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       【关键词】  蛤蟆油；,,紫外谱线组法；,,鉴别
       摘要：目的利用紫外谱线组法对蛤蟆油进行检测，绘制出蛤蟆油的紫外谱线组图谱。方法对蛤蟆油进行石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇、95%乙醇超声波提取后，再进行相应的紫外及其一阶导数光谱检测。结果蛤蟆油的紫外谱线组图谱重现性较好。结论通过紫外谱线组法，可以绘制出蛤蟆油的紫外谱线组图谱，达到蛤蟆油真伪鉴别的目的。
       关键词：蛤蟆油；  紫外谱线组法；  鉴别
       Identification Recearch Rana temportva Chensinensis David"s Quality with UASLG
       WANG Yongsheng，JIANG Dacheng，BAI Xueyuan， WANG Ensi*
 
　　(Jilin University, Changchun 130021, China; Changchun College of TCM, Changchun 130021, China)
       Abstract:ObjectiveUASLG was used for Rana temporatia chensisnensis David"s identification. UASLG"s action spectrums for Rana temporatia chensinensis David was described in this paper for the first. Methods Rana temporatia chensinensis David were distilled with method of ultrasonic in petroleum ether、chlorofomn、ethyl acetate、n-butanol and ethanol (95%), then their absorbance in UV and one differential coefficient spectrum were determined. Results Rana temporatia chensinensis David"s UASLG has good reappearance. Conclusion Rana temporatia chensinensis David can identified by UASLG.
       Key words:Rana temporatia chensinensis David；  UASLG；  Identification
   
　　蛤蟆油（Oviductus Ranae）为珍贵动物性中药材，据《中国药典》（2005年版）Ⅰ部收载，为蛙科动物中国林蛙 Rana temporaria chensinensis David雌蛙的输卵管，经采制干燥而得。具有补肾益精、养阴润肺的功效。临床多用于阴虚体弱，神疲乏力，心悸失眠，盗汗不止，痨嗽咳血［1］。国内蛤蟆油的使用较为混乱，由于正品蛤蟆油价格较贵，市场上常有以伪品蛤蟆油充当正品蛤蟆油销售使用的情况，其外观性状较为相似，尤其是蛤蟆油常粉成细粉后调剂，伪品蛤蟆油更易于正品蛤蟆油混淆，误用、混用现象时有发生。为了寻找快速、简便、准确地鉴别正品蛤蟆油与伪品蛤蟆油，特别是鉴别粉末的方法，我们对正品蛤蟆油和伪品蛤蟆油的石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇和95%乙醇提取液分别进行了紫外光谱法鉴别研究。本文用紫外谱线组法对其进行鉴别，此方法鉴别中药材具有特征性强、取样量小、简便、快速、准确等特点且方法可靠，简单，重现性强，可供鉴别参考［2，3］。现将结果报道如下。
       　1   材料
       安捷伦 UV8453型分光光度计，石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇和95%乙醇均为分析纯，药材样品为本院生药教研室姜大成教授鉴定，见表1~2。
       　　2   方法与结果
       分别取上述干燥药材碎成粗粉，精密称定约0.2 g，分别加入石油醚10 ml，超声波提取20 min，滤过，定容至10 ml容量瓶中，配制成浓度相当于生药浓度约为20 mg/ml的供试溶液，石油醚为空白液；按分光光度法测定各样品的紫外吸收及一阶导数紫外吸收，结果见图1~2及表3~4。其余步骤同上，分别加入三氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇、95%乙醇超声提取20 min，配制成供试溶液，相应的溶剂作为空白液，结果见表3~4及图3~10。
       表1  正品蛤蟆油样品采集鉴定（略）
       图1  蛤蟆油（正品）石油醚提取液图　谱合图（A~K共11个样品）　（略）
       图2  蛤蟆油（正品和伪品）石油醚提取液图　谱合图（一个正品 A和四个伪品S，T，V，W）（略）
       表2  伪品蛤蟆油样品采集鉴定表（略）
       表3  正品与伪品蛤蟆油紫外谱线组图谱峰位值比较（略）
       * 表示有时此峰出现有时此峰被掩盖
       表4  正品与伪品蛤蟆油一阶导数紫外图谱吸收值比较（略）
       *表示有时此峰出现有时此峰被掩盖
       图3  蛤蟆油（正品）三氯甲烷提取液图　谱合图（A~K共11个样品）（略）
       图4  蛤蟆油（正品和伪品）三氯甲烷提取液图谱合图（1个正品 A和4个伪品S，T，V，W）（略）
 
