文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的优化便塞通颗粒水提澄清工艺。方法采用水提液絮凝澄清法与离心法平行对比，以辛弗林、总黄酮保留率及干膏率为评价指标优选水提液澄清工艺。结果高速离心澄清工艺能有效保留辛弗林及总黄酮等有效成分。选取最佳纯化条件为：药液浓缩至相对密度为1.05（60℃），以12 000 r·min-1高速离心10 min。结论该法简单可取，适合于便塞通颗粒水提澄清工艺。
       【关键词】  水提液；澄清；离心法；絮凝澄清法
       Study on Process of Removing Impurity from Water-extraction of Bian Setong Granules
       ZHANG Dan, LI Yi,TANG Xuegui, ZHONG Hua, ZHOU Shufang
       1.The Pharmacological Department of Luzhou Medical College , Luzhou, Sichuan 646000,China;2.The Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College,Nanchong 637000,China;3.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu, Sichuan 611130,China
       Abstract：ObjectiveTo optimize the removing impurity method from water of Bian Setong Granules.MethodsThe methods of clarifying water of Bian Setong Granules by clarificant and by centrifuging were compared with the remaining rates of Synephrine, total flavonoids and dried extract as indexes. ResultsCentrifuging could remain effective active components. The most optimal clarifying condition was to concentrate the mixture to relative density of 1.05(60℃), and centrifuge in 12 000 r/min-1 for 10 minutes.ConclusionThe process is simple and preferable and can be used to clarify Bian Setong Granules.
       Key words：Water-extraction;  Clarifying;   Centrifuging; Natural clarify medium
       
       便塞通颗粒剂是在古方枳术丸《脾胃论》的基础上加味而来，加味后由白术、枳实、生地黄等药组成，具有补气健脾、调和脾胃、滋阴除热之功，主治老年性便秘、排便不爽等症。原方为汤剂，其有挥发性成分易损失、稳定性差，携带不便等缺点，故通过现代工艺的改革研究，将其制成颗粒剂。中药复方制剂多采用水提醇沉工艺，根据预试验可知乙醇沉淀法虽然能降低出膏率，但对辛弗林和总黄酮也有一定的影响。因此，本文以主药有效成分辛弗林、总黄酮的保留率以及干膏率作为评价指标，对吸附澄清剂法和离心法进行了考察，优选出便塞通颗粒的最佳澄清工艺。
       1 仪器与试药
        安捷伦1100系列高效液相色谱仪（DAD检测器、自动进样）；电子天平（sartorius 十万分之一）；DGG-9030型电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）；TDL-5-L离心机（上海安亭科学仪器制造厂）；便塞通水提液（自制，由白术、枳实等药提取）；辛弗林对照品（110727-200306，中国药品生物制品检定所）；芦丁对照品(100080-200306，中国药品生物制品检定所)；ZTC1+l-Ⅱ型天然澄清剂(天津正天成澄清技术有限公司)；甲醇（色谱纯）。其余试剂均为分析纯。
       2 方法与结果
       2.1 辛弗林测定方法
       2.1.1 辛弗林对照品溶液的制
       备精密称取辛弗林对照品10.94 mg于50 ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，精密吸取1.5 ml溶液于10 ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，取续滤液备用。
       2.1.2 便塞通制剂样品溶液制备
       吸取便塞通制剂澄清药液，0.45 μm滤膜过滤，取续滤液备用。
       2.1.3 色谱条件色谱柱为C18-ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇∶磷酸二氢钾水溶液（取磷酸二氢钾0.6 g，十二烷基磺酸钠1.0 g，冰乙酸1 ml，加水至1 000 ml）（51∶49）；紫外扫描，辛弗林最大吸收波长λ=275 nm；柱温30℃；流速1.0 ml/min。目标峰保留时间tR=18.357 min，目标峰基线分离，阴性无干扰。
       2.1.4 标准曲线的绘制
       分别吸取辛弗林对照品溶液4，8，12，16，20，24 μl按照上述色谱条件依次进样，测定峰面积，以峰面积为纵轴，进样量为横轴，得回归曲线Y=404.92X-1.311 3，R2=0.999 7，辛弗林进样量在0.131 28～0.787 68 μg范围内具有良好线性关系。
       2.2 总黄酮测定方法［1］
       2.2.1 对照品溶液的配制
       精密称取干燥至恒重的芦丁对照品20.54 mg，置100 ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，配制成每毫升含0.205 4 mg芦丁的标准品溶液。
       2.2.2 标准曲线绘制
       分别精密吸取芦丁对照品溶液(0.205 4 mg/ml)0 ml(空白)， 1，2，3，4，7 ml至25 ml容量瓶中，分别加入蒸馏水至7 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，混匀，放置6 min，加10%的硝酸铝1ml，混匀，放置6 min，加10%氢氧化钠10 ml，再加水至刻度，摇匀放置15 min，照分光光度法［1］，在510 nm处测定吸光度，得回归曲线为Y=12.87X-0.021，R2=0.999 9，总黄酮含量在0.205 4～1.437 8 mg范围内呈良好的线性关系。
       2.2.3 便塞通制剂样品溶液制备
       分别精密吸取便塞通制剂澄清药液1 ml，置25 ml容量瓶中，分别加入蒸馏水至7 ml，照“2.2.2”项下的方法，自“加5%亚硝酸钠溶液1 ml”起，依法测定吸收度。
       2.3 干膏收率测定
       精密量取各个纯化后的水提取液10 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称重，计算干膏收率。
       2.4  絮凝澄清法
       2.4.1 澄清剂溶液的制备
       采用ZTC1+1-Ⅱ天然澄清剂，按说明书配制。
       
