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       【摘要】 
       目的测定不同产地狭叶柴胡中柴胡总皂苷及柴胡皂苷a的含量。方法采用可见分光光度法和高效液相色谱法。结果不同产地狭叶柴胡药材中的柴胡总皂苷和柴胡皂苷a的含量差异较大，且同一药材中柴胡总皂苷与柴胡皂苷a含量的高低不一致，未显示出相关性。结论为保证狭叶柴胡药材的质量和疗效，应制定药材中柴胡皂苷的限量标准。
       【关键词】  狭叶柴胡;柴胡总皂苷;柴胡皂苷a;分光光度法;高效液相色谱法
       Abstract：ObjectiveTo determine the contents of total saikosaponin and saikosaponin-a in Bupleurum scorzonerifolium Willd from different areas.MethodsVisible-spectrophotometry and high performance liquid chromatography were adopted.ResultsThe contents of total saikosaponin and saikosaponin-a were obviously different in drugs of B. scorzonerifolium from different areas.The test showed no correlation in the same drug with the level of inconsistency.ConclusionTo ensure the quality and curative effect of B. scorzonerifolium, the contents of total saikosaponin and saikosaponin-a should be assayed.
       Key words： Bupleurum scorzonerifolium Willd; Total saikosaponin; Saikosaponin-a; Content
       狭叶柴胡(又名南柴胡)Bupleurum scorzonerifolium Willd为伞形科(Umbelliferae)柴胡属(Bupleurum L.)多年生草本植物，是《中国药典》中规定的中药柴胡的原植物之一，其以根入药，具疏散退热、舒肝生阳之功效[1]，其主要有效成分为柴胡皂苷，具解热、镇痛、镇静、保肝等多种药理作用[2]，主治感冒、寒热往来、疟疾、胸胁苦闷、月经不调、子宫脱垂以及脱肛等症。因此，狭叶柴胡的质量以柴胡皂苷的含量高低来评价。本研究采用分光光度计和高效液相色谱的方法对不同产地的狭叶柴胡中柴胡总皂苷和柴胡皂苷a的含量进行测定，进而考察狭叶柴胡的药材质量，以期为制订柴胡有效成分的含量标准提供科学数据。
       1仪器与材料
       1.1仪器AS3120A型超声提取仪，SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)，RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，FA1104电子天平(上海天平仪器厂)，电热恒温水浴锅(北京化玻联医疗器械有限公司)，752C型紫外可见光分光光度计，美国安捷伦Agilent 1100高效液相色谱仪。
       1.2试剂柴胡皂苷a(纯度为98.8%)购于成都思科华生物技术有限公司;乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余所用试剂均为分析纯。
       1.3药材狭叶柴胡药材购买于当地药房及药材市场，药材来源见表1。所有药材均由西北大学胡正海教授鉴定为正品。
       2方法与结果
       2.1柴胡总皂苷含量的测定方法
       2.1.1样品溶液的制备精密称取样品粉末各3 g，置50 ml三角瓶中，加入30 ml甲醇溶液，用超声提取仪超声波振荡1 h，抽滤。滤渣用30 ml甲醇溶液浸泡过夜，超声波振荡1 h，抽滤。滤渣再用30 ml甲醇溶液超声振荡 1 h，抽滤。合并3次滤液，减压浓缩至近干，加入甲醇定容于10 ml容量瓶中，摇匀，待用。
       2.1.2标准曲线的绘制精密称取柴胡皂苷a标准品1 mg，用甲醇溶解稀释定容于1 ml容量瓶中。分别量取柴胡皂苷a标准溶液20，40，60，80，100 μl，在电热恒温水温箱中于50 ℃水浴蒸干。蒸干后加入1% 对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100 μl，70 ℃水浴中温热10 min取出。冷却后加入磷酸4 ml，于70℃水浴中反应30 min，取出放置冷却30 min。以752C型紫外可见光分光光度计在546 nm处对标液进行测定，以吸光度为纵坐标，以标准品质量为横坐标绘制标准曲线，测得回归方程为：Y=3.962 6X-0.029 3，r=0.999 9。线性范围为：20～100 μg。
       2.1.3精密度实验取同一供试品(安徽狭叶柴胡药材)溶液40μl, 按“标准曲线的绘制”项下的方法重复操作5次，计算总皂苷的含量。结果总皂苷的平均含量为3.577%，RSD=2.19%(n=5)。由于RSD<5%，表明仪器精密度符合要求。
