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       【摘要】 
       目的探讨细辛不同提取部位的镇痛和急性毒性作用。方法采用系统溶剂法提取分离得到4个部位,通过冰醋酸化学致痛和热刺激复制小鼠疼痛模型,对细辛的石油醚提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物及水提取物的镇痛作用进行了研究，且采用灌胃法观察其各提取部位急性毒性反应1周，并观察细辛醇提液不同极性部位的小鼠半数致死量(LD50)，采用Bliss法测定LD50。结果细辛醋酸乙酯提取物0.020 7 g/kg剂量能显著抑制冰醋酸所致小鼠扭体反应和热板刺激, 测得石油醚部位LD50为（1.021 5±0.148 5）g/kg, 醋酸乙酯部位LD50为（0.124 5±0.019 5）g/kg，正丁醇和水相部位未能测出LD50,按最大耐受量方法测定，测得0.56 g的正丁醇部位用药量是20 g体重小鼠的最大耐受量, 0.8 g的水相部位用药量是20 g小鼠的最大耐受量。结论细辛醋酸乙酯提取物具有显著镇痛作用,同时也有较强的急性毒性作用;提示细辛的主要有效成分可能在醋酸乙酯提取物部分,其毒性成分和有效物质可能为同一类物质。
       【关键词】  细辛 镇痛作用 急性毒性
        细辛(Asarum),又名小辛、细草、辽细辛,为马兜铃科植物的干燥全草，性味辛、温，具祛风散寒、通窍止痛、温肺化饮功效。主要成分含挥发油,油中含丁香油酚甲醚、优藏茴香酮、大黄樟醚、β－蒎烯、细辛醚、细辛酮。另含N-异丁基十二碳四烯胺及消旋去甲乌药碱等。细辛有镇痛、镇静、中枢抑制、局部麻醉等多种药理作用［1,2］。早期的研究主要集中于挥发油,除了挥发油外其它成分是否还具有作用,目前未见系统研究报道。本课题组利用不同极性溶媒对细辛的主要化学成分进行了初步提取、分离,并在此基础上运用化学法诱导动物疼痛及物理法致痛等模型,探讨了细辛不同提取物的镇痛作用及急性毒性作用。现将有关研究结果报道如下。
       1  材料与仪器
       1.1  药品和试剂细辛，购于宜昌市中心医院药房，经专家鉴定为马兜铃科植物的干燥全草；阿司匹林(河北康泰药业有限公司)；95%乙醇(武汉化工厂,化学纯) 、石油醚、醋酸乙酯、正丁醇(天津博迪化学试剂分析纯)；水为蒸馏水。
       1.2  动物健康昆明种小鼠，SPF级小鼠,体重20 ～23 g,生产合格证号为: SCXK (鄂)2003－2005 ,由湖北省疾控中心提供。
       1.3  仪器HH-S恒温水浴锅(金坛市亿通电子有限公司)，RE52-05旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），智能热板仪(山东省医学科学院设备站)。
       2  方法和结果
       2.1  细辛各提取物的制备与配制［3］取细辛干燥全草药材4 kg，用75%乙醇浸泡24 h后，回流提取3次，浓缩成浸膏，加水溶解，于索氏提取器中依次用石油醚、醋酸乙醋、正丁醇萃取，至提取液无色，回收各萃取部位溶剂，得到石油醚萃取物、醋酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物及水相部分浸膏，精密称取所得各部位浸膏,用纯化水配成一定浓度的溶液备用。具体过程及结果见图1。表1  细辛各提取（物热板）法对小鼠热刺激疼痛的影响（略）与生理盐水比较，﹡P<0.05,﹡﹡P<0.01；与给药前比较，△P<0.05,△△P<0.01；n=10
       2.2  细辛各提取物对小鼠热刺激性疼痛的影响［4］选用18～22 g雌性昆明种小鼠进行实验,实验前将小鼠预先置于（55±1）℃的热板仪上测痛阈,以舔后足为痛阈时间点,每只测1次,记录出现舔足的时间作为痛阈值。剔除喜跳跃者和舔足时间不足5 s或超过30 s者,共筛得合格小鼠70只,将其随机分成6组,每组10只，分别为生理盐水组、阿司匹林组、石油醚组、醋酸乙酯组、正丁醇组、水相组。1 d后开始给药，在给药之前每只小鼠再测1次痛阈值，将此痛阈值与该只小鼠筛选时的痛阈值取平均值,以此平均值作为该只小鼠在给药前的正常痛阈值。给药1次/d，连续给药7 d。分别在末次给药后30，60，90 min时间段用热板仪测定小鼠出现舔足的时间, 超过60 s不舔足者按60 s计。比较用药前后各组出现舔足时间和用药后各组间出现舔足时间作为动物疼痛反应的指标。统计处理，采用单因素方差分析，以SPSS for Windows 13.0版软件进行统计学处理。结果见表1。由表1可见，与给药前痛阈和生理盐水组比较，只有醋酸乙酯部位提取物可显著抑制热板引起的疼痛，且于给药后30 min后痛阈值有开始增大趋势，60 min达高峰，至少维持90 min以上。
       2.3  细辛各提取物对冰醋酸诱发小鼠扭体反应的影响［4］18～22 g昆明种小鼠，实验前预先用0.8％冰醋酸0.2 ml腹腔注射，以其15 min内扭体次数作为痛阈值，取15 min内扭体次数在10～60次之间的小鼠做为实验对象，共筛得合格小鼠70只，雌雄各半。将其随机分为6组,每组10只。分组同“2.2”项。常规饲养3 d后开始灌胃给药，给药量均为0.01 ml/g。给药1次/d,连续给药7 d。末次给药30 min后,每只小鼠均腹腔注射0.8％冰醋酸0.2 ml ,以15 min内小鼠出现的扭体次数来做为疼痛反应的指标。统计处理，采用单因素方差分析，以SPSS for Windows 13.0版软件进行统计学处理。结果见表2。由表2结果显示，实验各组与生理盐水组比较均能显著减少冰醋酸诱发的小鼠扭体次数，尤以醋酸乙酯部位更为显著，有着显著的统计学意义。且醋酸乙酯部位与阿司匹林组之间的镇痛作用无明显统计学差异，说明二者的镇痛作用相当，而且均能明显延长小鼠扭体的潜伏期。表2  细辛各提取物对冰醋酸（扭体法）诱发小鼠扭体反应的影响（略）与生理盐水比较，﹡P<0.05,﹡﹡P<0.01；n=10
       2.4  细辛各提取部位急性毒性实验［3］取体重为18～22 g的小鼠,雌雄各半,随机分组，在禁食不禁水后12 h按预实验结果分别灌胃不同剂量的细辛各部位提取物。给受试药物后每日观察小鼠的行为活动、精神状态、皮毛、摄食、饮水、呼吸、粪便等情况及鼻、眼、口腔有无异常分泌物,体重变化及死亡等情况。连续观察7 d,并记录动物中毒症状和死亡数。死亡动物即刻尸检,肉眼观察其主要脏器变化。数据处理采用Bliss氏probit法进行统计计算。以SPSS for Windows 13.0版软件实现结果处理，得出LD50。实验中发现，在给予醋酸乙酯和石油醚这两个部位提取物30 min 左右,部分动物出现趴伏、少动、行动迟缓不稳;药后60 min出现间断性摆动、抽搐、尾部发绀，后出现死亡,测得醋酸乙酯部位LD50为（0.124 5±0.019 5）g/kg，石油醚部位LD50为（1.021 5±0.148 5）g/kg。解剖观察死亡动物发现部分动物肺部有少许瘀血,其它未见异常。在本实验所给剂量下未测出正丁醇部位和水相部位提取物的LD50, 用最大耐受量的测定来观察其毒性反应，测得其最大耐受量分别为: 0.56 g的正丁醇部位用药量是20 g体重小鼠的最大耐受量，0.8 g的水相部位用药量是20 g小鼠的最大耐受量，在此剂量下各组动物均未出现明显异常。
       
