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       【摘要】 
       目的研究野鸦椿（EJK）水提取物的抗炎镇痛效应。方法采用4种急性炎症模型和两种疼痛模型，包括角叉菜胶及蛋清诱导大鼠足趾肿胀、二甲苯致小鼠耳片肿胀、1%冰醋酸致小鼠腹腔渗出模型及扭体、热板法疼痛模型，观察EJK水提取物的抗炎镇痛作用。结果EJK水提取物小、中、大( 2，4，8 g/kg)3个剂量组对二甲苯致小鼠耳片肿胀，对角叉菜胶和蛋清引起的大鼠足跖肿胀，对急性炎症导致的皮肤和腹腔毛细血管通透性，对冰醋酸导致的慢性炎性疼痛、热板导致的疼痛均有不同程度抑制作用,其中EJK水提取物两个剂量( 4，8 g/kg)组与模型组相比有显著性差异（P＜0.01）。结论EJK水提取物具有较强的抗炎镇痛效应。
       【关键词】  野鸦椿 抗炎 镇痛
        野鸦椿(药材名为鸡眼睛)来源于省沽油科植物野鸦椿Euscaphis japoneca Kantiz，（EJK）的带花或果的枝叶，为贵州、湘西苗族常用药。味辛、甘，性平,具理气止痛、消肿散结的功效［1］，已有文献报道野鸦椿的枝叶有明显的抗炎作用［2］ 。但与野鸦椿“理气止痛，消肿散结”功效密切相关的抗炎镇痛作用系统研究还不够。本文采用实验性急性炎症动物模型及疼痛模型，观察EJK水提取物抗炎镇痛效果,为其临床应用提供理论提供依据。
       1  　材料与仪器
       1.1  动物昆明种小鼠, 18～22 g，雌雄各半，合格证号：001847；SD大鼠, 180～200 g，雌雄各半，合格证号：001847，由湖南长沙开福区东创实验动物服务部提供。
       1.2  药物及试剂EJK水提取物由吉首大学药理实验室提供,传统方法水提、浓缩，临用时用蒸馏水稀释成所需浓度(实验所用剂量均以生药计)；吲哚美辛，山西临汾奇林药业有限公司生产，批号201005。二甲苯，江苏徐州试剂二厂产品，批号050720；角叉菜胶，青岛海洋所提供，用前1天以无菌生理盐水配制成10 g/L，放置4℃冰箱过夜备用；甲醇，甲酰胺，冰醋酸、氢氧化钾为分析纯。
       1.3  仪器UV-260 可见-紫外分光光度计（日本岛津公司）；721可见分光光度计(上海亚研电子科技有限公司)；FA/JA型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；精度0.02 mm的游标卡尺(上海量具刃具厂)；SHH.W21.420型电热恒温水箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；LXJ-ⅡB型离心机(上海安亭科学仪器厂)。
       2  方法
       2.1   EJK水提取物对二甲苯诱导小鼠耳肿胀模型的影响［3，4］昆明种小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组：模型组（生理盐水），EJK小、中、大( 2，4，8 g/kg)3个剂量组，阳性药组(吲哚美辛，125 mg/kg)。每组动物按0.1 ml/10g连续灌胃给药5 d，模型对照组给予相同体积的生理盐水。末次给药30 min后，于小鼠右耳前后两面均匀涂抹二甲苯0.02 ml/只,左耳作对照，45 min后脱颈处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用直径为9 mm的打孔器沿左右耳片同一部位打下圆耳片，电子天平称重，计算肿胀度和抑制率（下式中给药组包括阳性药组和EJK水提取物组，肿胀度以每鼠左右耳片重量差表示。下同）。抑制率(% ) =(模型对照组肿胀度-给药组肿胀度) / 模型对照组肿胀度×100 %。
       2.2  EJK水提取物对小鼠毛细血管通透性的影响［3］接上实验，于涂抹二甲苯后，立即尾静脉注射0.5%伊文思蓝溶液0.1 ml/10 g，同时腹腔注射1 %冰醋10 ml/kg ，45 min 后脱颈椎处死动物，用5 ml生理盐水冲洗腹腔,吸管收集腹腔液，离心取上清液于590 nm 处可见分光光度计测定吸光度A值 。按公式计算小鼠腹腔毛细血管通透性抑制率。腹腔毛细血管通透性抑制率( %) = (模型对照组腹腔液A 590 - 给药组腹腔液A 590 )/模型对照组腹腔液A 590 ×100 %；待“2.1”项实验中耳片称毕，将致炎右耳片浸入1 ml甲酰胺中, 38℃水浴48 h将染料渗出，离心取上清液于620 nm处可见分光光度计测吸光度A 值。按公式计算小鼠皮肤毛细血管通透性抑制率。皮肤毛细血管通透性抑制率( %) = (模型对照组液A620 - 给药组液A620 )/模型对照组液A620 ×100 %
