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       【摘要】 
       目的探讨了中药方剂四物汤水煎液对永久性局部脑缺血损伤的保护作用。方法通过颈内动脉放入二氧化钛球于大脑中动脉制造永久性局部脑缺血模型。在制备永久性局部脑缺血模型前2，4 h，分别以四物汤灌胃250 mg/（kg·ml）。TTC染色，用图象分析系统确定梗塞面积。结果口服四物汤明显减少大脑的梗塞面积。结论传统中药四物汤水煎液具有抗脑缺血损伤作用。
       【关键词】  四物汤；缺血损伤；脑
       Effect of Siwutang Chinese Herb on Cerebral Ischemic Injury
       JIN Guangshi, JIN Yuanzhe
       1.College of Basic Medicine, Yanbian University, Yanji,Jilin 133000, China; 2.Key Laboratory of Organism Functional Factors of the Changbai Mountain, Ministry of Education, College of Clinic Medicine,  Yanbian University, Yanji,133000, China
       Abstract：ObjectiveTo evaluate the effects of water extract of Shiwutang (SWT)  on neuronal death in permanent focal brain ischemia.MethodsThree cerebrol macrospheres were injected into the internal carotid artery after ligation of the external carotid artery to induce permanent focal brain ischemic injury. SWT was given orally 2 h before and 4 h after induction of permanent focal brain ischemic injury. 24th after permanent middle cerebral artery occlusion , TTC (2,3,5-triphenyltetrazolium chloride) staining was conducted to show train infarction region.ResultsTreatment with SWT significantly reduced infarction volume. ConclusionWater extract of SWT provides neuroprotection against ischemic injury.
       Key words：Siwutang;  Ischemic injury;  Brain
       
       关于缺血性大脑损伤的治疗相当广泛。 但是探索一种既可以最大限度地减少医源性风险又能有效地保护大脑的药物是当今医疗界所面临的重要课题。中药四物汤由白芍、当归、川芎和地黄组成，用于妇科疾病、痈疽、慢性炎症的治疗。中医使用四物汤已有上百年的历史。有文献报道，四物汤能抑制皮肤炎症性疾病，通过改善血液流变学减少患者偏头痛的作用［1］。四物汤的重要成分有酚类化合物、苯酞、生物碱、松烯糖苷、环烯醚萜甙等，所萃提的4种主要化合物有环烯醚萜苷、白芍苷、芍药花苷和苯甲酸［2］。大量的数据表明，四物汤具有抗氧化或神经细胞保护作用［3，4］。
       
       但是四物汤是否具有保护脑组织缺血损伤的作用，尚未见报道。本研究的目的在于探讨四物汤水提液的抗脑组织缺血损伤的作用，为老药新用提供实验依据。
       1 材料与方法
       1.1 动物实验
       动物使用体重在290～340 g的清洁级S-D系雄性大鼠(Samtaco, Korea)。动物饲养在湿度(55±5)%、温度(23±2) ℃、12/12 h昼黑交替的的饲养室内，自由饮水和食物。动物随机分成两组：生理盐水+大脑动脉梗塞组，四物汤+大脑动脉梗塞组，每组10只。
       1.2 药品四物汤
       由韩国圆光大学校韩医科大学提供。用生理盐水配置后经口服给药，其剂量为250 mg/kg，灌胃总量为1 ml，对照组给予等量的生理盐水。给药时间在永久性堵塞大脑中动脉前2 h和后4 h。
       1.3 永久性脑缺血模型制备
       腹腔注射氯醛糖（400 mg/kg）麻醉，根据Gerriets等的方法，用二氧化钛球堵塞大脑中动脉制造脑缺血模型。切开颈前部的皮肤、暴露颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉，结扎切断甲状腺上动脉和枕大动脉。在显微镜下自颈外动脉把直径0.3～0.4 mm的3个二氧化钛球(BRACE GmbH, Alzenau, Germany)送入到颈内动脉并通过血流堵塞大脑中动脉。缝合创口、抗生素抗炎，待动物从麻醉苏醒后自由饮食饮水。在整个手术和手术后的2 h内利用电热垫保持动物的直肠温度在(37±0.5)℃。
       1.4 神经损伤体征评分
       分别于制备大脑中动脉阻塞模型4,24 h后，参照Bederson 的方法对动物的神经体征进行评分。没有任何神经体征为0分；当举尾悬空动物时损伤对侧前肢出现内收或屈曲为1分；损伤对侧前肢阻力减少为2分;向麻痹侧旋转为3分。
       1.5 梗塞区面积测量
       大脑中动脉阻塞模型24 h后断头处死，迅速取出大脑，在显微镜下确定大脑基底动脉内的二氧化钛球。利用大鼠切片曹从额极开始切出2 mm厚的6张冠状切片，37 ℃环境中行2,3,5氯化三苯四唑染色后浸泡于4%的多聚甲醛缓冲液固定。染色后正常组织呈现深红色，而梗塞区则不着色。切片用高分辨扫描器(Hewlett Packard Scanjet 5370C)扫描，并用微机化图象分析系统(Image-Pro Plus, USA)计算梗塞区面积。梗塞区的总体积，根据每张切片的梗塞面积和切片的厚度进行计算。梗塞面积单位为mm2、梗塞体积用单位为mm3。见图1。
         
