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       【摘要】 
       目的制备蝎龙接骨散并建立质量控制方法。方法配制蝎龙接骨散，采用高效液相色谱（HPLC）法测定蝎龙接骨散中血竭素的含量。结果该制剂各项检查均符合蝎龙接骨散质量标准的有关规定；血竭素在9.59～47.94 mg·L-1浓度范围内，峰面积与浓度线性关系良好，相关系数r=0.999 6，加样平均回收率为99.86%(RSD=0.96％)。结论蝎龙接骨散制备工艺简单，质量稳定，质控方法可行。
       【关键词】  蝎龙接骨散；制备；质量控制
       蝎龙接骨散是广西医科大学第四附属医院在科研的基础上自主研究开发的散剂，该制剂已获得自治区食品药品监督管理局生产批准文号（桂药制字：20060003），具有活血化瘀、消肿止痛、续筋接骨之功效，临床用于治疗各种跌打损伤、闭合性骨折等，疗效确切。现将其制备方法及质量控制报道如下。
       1 仪器与材料
        日本岛津LC10Avp高效液相色谱仪（LC10AT泵，SPD10Avp检测器，CBM102数据处理机，CSLight色谱数据工作站）；血竭素高氯酸盐对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0811-200203，20 mg/支，含量：100%）；薄层层析用硅胶G(青岛海浪硅胶干燥剂厂)；蝎龙接骨散（自制）；乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。
       2 处方及制备
       2.1 处方
       自然铜247 g，土鳖虫66 g，全蝎90 g，血竭54 g，骨碎补66 g，当归54 g，白及108 g，珍珠末54 g，儿茶108 g，三七27 g，大黄27 g，桃仁54 g，红花18 g。
       2.2 制备工艺
       将13味药材于80℃下烘烤干燥、消毒2 h；取自然铜、全蝎分别粉碎成细粉；将上述粉末与珍珠末配研，过筛，备用；另将当归、骨碎补等10味粉碎成细粉，与上述粉末混匀，以100 g的规格分装于玻璃瓶中，密封即得。
       3 质量控制
       3.1 性状本品为灰黄色至棕褐色粉末。
       3.2 鉴别
       ①取本品约0.1 g，加稀盐酸1 ml ，加热煮沸数分钟，滤过，滤液显铁盐的鉴别反应［1］。
        ②取本品约1.0 g，加氯仿100 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取血竭对照药材1.0 g，加甲醇5 ml，振摇使溶解，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法［1］，吸取上述两种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。
       3.3 检查应符合散剂项下有关的各项规定［1］。
       3.4 稳定性实验 
       取按医院制剂用包装的接骨散3批，在常温下放置保存12个月，并于放置期间监测控制温度与湿度。分别于第0、3、6、9、12个月取样一次，按稳定性重点考察项目检测：对其性状、鉴别、均匀度、水分、微生物限度等项目，按拟定的蝎龙接骨散质量标准、《中国药典》2005年版Ⅰ部检验。将结果与0个月比较，各项考察指标基本无变化。
       3.5 含量测定
       3.5.1 色谱条件和系统适应性
       色谱柱：VP-ODS 柱（250 mm×4.6 mm,5 μm），流动相：乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(45∶55)（用磷酸调pH值为3.0～3.8），检测波长为440 nm；柱温40℃。流速：1.0 ml/min,灵敏度：1.0AUFS，进样10 μl。理论板数按血竭素峰计算应不低于3 000。色谱图见图2。
       3.5.2 对照品溶液的制备
       精密称取血竭素高氯酸盐对照品33.01 mg，置100 ml棕色量瓶中，加3.5％磷酸甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为239.72 mg·L-1(以血竭素计算，换算关系为：血竭素重量=血竭素高氯酸盐重量/1.377)的对照品储备液。
       3.5.3 供试品溶液及阴性对照溶液的制备
       精密称取蝎龙接骨散约 0.4 g，置具塞试管中，精密加入甲醇-氯仿(3∶1)混合液5 ml，密塞，振摇，离心，取上清液蒸干，精密加入3.5％磷酸甲醇溶液至10 ml，密塞，振摇3 min，滤过，精密量取续滤液 1 ml，置5 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。同法制备不含血竭的阴性对照溶液。
       3.5.4 线性关系考察
       分别精密量取上述对照品储备液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 ml，置25 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得含血竭素9.59，19.18，28.77，38.36，47.94 mg·L-1(以血竭素计算)的对照品溶液，分别取10 μl进样，测定峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=35 764X +53 107.6，相关系数r=0.999 6，线性范围为9.59～47.94 mg·L-1。
       3.5.5 精密度实验
       在上述色谱条件下，取浓度为28.77 mg·L-1的对照品溶液,重复进样6次，连续5 d测定，RSD（日内）为0.58%,RSD（日间）为0.69%，精密度良好。
       3.5.6 重现性实验
       取样品5份，按“样品测定”项下方法测定含量，结果测得血竭素的平均含量为3.108 mg/g，RSD为0.69％。
       3.5.7 加样回收率实验 
       精密称取已知含量的蝎龙接骨散0.4 g (批号:071022，含量:3.101 mg·g-1)，共6份，分别精密加入不同量的血竭素高氯酸盐对照品(以血竭素计算)，照样品测定方法操作，计算回收率。结果见表1。表1  回收率实验结果（略）
       3.5.8 样品测定
       精密称取不同批号的样品，按“3.5.3”项下方法制备供试品溶液，在“3.5.1” 项色谱条件下，精取10 μl进样测定，计算血竭素含量，每批样品重复测定5次。结果见表2。表2  样品含量测定结果（略）
       4 讨论
       
       血竭素不稳定，在操作中尽量避光。加少量磷酸成酸性为使其稳定并加速溶解，血竭素即使制成盐也不稳定，很容易在色谱中出现双峰，所以用棕色瓶保存，供试品溶液应及时测定。
       
       本制剂是具有自主知识产权并获得制剂生产批准文号的产品，不断提高质量控制标准对制剂的推广使用有很好的促进作用。本研究用薄层色谱法和高效液相色谱法分别对主要活性成分血竭素进行了定性鉴别和含量测定。并把它们作为制剂质量控制的关键指标。能很好地控制制剂的质量，使制剂质量稳定可控。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录Ⅳ，附录VIB，附录IB.