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       【关键词】  胆乐化瘀片；,,正交设计；,,水提工艺；,,绿原酸,,,
       摘要：目的探讨胆乐化瘀片的水提工艺研究。方法在茵陈水提工艺研究中，以加水量，煎煮时间，煎煮次数为因素，各取3个水平，以干膏收率，绿原酸的含量为评价指标，进行L9（34）正交实验，筛选最佳工艺条件。结果最佳水提工艺为加8倍水，提取3次，1 h/次。结论该制剂水提工艺合理可行，有很好的重现性。
       关键词：胆乐化瘀片；  正交设计；  水提工艺；  绿原酸  
       Study on the Water Extracting Technology of Danlehuayu Tablets
       TONG  Huan， GUO Junfang， YANG Juhua， DONG Dengxian， XIA Zhongxiang
       (Department of Pharmacy,Zhongshan Hospital of Hubei Province,Wuhan 430033,China)
       Abstract：ObjectiveTo study the water extracting technology of Danlehuayupian Tablets.MethodsThree factors were selected in this water extraction process ,including the water volume,the time of decocting and the times of decocting.Each factor selected 3 different levels. And the content of chlorogenic acid,the dried decoction rate being as index, an orthogonal experiment of L9（34）was conducted to find the optimal water extraction condition.ResultsThe result showed that the optimum extracting condition was that water of eight times the amount as much as the medicinal materials was added to the the medicinal materials to decoct 3 times, each time boiling for 1h.ConclusionThe decocting technology is reasonable and practicible,with good reproducibility.
       Key words：Danlehuayupian Tablets;   Orthogonal design;  Decocting technology;  Chlorogenic acid
   
　　胆乐化瘀片是由茵陈、广金钱草、大黄等多味中药组成的治疗肝胆疾病的复方制剂，临床上主要用于胆石症、胆道术后综合症、急、慢性胆囊炎。其中茵陈是君药，论文对该制剂水提取工艺进行了研究。
       　　1  仪器与材料
       Waters 515 高效液相色谱仪；Water 515 二元泵；超声震荡器（上海超声仪器厂）；METTLER TOLEDOAT201型十万分之一分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；硅胶G（青岛海洋化工）；硅胶H（青岛海洋化工）；绿原酸对照品（中国药品生物制品鉴定所）；其余所有试剂为分析纯。
       　2  方法
       2.1  药材吸水量的测定按处方比例称取茵陈、广金钱草、乌梅、枳壳加适量水冷浸，每隔30 min观察1次，直至药材不再吸水为止，共冷浸2 h达吸水饱和。故确定冷浸时间为2 h。将吸水饱和后的药材加热煎煮1 h，求得药材吸水量为药材量的2.3倍。
       2.2  煎煮条件筛选加水量、煎煮时间、煎煮次数3项为影响提取的主要因素，各取3个水平，进行L9（34）正交实验，筛选最佳工艺条件。结果见表1。
       表1  煎煮工艺条件正交实验（略）
       2.3  样品制备依处方比例称取茵陈、广金钱草、乌梅、枳壳各125 g，按正交实验条件进行水提（煎煮前加水冷浸2 h，第1次加水按药材吸水量多加水2.3倍）,药液用300目滤布滤过，滤液浓缩并定容到100 ml(1.25 g生药/ ml)。
       2.4  干膏收率测定精密量取以上样品液25 ml，分别置于已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，残渣于105℃干燥3 h，取出，置干燥器中放置30 min，称重，计算干膏收率。结果见表2。
       表2  煎煮工艺条件正交实验（略）
       2.5  绿原酸含量测定
       2.5.1  色谱系统与系统适用性实验色谱柱INERTSIL HPLC COLUMN（4 μm,4.6 mm×250 mm）；  甲醇∶水∶冰醋酸（22∶78∶1）为流动相，检测波长为328 nm，流速为1.0 ml/min，柱温为30℃，检测系统为Waters2487紫外检测器。
       2.5.2  对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品1.16 mg，加甲醇定容至25 ml。
       2.5.3  供试品溶液的制备取样品粉末（过1号筛）1 g，精密称定，置干燥具塞三角瓶中，准确加入50.00 ml甲醇，超声提取30 min ,冷却，加甲醇调至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得。
       2.5.4  标准曲线的绘制分别吸取2.5.2项下的绿原酸对照品溶液4，6，8，10，12  μl注入液相色谱仪，测定峰面积值，以进样量为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），得回归方程：  y=82 278.75x-86 712,r=0.999 8。绿原酸浓度在0.185 6~0.556 8 μg内与峰面积呈良好的线性关系。
       　3  结果
       3.1  正交实验结果 见表3~4。由直观分析可知，影响提取效果因素顺序为：提取次数>提取时间>加水量，以提取次数影响最大。经方差分析，加水量，提取时间对提取效果无显著性影响，提取次数则有非常显著性影响。可见，提取最佳工艺为A3B2C3。鉴于提取时间对提取效果无显著性影响，因此为降低成本，节约工时，将B2调成B1，将A3调成A1。由此得提取工艺：A1B1C3，即8倍水，提取3次，1 h/次，据此条件，验证3次。结果见表5。
       3.2  水提工艺验证实验   从表4可见，验证实验结果与正交实验结果一致，说明提取工艺条件基本稳定。
       表3  干膏收率方差分析（略）
       F0.05（2，2）=19.00， F0.01（2，2）=99.00，*有显著性差异
       表4  转化率方差分析表（略）
       F0.05（2，2）=19.00    F0.01（2，2）=99.00  **有非常显著性差异
       表5  验证实验结果（略）
       　　4  讨论
       以干膏收率为考察指标，由表中极差大小显示，各影响因素作用主次为C>Ｂ>Ａ；方差分析结果表明：Ｃ因素有显著性意义（P<0.05），即提取次数为影响干膏收率的主要因素，Ａ、Ｂ因素均无显著性意义（P>0.05），即加水量和提取时间对干膏收率影响不大，以A3B3C3为佳。以绿原酸为考察指标，由表中极差大小显示，各影响因素作用主次为C>Ｂ>Ａ；方差分析结果表明：Ｃ因素有非常显著性意义（P<0.01），即提取次数为影响绿原酸提取的主要因素，Ａ、Ｂ因素均无显著性意义（P>0.05），即加水量和提取时间对绿原酸提取影响不大，以A3B2C3为佳。鉴于提取时间和加水量对提取效果无显著性影响，因此为降低成本，节约工时，将B2调成B1，Ａ3调成A1。由此得提取工艺：A1B1C3，即8倍水，提取3次，1 h/次。
       　　参考文献：
       ［1］  宋小军，张永欣.绵茵陈药材中绿原酸定性定量分析方法研究［J］.中国中药杂志，2004，27(4):267.
       ［2］  吕  锋，罗金波.胆乐化瘀片的药效学研究［J］.湖北民族学院学报（医学版），2002，19（3）：5 .
       (湖北省中山医院药学部，湖北 武汉  430033）