗。近年报道其治疗癌症效果显著。白附子可降低瘤细胞增殖率，减低瘤细胞的侵袭性，恢复机体免疫功能，对瘤细胞具有细胞毒作用［1～3］。白附子所含有效成分主要为β-谷甾醇、β-谷甾醇-D-葡萄糖苷，内消旋肌醇，胆碱，尿嘧啶，琥珀酸，棕榈酸，亚油酸，三亚油酸甘油酯，二棕榈酸甘油酯，并含白附子凝集素等易溶于醇的物质。白附子中主要有效成分β-谷甾醇( Chlorogcnic acid)具有抗肿瘤的活性，以β-谷甾醇为指标研究其最佳提取工艺是吉林省教育厅重点课题的一个主要部分。
        本实验采用半仿生提取法优选白附子最佳提取工艺。
       1  仪器与材料
        紫外分光光度计（UV1100型，中国，北京瑞利分析仪器公司）；旋转薄膜蒸发仪（RE-52AA型，中国，上海亚荣生化仪器厂）；循环水式真空泵［SHZ-D(III)，中国，巩义市予华仪器有限责任公司］；电子天平（沈阳龙腾电子有限公司）；数控超声波清洗器（KQ-100DB型，中国，昆明市超声仪器有限公司）。
       
       白附子的块茎（购于大千药业，由吉林医药学院雷钧涛副教授鉴定为天南星科植物Typhonium giganteum Engl的干燥块茎）。β-谷甾醇标准品（上海融禾医药科技有限公司，批号：080109），所用试剂均为分析纯。
       2 方法与结果
       2.1 半仿生正交实验
       设计本文设计在提取工艺、乙醇浓度相同的条件下，用不同pH 值的乙醇进行提取，并考虑提取温度及提取时间等因素，选用L16(45)正交表安排实验。见表1。表1  因素水平（略）
       提取液乙醇浓度为95%，第1煎、第2煎固液比均为1∶6，二煎时间比为2∶1，pH 值的调节用稀HCl 和Ca(OH)2 饱和溶液。
       2.2 样品液的制备
       将白附子去皮后切成碎末，称重为20 g，装入250 ml圆底烧瓶，按正交实验列号在恒温水浴中加热回流提取两次(两次回流温度均相同，加醇量均为药材量的6倍，第1 煎醇pH 值用稀HCl调至规定值，第2煎水的pH值用饱和Ca(OH)2调至规定值，醇的pH值及提取温度、提取时间按表2) 滤过，合并滤液，浓缩至浸膏（相对密度为1.12）。
       2.3 标准曲线的绘制
       精密称取9 mg β-谷甾醇标准品，用CHCl3定容到5 ml容量瓶中为对照液。将对照液以CHCl3为空白，在200～400 nm波长范围内扫描。β-谷甾醇在234 nm下有最大吸收。用刻度移液管分别准确量取对照液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml于5 ml容量瓶中，加CHCl3至刻度，摇匀。以CHCl3为空白，在紫外分光光度计上测其吸光值，以吸光值为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。Y = 0.001 3X+0.074 , R2=0.997 8。
       2.4 β-谷甾醇的测定
       将提取物干膏用CHCl3溶解并定容于25 ml容量瓶中，精密量取1 ml置10 ml容量瓶中，加CHCl3定容到10 ml为样品液。以CHCl3为空白对照，用紫外分光光度计在234 nm处测定吸光度。根据标准曲线计算β-谷甾醇提取液浓度。表2  L16(45)正交实验结果（略）
        
       对表2 实验结果进行极差分析。可知，影响β-谷甾醇提取因素的主次顺序为：提取时间＞提取温度＞第2煎pH值＞第1煎pH值。以β-谷甾醇含量为指标，最佳提取条件为A4B2D4E4，即第1煎pH值为7，第2煎pH值为9，提取温度为85℃，提取时间为6 h。
       3 小结
        影响白附子的半仿生提取因素为:提取时间>提取温度>第2煎pH>第1煎pH。最佳工艺条件为第1煎提取液pH为7，第2煎提取液pH值为9，提取温度为85℃，提取时间为6 h。通过半仿生提取能改善白附子的生物利用度。
         
       文献报道的半仿生提取大多用水作为溶剂，用均匀设计优选提取工艺［4,5］，用乙醇溶液作为溶剂和正交实验优选半仿生提取工艺文献报道很少。已有文献报道的“半仿生”提取都是在其它条件不变的条件下,主要考察pH 值及提取时间等因素,都是用水作为提取溶剂［6］。用水作为浸取剂将带入淀粉、多糖类及蛋白质等杂质,给后续纯化分离增加难度。并且β-谷甾醇溶于氯仿、热乙醇, 而不溶于冷乙醇、水等，故本实验用乙醇加热回流提取。根据药物分子生物学,本文以β-谷甾醇为考察指标，采用正交实验来优化“半仿生”提取工艺［7］。
        用不同pH 值的乙醇溶液取代以往的水作为浸取剂进行半仿生提取，可降低杂质的浸出率，利于后续的分离纯化工作。从实验结果可以看出，提取剂的pH 值对白附子药效指标有较大的影响作用。口服药物经过胃肠转运，经过不同的酸性和碱性环境，对药物的药效有较大影响。半仿生提取就是根据此原理设计的。可见，半仿生提取是符合生物药剂学的理论体系的。
       【参考文献】
         　　［1］单保恩,张金艳，李巧霞，等.白附子对人T细胞和单核细胞的调节活性［J］.中国中西医结合杂志,2001，21(10)∶768.
       
       ［2］尹建元,朴春姬,杨建增，等.禹白附抗肿瘤活性研究［J］.长春中医学院学报, 2000，16(2)∶52.
       
       ［3］陈雪松，陈迪华，斯建勇.中药白附子的化学成分研究(Ⅰ) ［J］.中草药，2000，31(7):495.
       
       ［4］刘娟,朱兆荣,杨敏,等.半仿生法提取淫羊藿补骨脂对小白鼠的激素样作用实验研究［J］.中兽医学杂志,2003,2:8.
       
       ［5］冯青然.中药提取工艺研究进展［J］.中国实验方剂学杂志,2003,9(增刊):61.
       
       ［6］王秀冬,张兆旺,孙秀梅，等.华海乙肝方半仿生提取法提取药材组合方式的优选［J］.中国中药杂志,2000,25(10):601.
       
       ［7］张兆旺,修彦凤,孙秀梅.用均匀设计法优选参附汤的半仿生提取工艺条件［J］.中国中药杂志，2000,25(6):345.