       2.3  EJK水提取物对角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀模型的影响［3，4］大鼠50 只, 雄性,随机分为5 组：模型组（生理盐水），EJK水提取物小、中、大( 0.4，0.8，1.6 g/kg)3个剂量组，阳性药组(吲哚美辛，25 mg/kg)，每组动物按2 ml/100 g连续灌胃给药5 d，模型组给予相同体积的生理盐水。实验当天先用游标卡尺(精度0.02 mm)测所有大鼠右后肢足跖厚度作为造模前的正常值，末次给药1 h后,于每鼠右足趾皮下注射1% 角叉菜胶0.1 ml致炎，以造成急性足跖肿胀模型。分别测定注射角叉菜胶后0.5，1，2 ，3，4，5 h大鼠致炎右后足跖的厚度，以肿胀度作为检测指标。肿胀度(mm) =致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚。
       2.4  EJK水提取物对蛋清诱导的大鼠足跖肿胀模型的影响［3，4］实验分组、给药、足跖厚度测定、肿胀度计算同“2.3”项，每鼠右足趾皮下注射鸡蛋清0.1 ml致炎，以造成急性足跖肿胀模型。
       2.5  EJK水提取物对小鼠扭体反应的影响［3］昆明种雌性小鼠50只，随机分为5组（分组、给药剂量及方法同“2.1”项)。末次给药30 min后, 每鼠腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 ml/10 g,记录注射致痛剂后15 min内各鼠扭体次数，按下式计算扭体抑制率( %) 。扭体抑制率( %) = (模型对照组平均扭体次数- 给药组平均扭体次数)/模型对照组平均扭体次数×100%。
       2.6  EJK水提取物对小鼠热板试验的影响［3］取昆明种雌性小鼠50只，随机分为5组（分组、给药剂量及方法同“2.1”)。末次给药30 min后,用秒表记录小鼠自投入恒温水浴的烧杯中［温度控制在（55±0.5）℃］至出现舔后足的时间(s)作为该鼠的痛阈值。剔除痛阈值小于5s、大于30 s或出现跳跃反应的小鼠。记录给药后0.5，1，1.5，2，3和4 h时的痛阈值，如痛阈超过60 s，按60 s计，并比较组间差异。
       2.7  数据统计分析计量资料用±s表示，多组间差异用F检验进行统计分析，进一步用One-Way ANOVA检验进行两组间比较,使用SPSS 12.0软件进行统计分析。
       3  　结果
       3.1  EJK水提取物对二甲苯诱导小鼠耳肿胀模型的影响以耳片肿胀程度、肿胀抑制率进行评价,结果见表1。二甲苯能明显诱导小鼠耳肿胀。致炎前连续灌胃给药5 d，EJK水提取物3个剂量 ( 2，4，8 g/kg)组对二甲苯致小鼠耳片急性炎症有不同程度抑制作用,其中EJK水提取物中、大( 4，8 g/kg)两个剂量组与模型组相比差异有显著性（P＜0.05）。
       3.2  EJK水提取物对小鼠毛细血管通透性的影响以伊文思蓝染料渗出情况，来判断野鸦椿对小鼠毛细血管通透性的影响，结果见表2。EJK水提取物3个剂量( 2，4，8 g/kg)组对急性炎症导致的皮肤和腹腔毛细血管通透性均有不同程度抑制作用,其中EJK水提取物( 4，8 g/kg)两个剂量组与模型组相比有显著性差异（P＜0.01）。表1  EJK水提取物对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响（略）与模型组比较，★P < 0.05, ★★P< 0.01；n=10表2  EJK水提取物对小鼠毛细血管通透性的影响（略）与生理盐水组比较，▲P＜0.05；与吲哚美辛组比较，★P＞0.05；n=10
       3.3  EJK水提取物对角叉菜胶和鸡蛋清诱导的大鼠足跖肿胀模型的影响以足跖肿胀程度进行评价。角叉菜胶和鸡蛋清能明显诱导大鼠足跖肿胀，3 h达峰值。野鸦椿对角叉菜胶和蛋清引起的大鼠足跖肿胀的影响随时间的变化关系见图1～2。EJK水提取物3个剂量(4，4，8 g/kg)组对角叉菜胶和蛋清引起的大鼠足跖肿胀均有不同程度抑制作用,其中EJK水提取物水提取物中、大(4，8 g/kg)两个剂量组与模型组相比有显著性差异（P＜0.01）。
       