　　结合图1和表3~4可以总结出：正品蛤蟆油的石油醚提取液紫外图谱的峰形较缓，220~250 nm之间的峰形类似马背状。蛤蟆油正品特征吸收峰值为：（213±2） nm为最强的吸收峰，在（227±2） nm处有一特征吸收峰和在（268±1） nm处有一很弱的吸收峰而且这两个吸收峰有时出现有时被掩盖。其一阶导数紫外光谱在（211±1） nm处有最强吸收，在（215±1） nm处有最强吸收，在2151 nm处有最弱吸收。结合图2和表3~4可以明显看出样品中伪品S，T，V与正品A有明显的差别。从峰形和吸收峰位置可判断出S，T，V和A有明显的差别，一阶导数紫外光谱中伪品S与正品在峰位上有明显的区别，而且伪品V在268 nm处的吸收是较强的吸收也明显的区别于正品。结合图3和表3~4可以总结出：正品蛤蟆油三氯甲烷提取液的峰形较缓。蛤蟆油正品三氯甲烷提取液的特征吸收峰值为：（243±1） nm处有最强吸收峰，（275±2） nm处有特征吸收峰，且在200 nm附近有明显的末端吸收。其一阶导数紫外光谱在（239±1） nm处有最强吸收，在（270±1） nm处有次强吸收，在（251±1） nm有最弱吸收，在（291±3） nm处有次弱吸收。结合图2和表3~4可以看出伪品S的峰形明显不同于正品A的峰形，伪品T在275 nm附近没有特征峰的吸收，从表4可以看出伪品W在291 nm附近没有峰谷，固可区别之。
       图5  蛤蟆油（正品）醋酸乙酯提取液图　谱合图（A~K共11个样品）（略）
       图6  蛤蟆油（正品和伪品）乙酸乙酯提取液图谱合图　（1个正品 A和4个伪品S，T，V，W）（略）
 
