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       【摘要】 
       目的对蒲公英中总黄酮的提取工艺进行优选。方法采用正交实验设计，以总黄酮的含量为指标，对提取溶剂、料液比、提取温度、提取时间4种因素进行研究。结果蒲公英细粉用甲醇，料液比1∶20，在70℃下超声提取10 min，总黄酮的提取率较高。结论此工艺操作简便，重现性好,稳定可行。
       【关键词】  蒲公英；总黄酮；提取工艺；正交实验
       蒲公英系菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand-Mazz，碱地蒲公英Taraxacum sinicum Kitag.或同属数种植物的干燥全草。蒲公英含有多种活性成分,如蒲公英甾醇、蒲公英苦素、黄酮类、咖啡酸、绿原酸和多糖等。蒲公英总黄酮对宛式拟青霉菌和枯草杆菌具有良好的抑菌作用［1］，并具有重要的抗氧化作用，能有效清除超氧阴离子自由基。近些年来文献报道中对蒲公英总黄酮的提取及含量测定等研究甚少，本文以总黄酮的含量为考察指标，采用超声提取正交实验设计对蒲公英中总黄酮的提取工艺进行了研究，确定最佳提取工艺，以提高对黄酮类成分的有效利用率。
       1 仪器与试剂
        日本岛津UV—2201型紫外—可见分光光度计；FW—100高速万能粉碎机,KQ500DB型数控超声波清洗器；HANGP2NGJA2003型电子天平。蒲公英药材（购于郑州市东升药店），经河南中医学院生药教研室董诚明副教授鉴定为蒲公英属Taraxacum F.H.Wigg植物蒲公英。对照品芦丁（中国药品生物制品检定所提供），所用试剂均为分析纯。
       2 方法与结果
       2.1 因素水平表
       对溶剂、料液比、提取温度、提取时间4个因素，每个因素3个水平进行考察研究，见表1。表1  正交实验因素水平（略）
       2.2 供试品溶液制备
       将蒲公英药材粉碎，过80目筛，精密称取粉末1g共9份，按照正交实验L9(34)设计方案实验，见表2。用对应溶剂和料液比，在对应温度下，提取相应时间，放冷，补足重量。过滤,置蒸发皿上蒸干，甲醇定容至20 ml，精密量取3 ml置25 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，混匀，即得 。表2  L9(34)正交实验设计及结果分析（略）
       2.3 对照品溶液的制备
       精密称取芦丁对照品10.90 mg置25 ml容量瓶中，加5 ml甲醇溶解，蒸馏水定容至刻度，即得0.218 mg/ml的对照品溶液。
       2.4 测定波长选择
       取芦丁对照品溶液3 ml置25 ml容量瓶中，加蒸馏水6 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，放置6 min；加10%三氯化铝溶液1 ml，放置6 min；再加氢氧化钠试液10 ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，放置15 min［2］，用紫外—可见分光光度计在200～700 nm进行全波长扫描，最大吸收波长为510 nm。表3  方差分析（略）
       2.5 线性关系考察
       精密吸取上述对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml，分别置25 ml容量瓶中，依法在510 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y= 8.842 6 X-0.000 2，r2= 0.999 8 ,线性范围为 0.008～0.053 mg/ml。
       2.6  样品测定分别取9份供试品溶液3 ml于25 ml容量瓶中，方法同“2.4”项，在510 nm波长处测定吸光度计算总黄酮含量。结果见表2。
       
       由极差分析得知，影响因素的大小为B>A>C>D,即料液比为最主要的影响因素，溶剂次之，提取时间对结果影响较小。表3方差分析表明，提取溶剂、料液比对结果的影响具有极显著性意义，提取温度对实验结果有显著意义。正交设计实验结果显示提取工艺以A1B2C3D2组合为最佳，但D因素影响最小，且3个水平差别不大，为节省能源，选用D1（超声10 min）。即最佳工艺为20倍量甲醇，在70℃超声提取10 min。
       2.7 稳定性实验
       精密称取蒲公英粉末1 g，依法测定。每隔10 min测定1次，共测定7次。结果见表4。表4  稳定性实验结果（略）
       结果显示,RSD=0.89%，表明样品在70 min内稳定。
       2.8 验证实验
       精密称取蒲公英粉末1 g于具塞锥形瓶中，按最佳条件提取，依法进行测定，计算样品中总黄酮的含量。结果见表5。表5  验证实验结果（略）
       结果显示：RSD=0.50%,表明此条件重复性良好。
       3 结论与讨论
        蒲公英中总黄酮的最佳提取工艺，以20倍量的甲醇为溶剂，在70℃下超声提取10 min。样品中总黄酮的平均含量为53.48 mg·g-1（RSD=0.50%）。
       
       黄酮类化合物的提取，文献报道大多为溶剂萃取法、碱提酸沉法、碳吸附法提取、超临界CO2流体萃取法，这些提取方法有的操作费时，有的仪器价格昂贵，不宜普及，本研究采用超声法提取，利用超声波产生的强烈振动，强烈的空化效应，较高的加速度和搅拌作用等，使蒲公英中黄酮类成分迅速溶出，大大缩短了提取时间，能耗低，提取效率高，且不破坏有效成分。该方法设备简单，操作简便，是一种较为理想的提取方法。
       【参考文献】
         　　［1］谷肄静，王立娟.蒲公英总黄酮的提取及其抑菌性能［J］. 东北林业大学学报, 2007,35 (8) : 43.
       
       ［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005:247.