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       【摘要】 
       目的 建立六味能消胶囊中蒽醌类成分的高效液相色谱法含量测定方法。方法色谱柱：Kromasil C18色谱柱 (250 mm×4.6mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)；流速：1.0 ml·min-1；检测波长：254 nm。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总含量为2%以上，平均回收率为100.28%，RSD=2.22%。结论该方法简便、灵敏、准确，可作为六味能消胶囊的质量控制方法。
       【关键词】  高效液相色谱法 芦荟大黄素 黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 六味能消胶囊
       Determination of Anthraquinones Content in  Liuwei Nengxiao Capsule by HPLC
       ZENG Rui
       （Ethnic Pharmaceutical Institute of Southwest University for Nationalities,Chengdu 610041,China）
       Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of anthraquinones content in Naomaitong. MethodsThe separation was performed on ODS column(250mm×4.6mm，5μm)of Kromasil. The mobile phase was a mixture of methanol-0.1% phosphoric acid solution(80∶20)，the flow rate was  1.0 ml·min-1,and the wavelength was at 254 nm. ResultsThe total content of aloeemodin，rhein，emodin，chrysophanol and physcion was above 4%.The average recovery rate was100.54 %，RSD= 1.58%. Conclusion The method is simple,accurate,sensitive and can be used to control the quality of Liuwei Nengxiao Capsule.
       Key words： HPLC；  Aloeemodin；  Rhein；  Emodin；  Physcion；  Chrysophanol；  Liuwei Nengxiao Capsule
        六味能消胶囊由大黄、诃子、藏木香等6味药材组成，功能宽中理气，润肠通便，调节血脂，适用于治疗胃脘胀痛、厌食、纳差及大便秘结，还适用于治疗高脂血症及肥胖症。我们采用蒽醌类成分芦荟大黄素(aloe emodin)、大黄酸(rhein)、大黄素(emodin)、大黄酚(chrysophanol)、大黄素甲醚(physcion)的含量，来控制六味能消胶囊的内在质量。本研究建立了六味能消胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的高效液相色谱法(HPLC)含量测定方法，并对3批样品进行含量测定。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器美国Waters 2695高效液相色谱仪；2996二极管阵列检测器；Empower色谱工作站；MILLI-PROA纯水处理器；BSzz4S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
       1.2  试药 
       芦荟大黄素对照品(批号：110795-200605)；大黄酸对照品(批号：0757-200206)；大黄素对照品(批号：110756-200110)；大黄酚对照品(批号：110796-200615)和大黄素甲醚对照品(批号：110758-200610)，对照品均为供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供；，甲醇为色谱纯，水为高纯水，盐酸、氯仿、磷酸、冰醋酸等试剂均为分析纯。六味能消胶囊由西藏藏药股份有限公司提供。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件Kromasil Cl8色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)；柱温：30℃；流速为1.0 ml·min-1，进样量10 μl；检测波长254 nm；要求理论板数不低于3 000。
       2.2  对照品溶液的制备精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每毫升含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各80 μg，大黄素甲醚40 μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2 ml，混匀，即得。
       2.3  供试品溶液的制备取本品1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入10%盐酸溶液∶乙醇(3∶1)20 ml，超声处理(功率400 W，频率42 kHz)3 min，酸液移至分液漏斗中，用氯仿提取5次，10 ml/次，合并氯仿液，水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解并定容至50 ml量瓶中，用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
       2.4  阴性对照溶液的制备按全方比例分别称取除大黄外其他药材适量，按六味能消胶囊的制备工艺制得缺大黄的阴性样品，照供试品溶液制备项下方法制备阴性样品溶液。
       2.5  各样品溶液的HPLC色谱图分别吸取供试品溶液，阴性对照溶液各10 μl及对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。记录其色谱图，结果表明六味能消胶囊中大黄5个蒽醌类成分色谱峰分离良好，且阴性样品溶液无干扰。见图1～3。
       
