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       【摘要】 
       目的研究肝得安对小鼠实验性肝损伤的保护作用。方法将60只小鼠随机分成6组（每组10只），分别是空白对照组，模型对照组和阳性药对照组、肝得安高（6 g/kg）、中（3 g/kg）、低（1.5 g/kg）剂量组。结果肝得安可明显降低上述急性肝损伤模型小鼠血清ALT、AST活性及肝组织中MDA的含量，同时增高肝SOD的活性，且能改善肝脏病理损伤。结论肝得安对小鼠实验性肝损伤具有保护作用。
       【关键词】  D-氨基半乳糖；四氯化碳；白酒；扑热息痛； 肝损伤
       Protective Effects of Gandean against Experimental Liver Iujury in Mice
       HONG Tie, YANG Zhen, WANG Zhiwen，ZHENG Youlan
       1.Department of Pharmacology, Pharmacological College of Jilin University, Changchun, 130021, China； 2.Academy of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica of Jilin Province ,Changchun 130021, China; 3.Departmant of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China
       Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effect of Gandean against experimental liver injury．MethodsSixty mice were randomly divided into six groups(n=10):normal control group ,model control group, positive control group and three treatment groups with Gandean 6,3,1.5 g/kg. The activities of serum alanine aminotransferase(ALT), aspar  tate aminotransferase(AST) and the activity of liver superoxide dismutase (SOD),malondialdehyde(MDA) were determined in injured liver induced by carbon tetrachl- oride(CCl4)，D-Galactosamine (D-Gal),alcohol or acetaminophen (AP),and the pathological change of liver tissue was observed．ResultsThe activities of ALT ，AST in serum and the content of liver MDA were significantly lowered,and the activity of liver SOD was increased obviously in liver induced by CCl4, D-Gal, alcohol or AP after Gandean was given orally. Histological results displayed that Gandean improved liver injury. ConclusionGandean has protective effect against experimental liver injury．
       Key words：D-Gal; CCl4; Alcohol; AP; Liver injury
       
       肝得安是由柴胡、茵陈、五味子、旋覆花、茯苓、甘草、丹参等中药组成的复方制剂，具有疏肝理气、清热化湿、滋养肝肾等作用，本实验研究了其对小鼠实验性肝损伤的保护作用。
       1 材料与仪器
       1.1 实验药物
       肝得安，由吉林省中医药科学院方剂室提供。联苯双酯，购自北京协和药厂，用时配制成200 mg/kg［1］的混悬液。
       1.2 试药
       CCl4为分析纯，邯郸市四友生物医学技术有限公司；D-Gal购自启东市久丰工贸有限公司；红星牌56度二锅头白酒为北京红星股份有限公司生产；AP为百康药业有限责任公司生产；ALT，AST试剂盒，购自长春赛诺迈德医学技术有限责任公司；MDA，SOD试剂盒，购自南京建成生物工程研究所。
       1.3 动物
       昆明种小鼠，体重18～22g，雄性，由吉林大学基础医学院实验中心提供，合格证号：2003-0001。
       1.4 仪器