       A组分溶液：称取0.500 g A组分细粉，先用少量水搅拌成糊状，再加水调至50 ml，溶胀24 h，搅拌，双层纱布滤过，即得1%粘胶液。
        B组分溶液：称取0.500 g B组分细粉，用少量1%乙酸溶液溶解并搅拌成糊状，然后加1%乙酸溶液调至50 ml，溶胀24 h，搅拌，双层纱布滤过，即得1%粘胶液。
       2.4.2 澄清剂溶液的加入
       顺序根据说明书，药液为酸性溶液，应先加入澄清剂的B组分后加A组分，测得本处方药液为酸性，故确定加入方式为先加B组分后加A组分，B∶A=2∶1［2］。
       2.4.3 澄清剂用量考察
       取备用提取液3份，浓缩至药材(g)∶药液(ml)为1∶10, 加热至60℃左右,按不同的量滴加ZTC1+1-Ⅱ澄清剂B组分，边加边以100 r/min匀速搅拌5 min，静置1h后，同法滴加A组分，静置1 h后，以2 000 r/min离心5 min，过滤，取滤液测各指标。结果见表1。表1  澄清剂用量的考察（略）
        由表1可知, 6%B∶3%A用量对辛弗林和总黄酮的保留率较好，但干膏率下降不明显，综合考虑选择6%B∶3%A用量。
       2.4.4 提取液浓度的考察
       取备用提取液3份，浓缩至药材(g)∶药液(ml)为1∶5，1∶10，1∶15，澄清剂用量6%B∶3%A，其余方法同上，取滤液测各指标。结果见表2。表2  溶剂浓度的考察（略）
        由表2可知，药材(g)∶药液(ml)为1∶10时，辛弗林和总黄酮的保留率较好，但干膏率下降不明显。
       2.5 离心法
       2.5.1 离心转速的考察
       取备用提取液4份，浓缩至相对密度1.05（60℃）的药液，分别按4 000，8 000，12 000，16 000 r·min-1的转速离心10 min，滤过，滤液定容，测定并计算含量。结果见表3。表3  离心转速的考察（略）
        由表3知，当转速达到12 000 r·min-1以上时，虽辛弗林和总黄酮的含量稍微有所下降，但药液的出膏率降低比较明显，故选择12 000 r·min-1高速离心除杂。
       2.5.2 药液相对密度的考察
       取备用提取液4份，分别浓缩至相对密度为1.02，1.05，1.08，1.10（60℃）的药液，按12 000 r·min-1的转速离心10 min，滤过，滤液定容，测定并计算含量。结果见表4。表4  药液相对密度的考察（略）
        由表4知，药液浓缩至1.05（60℃）时辛弗林和总黄酮的保留率较高，干膏率适中，除杂效果较好。
       2.5.3 离心时间的考察
       取备用提取液3份，浓缩至相对密度1.05（60℃）的药液，按12 000 r·min-1的转速分别离心10，20，30 min，滤过，滤液定容，测定并计算含量。结果见表5。表5  离心时间的考察（略）
        由表5可知，随着时间的增加，出膏率虽然有一定程度的降低，但辛弗林和总黄酮也有所降低，综合考虑，选择离心10 min进行除杂。
         
