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       【摘要】 
       目的建立华山松Pinus armandii Franch.松塔中抗艾滋病病毒(HIV)活性部位多糖含量测定方法。方法采用苯酚-硫酸法显色，在489.0 nm波长处用紫外分光光度法测定多糖含量。结果回归方程为:A=0.011 3C-0.058 2，相关系数r=0.999 6，测得抗HIV活性部位(Ⅰ~Ⅲ)多糖含量分别为：64.69%， 67.14%， 71.85%;平均加标回收率为99.32%，RSD为0.34%(n=6)。结论该方法快速、简便、灵敏,可作为松塔中抗HIV活性部位的多糖含量测定方法。
       【关键词】  多糖;抗HIV活性部位;华山松;苯酚-硫酸法
       Abstract：ObjectiveTo determine the content of polysaccharides in the activity sites from pine cone of Pinus armandii Franch.MethodsPhenol-sulfuric acid method was used to determine the content of polysaccharides at 489.0nm.ResultsThe regression equation was A=0.0113C-0.0582, r=0.999 6. The contents of polysaccharides in anti-HIV active sitesⅠ-Ⅲ was 64.69%, 67.14%, 71.85%,respectivety. The average recovery was 99.32% and RSD was 0.34%(n=6).　　ConclusionThe method is rapid, reliable and sensitive, and it can be used to determine the contents of polysaccharides in the activity sites from pine cone of Pinus armandii Franch.
       Key words： Content determination;Polysaccharides;Anti-HIV;Active site;Pinus armandii Franch;Phenol-sulfuric acid method
       我国松科松属植物资源丰富，有22种，10个变种，另引进16种，又2个变种，合计五十余种，分布极广[1]。该属植物多具药用价值，作为天然药物在国内外都有着长期和广泛的应用，有祛痰、止咳、平喘功效[2]。松属的松塔主要作为农家燃料，药用开发很少。根据云南省医学信息研究所的调查报告，国内未见松塔抗艾滋病的报道。本论文对采集于云南省巍山县的华山松Pinus armandii Franch.松塔进行研究，我们找到抗HIV活性显著的部位并对其活性部位的多糖含量进行测定,为进一步研究抗HIV药物打下基础。
       1仪器与试剂
       1.1仪器DHG-9075A型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司)，FA2004N电子天平(上海精密科学仪器有限公司)，超声波仪(上海声源超声波仪器设备有限公司)，电子恒温水浴锅(上海金桥科析仪器厂)，T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)。
       1.2试剂葡萄糖(AR，广东汕头市西陇化工厂，0501311)，苯酚(AR，天津市化学试剂三厂，20061208)，浓硫酸(AR，重庆川东化工有限公司化学试剂厂，20070112)。
       2方法与结果
       2.1葡萄糖标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖10 mg，用蒸馏水溶解并定容到100 ml的容量瓶中，摇匀，使成100 μg/ml的标准溶液，备用。
       2.2最大吸收波长的选择精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖5 mg，用蒸馏水溶解并定容到100 ml的容量瓶中，摇匀，使成50 μg/ml的溶液。精密吸取该溶液1 ml，加入5%苯酚溶液1.50 ml，浓硫酸6 .00 ml，室温放置5 min，然后置于沸水浴中加热15 min，取出后立即放入冷水中冷却至室温。以1 ml蒸馏水，1.50 ml 5%苯酚溶液，6 .00 ml浓硫酸混合液做空白，用T6新世纪紫外可见分光光度计在200~600 nm波长范围内扫描，确定最大吸收波长为489.0 nm[3]。
       2.3葡萄糖标准曲线绘制精密量取“2.1”项中制备的葡萄糖标准液各0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 ml于25 ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。再用移液管分别量取这7种溶液2.00 ml于7支具塞试管中，依次加入1.50 ml 5%苯酚溶液，摇匀，然后再迅速加入浓硫酸6 .00 ml，迅速混匀，室温放置5 min，然后置于沸水浴中加热15 min，取出后立即放入冷水中冷却至室温。最后以第1管中未加入葡萄糖的做空白对照，用T6新世纪紫外可见分光光度计在489.0 nm处测定其吸光度值，以吸光度值(A)对葡萄糖浓度(C, μg/ml)做回归处理，回归方程为:A=0.011 3C-0.058 2，相关系数r=0.999 6，线性范围为：8~48μg/ml[4]。
       2.4松塔样品溶液配制分别称取3种抗HIV活性部位样品，用蒸馏水进行溶解，定容至100 ml。
       2.5回收率实验采用加标回收法,取松塔样品Ⅰ~Ⅲ溶液各1.00 ml分别于6只具塞试管中，分别加入各浓度葡萄糖标准液0.50 ml，按“2.2”项中的方法和步骤进行操作，测其吸光度，并计算回收率[5]，结果见表1。测得平均回收率为99.32%，RSD为0.34%。
       2.6稳定性实验取松塔样品Ⅰ～Ⅲ溶液，按“2.2”项中的方法和步骤进行操作，每隔20 min测定1次吸光度。结果见表2。结果表明1h内颜色变化较小，不影响测定。表1加标回收实验结果表2稳定性实验结果
       2.7精密度实验取松塔样品Ⅰ～Ⅲ溶液，按“2.2”项中的方法和步骤进行操作，重复测定其吸光度5次。由实验数据得RSD为 0.43%，表明该方法精密度良好。
       2.8重复性实验对松塔样品Ⅰ～Ⅲ溶液重复取样5次，按“2.2”项中的方法和步骤进行操作，分别测其吸光度。得RSD为 0.40%[6]。
       2.9松塔样品中多糖含量测定取“2.4”项中3种样品液各1.00 ml于25 ml容量瓶中进行定容，摇匀，过滤。分别取滤液1.00 ml按“2.2”项中的方法和步骤进行操作。测定结果见表3。表3松塔中多糖含量的测定
       3讨论
       本实验方法的原理为多糖在强酸作用下水解生成单糖，并迅速脱水成糠醛，糠醛与苯酚缩合成有色物质。此实验方法简便易行，操作方便，测定结果准确。
       【参考文献】
         　[1]郑万均. 中国树木志[M]. 北京: 中国林业出版社，1983：148.
       
       [2]中国药典委员会. 中国药典 [S]. 北京:人民卫生出版社，1977：334.
       
       [3]李好枝，吕永俊，白钢，等.油松果多糖的含量测定[J].中草药，1994，25(4):185.
       
       [4]刘娟，杨光，韩晓强. 玉米须多糖提取及其含量测定[J]. 黑龙江医药科学，2005，28(5):9.
       
       [5]王铮，李云森，李绍顺. 苯酚-硫酸法测定白蕊草中多糖的含量[J].中国现代应用药学，2006，23(6):483.
       
       [6]李发美. 分析化学，第5版[M]. 北京:人民卫生出版社，2004：8.