       2.1.4重复性实验取同一供试品(江苏狭叶柴胡药材)样品5份，每份3 g，精密称定，按“样品溶液的制备”项下的方法制备样品溶液，再按“标准曲线的绘制”项下的方法重复操作，计算总皂苷的含量。结果总皂苷的平均含量为4.647%，RSD=1.28%(n=5)。由于RSD<5%，表明方法的重复性较好。
       2.1.5稳定性实验取同一供试品(甘肃狭叶柴胡药材)溶液，分别于制备后0，2，4，6，8 h测定，结果总皂苷的平均含量为2.766%，RSD=1.56%(n=5)。由于RSD<5%，表明样品在8 h内稳定。
       2.1.6加样回收率实验精密称取已知总皂苷含量的样品(四川狭叶柴胡药材)5份，准确加入等量的对照品适量，按“供试品溶液的制备”项下的方法制备样品溶液，分别进行测定，计算总皂苷含量，结果平均回收率为99.25%，RSD=1.06%(n=5)。
       2.1.7样品溶液的测定精密量取样品溶液40 μl, 按“标准曲线的绘制”项下的方法对样品溶液进行反应，在λ=546 nm处对样品溶液进行测定。结果见表1。
       2.2柴胡皂苷a含量的测定方法
       2.2.1色谱条件固定相为C18化学键和硅胶柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相为甲醇-水(67∶33);流速：1 ml·min-1;柱温25 ℃;检测波长为208 nm;进样量为5 μl。
       2.2.2样品溶液的制备精密称取样品粉末各1 g于250 ml圆底烧瓶中，加入5% 氨水-甲醇溶液50 ml，称重。80 ℃ 水浴回流1.5 h，放至室温，加甲醇补足损失的重量。室温下以转速3 000 r·min-1离心10 min。精密移取上清液25 ml，减压浓缩至近干。用甲醇溶解并转移至5 ml容量瓶中。加甲醇至刻度，摇匀，即得。
       2.2.3标准曲线的绘制用甲醇精密配制浓度分别为0.1，0.5，1.0，1.5，2.0 mg·ml-1的柴胡皂苷a标准品溶液，分别吸入5 μl注入高效液相色谱仪进行测定，以峰面积为纵坐标，标准品浓度为横坐标绘制标准曲线，测得回归方程为：Y=2 229.8X+221.8，r=0.998 7。线性范围为：0.1~2.0 μg。
       2.2.4精密度实验取柴胡皂苷a对照品溶液，在上述色谱条件下进行测定，连续进样5次，每次进样5 μl，结果其峰面积的平均值为932.6528， RSD=0.238%(n=5)。由于RSD<5%，表明色谱系统精密度符合要求。
       2.2.5重复性实验取同一供试品(河北狭叶柴胡药材)样品5份，每份1g，精密称定，按“样品溶液的制备”项下的方法制备样品溶液，按上述色谱条件进行测定，结果其峰面积的平均值为177.645 5， RSD=0.582%(n=5)。由于RSD<5%，表明方法的重复性较好。
       2.2.6稳定性实验取同一供试品(辽宁狭叶柴胡药材)溶液在室温下放置,分别在0，2，4，6，8 h按上述色谱条件进行测定，结果其峰面积的平均值为297.620 57， RSD=0.751%(n=5)。由于RSD<5%，表明样品在8 h内稳定。
       2.2.7加样回收率实验精密称取已知柴胡皂苷a含量的样品(内蒙古狭叶柴胡药材)5份，准确加入等量的对照品适量，按“样品溶液的制备”项下的方法制备样品溶液，按上述色谱条件进行测定，结果其峰面积的平均值为1 049.347 21，平均回收率为98.612%，RSD=1.263%(n=5)。
       2.2.8样品溶液的测定样品溶液过0.45 μm滤膜后，分别吸取制备好的不同供试样品溶液 5 μl注入高压液相色谱仪进行测定，依据标准曲线来换算样品中柴胡皂苷a的含量。对照品、样品HPLC图谱见图1。柴胡皂苷a的含量测定结果见表1。从表1可见，不同产地狭叶柴胡药材中的柴胡总皂苷和柴胡皂苷a的含量差异很大。对于柴胡总皂苷含量来说，江苏省的狭叶柴胡药材中柴胡总皂苷含量最高，为4.674%;四川、甘肃、湖北和陕西四省含量相差不大，均在2.6%~2.8%之间;而辽宁和河北两省的含量相对较低，分别为1.305%和1.329%。而对于柴胡皂苷a来说，四川、甘肃和陕西三省的含量较高，其中四川的含量最高，为1.03%;而河北省狭叶柴胡药材中的柴胡皂苷a含量最低，仅为0.069%。图1柴胡皂苷a对照品(a)和狭叶柴胡药材样品(b)HPLC图表1不同产地狭叶柴胡药材中柴胡总皂苷和柴胡皂苷a的含量
       3结论与讨论
       测定结果表明，不同产地的狭叶柴胡药材中皂苷类成分的含量差异较大，其中柴胡总皂苷的含量，以江苏省的最高，辽宁省的含量最低;柴胡皂苷a的含量则以四川省的最高，河北省的最低。这可能与狭叶柴胡的生长环境、采收年限等不同因素的影响有关。同时，可以看出，同一药材中柴胡总皂苷含量高者，柴胡皂苷a含量不一定高，两者的高低变化未显示出相关性。因此，在评价药材质量时，不能单独仅考虑柴胡总皂苷或柴胡皂苷a的含量，要两者含量均高才是质量比较好的药材。另外，测定结果还表明，目前市场上流通的狭叶柴胡药材中皂苷类成分的含量相差很大，所以为了保证药用柴胡的质量和疗效，急需在《中国药典》中规定柴胡药材中皂苷类成分的限量标准。
       【参考文献】
         　[1]谭利，张庆英，李教社, 等. 南柴胡根中木脂素苷类化合物的研究[J].药学学报,2005,40(5):428.
       
       [2]安玉明, 接传胤, 祝世伟. 柴胡的研究进展[J].人参研究, 2001,13(1):11.