       TU-1810紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；F6/10超细匀浆机，上海弗鲁克流体机械制造有限公司。
       2方法与结果
       2.1 肝得安对CCl4 致小鼠肝损伤的影响 
       取小鼠60只，随机分成6组，即正常组，模型组，阳性对照组（予联苯双酯0.2 g/kg）和给肝得安的大（6 g/kg）、中(3 g/kg)、小(1.5 g/kg)剂量组，分别灌服相应的蒸馏水和药液，1次/d，连续给药7 d。末次给药后1 h，每组ip0.1％CCl4豆油溶液（正常组除外），禁食16 h后，取血，分离血清，按试剂盒说明书测定血清ALT，AST。取新鲜左叶肝组织精密称定0.2 g，加入9倍量的生理盐水在冰浴中匀浆，匀浆液以4 000 r/min，离心10 min，取其上清液，测定SOD的活性和MDA的含量。结果见表1。表1  肝得安对CCl4 致肝损伤小鼠的保护作用（略）
       表1结果表明，肝得安大、中剂量组对CCl4引起ALT，AST和MDA升高有明显的降低作用，对CCl4引起SOD活性降低有明显的升高作用。
       2．2 肝得安对D-Gal致小鼠肝损伤的影响
       分组及给药同“2.1”项，不同点为末次给药1 h后，模型组和给药组ip 800 mg/kg D-Gal溶液，正常组ip等体积生理盐水，禁食24 h后，测定血清ALT，AST活性和肝组织SOD的活性和MDA的含量。结果见表2。表2  肝得安对D-Gal致肝损伤小鼠的保护作用（略）
       由表2可见，肝得安大、中剂量组和阳性对照药均不同程度的降低升高的血清ALT，AST和肝组织中MDA，同时增加SOD活性。
       2.3 肝得安对小鼠酒精性肝损伤的影响 
       分组及给药同“2.1”项,不同点为模型组和给药组每日以56度二锅头白酒午前、午后各灌服1次，剂量为10 ml/kg,连续10 d，在午前灌服白酒后4 h，各组分别灌服相应药液，采血前禁食12 h，末次灌服白酒24 h后处死，测定血清ALT，AST活性和肝组织SOD的活性和MDA的含量。结果见表3。表3  肝得安对白酒致肝损伤小鼠的保护作用（略）
       从表3可以看出，肝得安可明显抑制酒精性肝损伤血清ALT，AST和肝组织中MDA的升高，增加肝组织中SOD的活性。
       2.4 肝得安对AP致小鼠肝损伤的影响 
       分组及给药同“2.1”项，不同点为末次给药1 h，模型组和给药组以500 mg/kg灌服AP，禁食24 h后，处死动物，测定血清ALT，AST活性和肝匀浆中SOD的活性和MDA的含量。结果见表4。表4  肝得安对AP致肝损伤小鼠的保护作用（略）
       表4结果表明，肝得安大、中剂量组均不同程度的抑制血清ALT，AST和肝组织中MDA的升高，同时增高SOD活性。
       2.5 肝组织的制备及病理组织学观察 
       以上各组动物，取少量相同肝组织进行常规病理切片，HE染色，镜下观察病理改变。正常对照组小鼠肝小叶结构清晰，肝细胞未见明显异常。在CCl4和D-Gal损伤组中，小鼠炎症细胞浸润严重，大部分肝细胞点状、碎屑样坏死。肝得安大、中剂量组小鼠肝小叶结构较为清晰，大部分肝细胞索排列整齐，病变程度与模型组比较明显减轻。酒精模型组肝脏色黄，肝细胞发生明显的肿胀，胞质疏松，肝小叶呈现如网状，肝小叶内有坏死区；肝得安大、中剂量组肝小叶内偶见有坏死发生，其程度比酒精组明显减轻。扑热息痛肝组织损伤中有大片肝组织损伤，其中以坏死为主，受损面积高达一半，肝得安大、中剂量组细胞坏死明显减少，和模型组比较都有明显差异。
       3 讨论
        CCl4,D-Gal、酒精和AP损伤肝脏的生化机理不同。一般认为，CCl4是经典的化学性肝损伤动物模型的诱导剂［2］，损伤肝脏机理是CCl4经肝细胞色素P450代谢激活后生成三氯甲基自由基，可引起生物膜脂质过氧化，造成膜结构和功能损伤，蛋白质等物质合成代谢发生障碍［3］。D-Gal是肝细胞的磷酸尿嘧啶核苷的干扰剂［4］，可造成肝弥漫性坏死和炎症，与临床上病毒性肝炎的肝脏病理变化相似；D-Gal还可通过产生自由基引起脂质过氧化，造成肝细胞损伤［5］。急性酒精性肝损伤在临床比较多见,机体摄入乙醇后，在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化，使三羧循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响代谢，过量酒精的摄入会使肝脏受到不同程度的损伤［6］，同时乙醇能激活氧分子产生氧自由基，导致肝细胞膜的脂质过氧化［7］。AP所致的小鼠急性肝损伤模型是一种病毒性肝坏死模型［8］，AP剂量过大时，生成的N-乙酰对苯醌亚胺（NAPQI）过多，使肝内谷胱甘肽（GSH）耗竭，NAPQI便与肝细胞大分子如蛋白质共价结合，引起肝细胞坏死，细胞通透性增强，使转氨酶释放入血，造成转氨酶升高［9］。本实验结果显示肝得安可明显降低上述各种急性肝损伤模型小鼠血清ALT，AST活性及肝组织中MDA的含量，同时升高SOD的活性，且能改善肝脏病理损伤。这些结果为肝得安的临床应用提供了重要的理论根据。
       【参考文献】
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