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       【摘要】 
       目的对玉郎伞总黄酮的几种提取工艺进行比较研究。方法以总黄酮得率为主要指标，辅以提取时间、提取次数、试剂用量、提取成本、人员及环境保护等因素，对传统热回流提取、微波提取、冷浸提取等3种提取工艺进行比较。结果 微波提取玉郎伞总黄酮的提取率较传统热回流提取和冷浸提取高，且提取时间短、试剂用量少、成本较低。结论提取玉郎伞总黄酮以微波提取法为佳。
       【关键词】  玉郎伞 总黄酮 提取工艺
        玉郎伞(Yulangsan,YLS)为蝶形花科植物疏叶崖豆Millettia pulcha Kurz vur. Laxior (Dunn)    Z. Wei的块根，是广西壮族习用药材，具有补气、补血、提高免疫力、抗衰老、抗应激、改善大脑记忆等功能，用于治疗老年健忘、小儿智力低下、强身健体消除疲劳、体弱多病及病后、产后虚弱等［1］。目前，在国内外只有本课题组对YLS进行了初步提取分离及相关药理、药效研究。YLS成分复杂，黄酮为其主要活性成分。YLS黄酮具有降血压、抗自由基、减轻心肌缺血再灌注损伤、抑制心肌收缩力、减慢心率和增加冠脉流量等作用［2］。探索高效、稳定、低毒、低成本的提取YLS黄酮方法，对进一步的新药开发意义重大。鉴于此，作者以YLS总黄酮得率为主要指标，辅以提取时间、提取次数、试剂用量、提取成本、人员及环境保护等因素，对传统热回流提取、微波提取、冷浸提取等3种提取工艺进行比较研究。现报道如下。
       1  材料
       1.1  试剂YLS饮片（经广西区药检所鉴定）、芦丁对照品（中国药品生物制品检定所）；无水乙醇、石油醚、醋酸乙酯（均为分析纯）。
       1.2  仪器热回流提取装置、WA-812型微波提取仪、RE一52AA旋转蒸发器、DZF一250型微波真空干燥箱、贝克曼紫外分光光度计、薄层扫描仪等。
       2  方法
       2.1  YLS 总黄酮的提取
       2.1.1  热回流提取取500 g YLS饮片，按料液比＝1∶8比例加入70%乙醇，加热回流提取3次，2 h/次。过滤，减压回收乙醇、浓缩，得淡黄褐色浸膏11.045 6 g。重复实验5次。
       2.1.2  微波提取将500 g YLS饮片粉碎成2 mm粒径，提取溶剂为60%乙醇，料液比为1∶8，提取温度 < 60°C，微波功率240 W，提取时间20 min , 提取1次。过滤，减压回收乙醇、浓缩，得淡黄褐色浸膏9.532 4 g。重复实验5次。
       2.1.3  冷浸提取将500 g YLS饮片粉碎成2 mm粒径，以石油醚：醋酸乙酯＝5∶5混和溶剂冷浸过夜提取，料液比为1∶8，连续提取5次，过滤，合并所有滤液，减压回收溶剂、浓缩，得淡黄褐色浸膏10.259 8 g。重复实验5次。
       2.2  YLS 总黄酮的分离3种方法提取所得的浸膏均按下法分离得到总黄酮。
        将浸膏加适量蒸馏水混悬，3 500 r/min离心，倾去上清液，沉淀物加适量80%乙醇溶解，过滤除去沉淀，滤液加入适量石油醚，振摇30 min，室温静置12 h，除去石油醚萃取液，所得乙醇液浓缩至小体积，上AB-8大孔树脂柱(40 mm×800 mm)，用2倍量蒸馏水洗涤树脂柱，收集流出液和水洗液，再用95%乙醇洗脱，流速为50～60滴·min-1（约2～2.5 ml·min-1）。收集洗脱液并减压回收乙醇，浓缩物在60℃减压恒温干燥，干燥物用少量甲醇使之刚好完全溶解，室温放置24 h，有晶体析出，过滤，重结晶3次，得到黄色针状结晶。
       2.3  YLS总黄酮的鉴别“2.2”所得黄色针状结晶以浓氨水反应、三氯化铝反应、乙酸镁反应、盐酸－镁粉反应进行定性，均显阳性结果，证实所提取物质确为黄酮类。
       2.4  YLS总黄酮的测定精密称取3种方法提取的YLS总黄酮约10 mg，分别以甲醇超声溶解，配成1 mg·ml-1溶液，按照本室方法 ［3］，以芦丁为对照品，线形回归方程为：A= -0.023 5+31.119C（r=0.999 7），于波长275 nm处测定YLS 黄酮的吸光度，带入回归方程，计算各组黄酮含量，依据公式：黄酮提取率(%)＝黄酮含量/LYS饮片重量×100% 计算3种提取方法的得率。
       2.5  统计分析总黄酮得率以±s表示，采用SPSS13.0统计软件进行方差分析、配对样本均数比较的t检验。
       3  结果
       3.1  YLS 总黄酮的分离结果结果见表1。表1  YLS 总黄酮得量(略)
       
       3.2  3种方法YLS总黄酮提取率比较结果见表2。表2  YLS 总黄酮提取率(略)与热回流提取比较，*P<0.01；与冷浸提取比较，ΔP<0.01；n=5
       4  讨论
        传统的热回流提取法具有成本低、安全性高、适合工业生产等优点。缺点是：①总黄酮提取率低；②温度过高导致部分黄酮类化合物分解;③由于提取溶剂中含水，在加热状态下，一些溶于水的杂质如糖类、蛋白质等一并进入提取液中，加大了进一步分离的困难。
        微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小、微波吸收能力相对较差的提取剂中［4］。此法的主要优点是：①可有效保护药材中的功能成分，对提取物具有较高的选择性，提取率高；②提取速度快、省时、溶剂用量少；③安全、节能、设备简单、节省投资。
        用石油醚、醋酸乙酯等极性较小的有机溶剂，主要是提取黄酮苷元部分。虽然有机溶剂对黄酮的提取率较高，而且冷浸提取也避免了黄酮类物质的受热分解，然而还是存在一些缺点：①石油醚、醋酸乙酯等有机溶剂易燃易爆；②试剂有毒和强烈刺激性，危害人体、污染环境;③提取周期较长，试剂成本较高。
        从表2可见，微波提取玉郎伞总黄酮的提取率较传统热回流提取和冷浸提取高，且提取时间短、试剂用量少、成本较低，为目前玉郎伞总黄酮的最佳提取方法。
       【参考文献】
         　　［1］黄仁彬，林 兴，蒋伟哲，等.玉郎伞化学成分对自发性高血压大鼠血压的影响［J］.中国医院药学杂志，2006，26（2）：130.
       
       ［2］焦 杨，段小群，孔晓龙，等．玉郎伞提取物对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用［J］.中国医院药学杂志，2004，24(12)：326.
       
       ［3］孔晓龙，蒋伟哲，段小群，等．正交设计优化龙眼参中黄酮类成分的提取工艺［J］.广西医学，2004，26（11）：1589.
       
       ［4］王 艳，张铁军．微波萃取技术在中药有效成分提取中的应用［J］.中草药，2005，36（3）：470.