       从以上两种澄清方法的比较得知，高速离心法要优于天然澄清法，故最终确定以高速离心法作为本方纯化方法。由实验得出的最佳纯化工艺为：药液浓缩至相对密度为1.05（60℃），以12 000 r·min-1高速离心10 min。
       2.6  除杂验证试验为验证上述结果的准确性，以保证除杂工艺的合理可行，按最佳除杂工艺条件重复3次实验。结果见表6。结果表明，该工艺合理可行，稳定可靠，具有可操作性和重复性。表6  除杂验证试验结果（略）
       3 讨论
          
       中药常用的除杂方法有板框压滤法、乙醇沉淀法、吸附澄清剂法、离心法等。中药复方制剂多采用水提醇沉工艺，该工艺具有澄清药液、减少服用量等优点。但该工艺在澄清药液的同时将中药中的一些醇不溶性的大分子如蛋白质及部分多糖作为杂质除去，通过药理学、免疫学及临床研究表明这些成分特别是多糖具有调节免疫作用和广泛的生理活性［3］。又因本方主要治疗老年性阴虚便秘，醇沉会使地黄等的多糖和其他极性较大的有效成分有所损失，影响疗效，而且醇沉成本较高，故本方不宜用乙醇除杂。
       
       絮凝澄清法是在混悬的中药提取液中加入澄清剂以吸附架桥和电中和方式除去溶液中的粗微粒，以达到分离纯化的一种方法。ZTC1+1澄清剂是一种较好的絮凝澄清剂，由A、B两组分组成，其澄清原理是第1组分加入后，在不同的可溶性大分子之间“架桥”连接使分子迅速增大，第2组分在第1组分所形成的复合物的基础上再“架桥”，使絮状物尽快形成沉淀以便除去［4］。ZTCI+1-Ⅱ型天然澄清剂适合于颗粒剂等中药固体制剂，在保留药液中的高分子物质、多糖及可溶性固体物方面优于传统的水提醇沉法，具有有效、简便、成本低、稳定的优点。因此，本文对Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂在本方除杂中的应用进行了考察。
         
       除杂工艺就是首先要在尽可能保留有效成分的前提下，最大限度的除去杂质。通过以上两种澄清方法的比较得知，ZTC1+1-Ⅱ天然澄清剂不能有效地降低出膏率，而辛弗林和总黄酮的损失也较大。高速离心除杂是一种物理的分离方法，能有效地除去水提液中的固体微粒体系，除杂效果好，对有效成分的影响较小，且操作简便［5］。本方采用高速离心能一定程度地降低出膏率，而且对辛弗林和总黄酮的影响不大，因此作为本方的澄清剂。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，I部［S］.北京：化学化工出版社，2005：247，附录VA.
       
       ［2］段晓颖，王又红，潘白.ZTCI+1天然澄清剂与乙醇用于清热口服液除杂的对比研究［J］.中草药,1999，30(5)：346.
       
       ［3］龚幕辛，贾春玲.天然澄清剂在中药提取液精制中的应用［J］.北京中医，2001，20（6）：43.
       
       ［4］韩丽.实用中药制剂新技术［M］.北京:化学工业出版社-现代生物技术与医药科技出版中心,2002：183.
       
       ［5］余琪，王溶溶，陈丹菲.超速离心在中药颗粒剂中的应用［J］.中药新药与临床药理，2001，12(3)：141.