       在大脑中动脉梗塞模型中可以发现大脑中动脉的主干上准确地嵌钳二氧化钛球，并阻断了血流。二氧化钛球不在大脑中动脉的主干上或血液通过大脑前动脉侧支流到大脑中动脉，脑内或蛛网膜下腔出血、下丘脑梗塞的动物不记入实验结果。
       1.6 统计学分析
       所有数据均用±s表示。进行H检验法和秩和检验。P<0.05具有显著性差异。
       2 结果
       2.1 四物汤对局域性脑缺血损伤的影响
       堵塞大脑中动脉后进行TTC染色发现正常的脑组织染成深红色，而梗塞区则拒染表现苍白。在堵塞大脑中动脉前2 h和后4 h时，使用四物汤后与生理盐水对照组相比梗塞区的面积和体积均明显减少，梗塞区的体积约减少58.9%。见图1。
       2.2 四物汤对局域性脑缺血损伤神经体征的影响
       大脑中动脉堵塞4和24 h以后大脑损伤神经体征分别是（2.1±0.7）和（1.6±0.5）分布在0～3之间，当用四物汤处理后其体征有明显的改善。见图2。
       3 讨论
        本实验发现，四物汤具有明显改善大脑中动脉梗塞后的神经体征和减少脑损伤面积的作用。
          
       2000年就有人［5］发现，用四物汤水提液预处理能够明显地抑制六甲溴铵引起的神经胶质瘤凋亡和LPS/PMA细胞死亡，防止受γ射线照射的小鼠空肠隐窝细胞和体细胞的凋亡［6］。
        四物汤成分—白芍具有芍药的主要活性成分，能够阻止初生皮层神经细胞钙超栽损伤的能力［7］，并能够有效地清除自由基和超氧负离子，显著性地增加氧化应激时的HT22海马细胞株存活率［8］。很多研究提示，赤芍中提取出的芍药总苷类具有预防鼠类脑急性缺血损伤［9］抗大鼠急性暂短性脑缺血引起的损伤和降低脑梗塞面积的作用［3］。芍药苷这种保护效应可能与其抗凋亡、清除自由基、抗血栓形成和抑制Na+ 通道作用有关［9］。也有报道指出，四物汤的成分当归、川芎具有抑制结扎双侧颈总动脉家兔血小板激活的作用［10］，又能纠正大脑缺血后血浆TX2-PGI2的失平衡状态，也能降低由于结扎双侧颈总动脉后产生的过氧化反应产物的细胞损伤。
       
       推测四物汤可能通过抗细胞凋亡、清除自由基、抑制血栓形成和钠离子通道的活性预防缺血性脑神经细胞死亡。本研究第一次证明四物汤具有保护局灶性脑梗塞作用，但是其详细机制还需进一步研究。
       【参考文献】
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