       3.4  EJK水提取物对小鼠扭体反应的影响以醋酸导致的小鼠扭体实验来评价EJK水提取物对慢性持续性炎性疼痛的作用。结果见表3, 冰醋酸对不同组别的小鼠均能致痛,产生扭体反应。 EJK水提取物3个剂量(2,4,8 g/kg)组均有不同程度提高痛阈的作用,其中EJK中、小(4，8 g/kg)两个剂量组与模型组相比有显著性差异（P＜0.01）。表3  EJK水提取物对小鼠扭体反应的影响（略）与模型组比较，★P < 0.05；n=10
       3.5  EJK水提取物对小鼠热板试验的影响以热板法实验来评价EJK水提取物对酷爱疼痛的作用。野鸦椿对热板法引起小鼠疼痛痛阈的影响随时间变化的关系结果见图3。 EJK水提取物3个剂量 (0.4、0.8、1.6 g/kg)组在末次给药1～5 h均有不同程度提高痛阈的作用,其中EJK中、大 (0.8、1.6 g/kg)两个剂量组与模型组相比有显著性差异（P＜0.01）。
       
       4  讨论
        二甲苯致小鼠耳肿胀和角叉菜胶诱导大鼠足肿胀模型是急性非特异性炎症模型，结果表明EJK水提取物对急性非特异性炎症有显著抑制作用，并呈剂量依赖效应，提示EJK水提取物对急性、早期炎症具有很好的抗炎作用。通过对毛细血管通透性影响的实验，表明EJK水提取物可以降低毛细血管的通透性，减少急性、早期炎症的渗出。大鼠蛋清诱导大鼠足肿胀模型是一种免疫性炎症模型，为筛选抗炎与免疫药物的模型之一。实验表明EJK水提取物对免疫性炎症也有明显抑制作用。热板法是一种经典的快痛实验模型，本实验结果表明EJK水提取物对热板法小鼠产生的快痛具有镇痛效应。扭体实验是一种慢性持续性炎性疼痛的实验模型，实验结果提示EJK水提取物提高冰醋酸致疼鼠的阈值，表明EJK水提取物对慢性持续性疼痛小鼠也有镇痛作用。综上所述，EJK水提取物具有明显的抗炎镇痛作用，其机制有待进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］贵州省药品监督局.贵州省中药材·民族药材质量标准［S］.贵阳:贵州科技出版社, 2003: 208.
       
       ［2］董 玫，张秋霞，广田满. 野鸦椿酯类化合物抗炎症活性与结构的研究［J］. 天然产物研究与开发,2004,16（4）:290.
       
       ［3］徐叔云,卞如濂,陈 修.药理实验方法学，第3版［M］.北京:人民卫生出版社, 2002: 904.
       
       ［4］马越鸣,闫晶超,王天明,等. 泻心汤在急性炎症动物模型上的抗炎效应［J］.中国药理学通报,2006,22（11）:1393.