       3  讨论
        细辛是一味临床常用的中药，其镇痛作用被广泛运用于临床，但是细辛的止痛机理,目前并未见详细研究的报道,而且其固有的毒性往往影响到了该中药进一步使用和开发。本实验通过对运用不同极性的溶媒所提取的成分进行了镇痛药效学研究和急性毒性研究。结果显示,只有醋酸乙酯提取物可显著抑制热板引起的疼痛，且于给药30 min后痛阈值有开始增大趋势，60 min达高峰，至少维持90 min以上。而在扭体实验中，细辛4个部位的提取物均能显著减少冰醋酸诱发的小鼠扭体次数，尤以醋酸乙酯部位更为显著，表明细辛提取物对周围性疼痛具有更好的镇痛效果，且醋酸乙酯提取物是细辛镇痛的最佳有效部位，但也是毒性最强的部位，可以推测细辛的毒性成分和有效物质有可能为同一类物质，但其具体作用成分和毒性成分还有待进一步的研究。
       【参考文献】
         　　［1］王本祥.现代中药药理与临床［M］.天津：天津科技翻译出版社,2004：982.
       
       ［2］张 瑶，宋志永，王林丽.细辛的药理作用及临床应用［J］.中国药业,2007，16(14)：62.
       
       ［3］陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社,2006：68，107，109.
       
       ［4］徐叔云.药理实验方法学，第3版［M］.北京：人民卫生出版社，2002:882，911.