　　结合图5和表3~4可以看出：正品蛤蟆油的吸收峰峰形呈鹅头状，在（270±2）nm处有圆滑最强吸收峰，在（253±2）nm附近有一特吸收峰，但有时被掩盖。其一阶导数紫外光谱在（264±4）nm处有最强吸收，在（251±2）nm处有次强吸收（有时被掩盖），（287±2）nm处有最弱吸收。结合图6和表3~4可以看出伪品 S，T与正品 A在峰形上有明显的区别，且伪品 T无270 nm附近的特征吸收峰。伪品 S，T的一阶导数紫外光谱明显区别于正品。结合图7和表3~4可以看出蛤蟆油正品的正丁醇提取液在（234±2） nm处有最强吸收，在（272±3） nm处有一明显的特征吸收峰。其一阶导数紫外光谱在（263±1） nm处有最强吸收。结合图8和表3~4可以看出正品蛤蟆油和伪品蛤蟆油有明显的区别。从峰形上可以明显的区别出伪品 S，T，伪品 S和 V在234 nm附近没有特征吸收，也可以区别。伪品 W在268 nm处有特征吸收峰，和正品相比有点紫移，但不是很明显。伪品 T和 W的一阶导数紫外光谱的吸收峰峰位明显区别于正品。所以用正丁醇提取后再通过紫外检测的方法可以完全区别这4种伪品蛤蟆油。
       图7  蛤蟆油（正品）正丁醇提取液图谱合图　（A~K共11个样品）（略）
       图8  蛤蟆油（正品和伪品）正丁醇提取液图谱合图　（1个正品 A和4个伪品 S，T，V，W）（略）
       图9  蛤蟆油（正品）95%乙醇提取液图谱合图　（A~K共11个样品）（略）
       图10  蛤蟆油（正品和伪品）95%乙醇提取液图谱合图　（1个正品 A和4个伪品 S，T，V，W）（略）   
       结合图9和表3~4可以看出蛤蟆油的95%乙醇提取液在（203±1）nm处有最强吸收峰，在（230±5）nm处有明显的特征吸收峰，而且在200 nm附近有较强的末端吸收。其一阶导数紫外光谱在（201±1）nm处有最强吸收。结合图10和表3~4可以明显看出正品蛤蟆油和伪品蛤蟆油之间的区别。从吸收峰的形状上可以明显的区别伪品 S。从表3~4可以看出蛤蟆油的正品和伪品在吸收峰的峰位上没有明显的区别。
       　　3  讨论
       3.1  结合以上实验可以得出：4种伪品蛤蟆油通过以上5种不同极性的有机溶剂超声提取后用紫外光谱及其一阶导数光谱完全可以鉴别出来。其鉴别情况详见表5。从表5中发现正丁醇提取液用紫外光谱检测可以完全鉴别出这4种伪品蛤蟆油，由此，笔者认为石油醚、三氯甲烷和正丁醇3种溶剂联合使用，是 UV光谱鉴别蛤蟆油真伪品的最佳方法。
       表5  用不同极性有机溶剂提取对蛤蟆油四种伪品的鉴别情况一览表（略）
       #表示蛤蟆油伪品用此种溶剂经超声波提取后再用紫外进行检测，通过其紫外光谱及其一阶导数紫外光谱综合比较，可以与正品蛤蟆油相区别。
       3.2  正品蛤蟆油的不同极性有机溶剂的超声波提取液在紫外光谱的反复检测中，峰形非常的接近，表明正品蛤蟆油的主要成分是类似的，只是由于某些成分的含量不同导致其吸光系数的差异。从本实验还可以看出不同产地的正品蛤蟆油其紫外光谱及一阶导数光谱的特征吸收峰波长经重复测定位置较接近，且重现性良好。通过不同极性有机溶剂提取液紫外光谱及一阶导数紫外光谱特征吸收峰的比较，能区别出正品蛤蟆油和伪品蛤蟆油。因此，通过紫外谱线组法，比较其紫外吸收峰形状、紫外特征吸收峰和一阶导数特征吸收峰，可以获得较好的鉴别效果，并在传统鉴别方法的基础上，一定程度地充实了中药蛤蟆油的鉴别方法。
       3.3  正品蛤蟆油和伪品蛤蟆油的紫外谱线组图谱提示，各自的化学成分组成上或许有相似的部分，又有不同的部分，且相同成分的组成比例不尽相同，因此，使吸收谱图有一定的差异。在亲缘关系较近、成发相差不大，用紫外谱线组图谱方法，通过综合比较其谱图的差异，可获得较好的鉴别效果。纵观紫外光谱的全貌，蛤蟆油及其伪品的各溶剂提取液的谱图，在峰形、吸收峰数目和峰位均有明显差异，具有非常明显的鉴别指标，达到鉴别药材的目的。
       3.4  本实验所采集的样品主要来源于蛤蟆油的主产区――东北地区，所以得出的紫外谱线图谱及特征吸收峰数据等有一定的代表性，可为蛤蟆油真伪鉴别提供一定的依据。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2005：179.
       ［2］  袁久荣.中药鉴别紫外谱线组法及应用［M］.北京：人民卫生出版社，1999：87
       ［3］  汤迎爽，宋红儒，杨丽甲，等.紫外光谱法鉴别粉防已及其混伪品木防已、小果微花藤［J］.时珍国医国药，2003，14（1）：26.

　　基金项目：国家中医药管理局科研基金项目（No.04-05ZP20）
       (吉林大学，吉林 长春   130021；  长春中医学院，吉林 长春   130021)