       2.6  线性关系的考察分别精密吸取对照品溶液4，8，12，16，20 μl，按上述色谱条件，测定峰面积。以色谱峰峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程。芦荟大黄素：Y=1.049×106X+1.801×104，r=0.999 5；大黄酸：Y=9.897×105X +9.265×103，r=0.999 9；大黄素：Y=8.998×105X+1.081×104，r=0.999 9；大黄酚：Y=1.138 ×106X +2.459×104，r=0.999 6；大黄素甲醚：Y=8.902×105X+8.912×103，r=0.999 9。结果表明，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚均在0.064～0.32 μg范围内，大黄素甲醚在0.032～0.16范围内呈良好的线性关系。
       2.7  精密度实验精密吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，连续测定5次，测得峰面积，计算峰面积积分平均值得：芦荟大黄素为158 593.4，RSD为1.65% ；大黄酸为76 566.8，RSD为1.38%；大黄素为69 302.4，RSD为1.03%；大黄酚为188 509.7，RSD为1.17% ；大黄素甲醚为60 542.4，RSD为1.56%。结果表明精密度良好，均符合定量分析要求。
       2.8  稳定性实验精密吸取供试品溶液10 μl，分别在制备后0，2，4，8，12 h进样，测定色谱峰峰面积， 计算峰面积积分平均值得：芦荟大黄素为165 311.7，RSD为1.58%；大黄酸为78 702.6，RSD为 1.36% ；大黄素为68 541.8，RSD为1.07% ；大黄酚为193 217.5，RSD为1.28% ；大黄素甲醚为61 175.2，RSD 为1.75%。结果表明样品溶液在12 h内稳定。
       2.9  重复性实验分别取同一批供试品，按样品测定项下方法，重复制备样品6次，进行测定，计算含量平均值得：芦荟大黄素为0.671，RSD为1.89%；大黄酸为0.338，RSD 为1.13% ； 大黄素为0.323，RSD为1.39% ；大黄酚为0.725，RSD为1.75%；大黄素甲醚为0.285，RSD为1.95%。样品中5个大黄苷元的总含量平均值为2.342，RSD为1.25%。结果表明供试品制备方法重复性良好。
       2.10  回收率实验采取加样回收法。精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每毫升含芦荟大黄素0.10 mg，大黄酸0.06 mg，大黄素0.06 mg，大黄酚0.10 mg，大黄素甲醚0.06 mg的溶液备用。取已知含量的样品约1g，共6份，精密称定，分别精密加入上述对照品溶液：芦荟大黄素5 ml(0.50 mg)，大黄酸5 ml(0.30 mg)，大黄素5 ml(0.30 mg)，大黄酚5 ml(0.50 mg)，大黄素甲醚5 ml(0.30 mg)，总量为1.90 mg，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率。芦荟大黄素的平均回收率为99.07%，RSD为2.19%；大黄酸的平均回收率为101.16%，RSD为2.31% ； 大黄素的平均回收率为99.36%，RSD为1.79% ；大黄酚的平均回收率为100.31%，RSD为2.04%；大黄素甲醚的平均回收率为101.52%，RSD为2.75%。
       2.11  样品含量测定分别精密称取3批样品，按供试品溶液的制备项下方法制备，按上述色谱条件进行测定。结果见表1。表1  3批样品含量测定（略）
       
       3   讨论
        《中国药典》2005年版Ⅰ部中，大黄样品溶液的制备采用的是8%的盐酸水解［1］。根据文献［2］，我们对酸水解条件进行了筛选，选择了盐酸、硫酸、盐酸与乙醇的混合液进行对比研究，采用盐酸与硫酸水解方法所测定的含量偏低，误差较大，故选择盐酸与乙醇混合液作为水解的方法。
        本研究对六味能消胶囊中的有效成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚建立了含量测定方法，该方法简便、灵敏、准确且专属性较强，可有效地控制六味能消胶囊生产、使用过程中产品的质量。这对于中药复方新药研究及质量控制具有一定的意义。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：17.
       
       ［2］李立荣，雷玉萍，殷 帅.HPLC测定通便消痤片中大黄素、大黄酚总量的含量［J］.中成药，2007，29(3)：458.