文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的观察抗纤灵冲剂对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾功能的影响。方法将120只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、抗纤灵组、氯沙坦组。造模后7 d，14 d，21 d，28 d分批处死，腹主动脉采血,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)。结果模型组大鼠Scr 、BUN显著升高，尿MA、β2-MG、NAG明显上升，与正常组及假手术组比较有统计学意义(P<0.01);抗纤灵组大鼠Scr 、BUN显著下降，尿MA、β2-MG、NAG明显降低，与模型组比较有统计学意义(P<0.01或P<0.05),抗纤灵组与氯沙坦组比较，Scr明显降低，有统计学意义(P<0.01)，7d尿MA及14d β2-MG显著低于氯沙坦组。结论抗纤灵冲剂降低Scr 、BUN及尿MA、β2-MG、NAG，可能是通过舒张血管、调节管球反馈、改善肾小管间质纤维化及影响细胞因子、炎症介质的合成与分泌等多途径、多靶点地保护肾功能的。
       【关键词】  UUO;抗纤灵冲剂;Scr;BUN;MA;β2-MG;NAG
       Abstract：ObjectiveTo observe the effect of Kangxianling on the renal function in rats with unilateral ureteral obstruction.MethodsSD rats were randomly divided into normal group,sham operation group,model group,Kangxianling(KXL) group and Losartan group. After making model for 7，l4，21，28 d,the animals were killed in batch to get their blood through abdominal aorta,and the levels of Scr and BUN were determined.24 h-urine was collected and MA,β2-MG and NAG were detected.ResultsThe levels of Scr ,BUN in serum and MA,β2-MG,NAG in urine in model group were increased obviously，which were significantly different with normal group and sham-operation group (P<0.01). The contents of Scr ,BUN in serum and MA,β2-MG,NAG in urine in KXL group decreased obviously，which were significantly different with model group (P<0.01，P<0.05).Compared with Losartan group，the level of Scr in serum was declined remarkably，MA on the seventh day and β2-MG on the forteenth day had the same tendency.ConclusionThrough expanding blood vessels，regulating tubuloglomerular feedback，lightening the fibrosis of renal interstitium，controlling synthesis and secretion of cytokine，KXL can protect the renal function and decrease the level of Scr ,BUN in serum and MA,β2-MG,NAG in urine.
       Key words： Unilateral ureteral obstruction;Renal function;Kang xianling;Scr;BUN;MA;β2-MG;NAG
       慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)严重危害人们的身体健康,国内外资料表明，CRF的发病率、患病率均明显上升[1，2]。虽然原发性肾病、肾血管病变和慢性间质肾炎这些病变进展到慢性肾功能衰竭的发病机制至今尚未完全阐明，但近10年来通过大量动物实验和临床研究发现，CRF的进展和预后不仅与肾小球损害有关，更与肾小管间质病变的严重程度密切相关[3]，所以肾间质纤维化已成为CRF新的研究热点之一。流行病学调查发现，死于尿毒症的老人，30%以上存在梗阻病变[4]。以往的研究多集中于UUO对肾间质纤维化的影响，少有直接针对肾功能改变与RIF关系的研究。故而我们采用公认的研究梗阻原因造成肾间质纤维化的UUO模型 [5]，以期为临床缓解肾间质纤维化提供一定的理论指导。所以我们拟通过检测血清Scr 、BUN、MA、尿β2-MG、NAG来观察抗纤灵冲剂对肾功能的干预作用。
       1材料与仪器
       1.1动物健康SPF级雄性SD大鼠120只，体质量(180±20)g，由上海中医药大学实验动物中心提供。分笼饲养于12 h光照，45%左右相对湿度的饲养笼中，自由饮食。
       1.2药物及试剂抗纤灵冲剂水煎液：丹参15 g，制大黄15 g，桃仁12 g，当归12 g，牛膝9 g，由上海中医药大学附属曙光医院制剂室提供。水提浓缩，含生药2 g/ml。肌酐试剂盒、尿素氮试剂盒：均由南京建成生物工程研究所提供。
       1.3仪器及设备XHF-D高速分散器(内切式匀浆机)，宁波新芝生物科技有限公司产品;Anke TDL-5台式离心机，上海安亭科学仪器厂产品;MDF-U 53V超低温冰箱(ultra-low temperature freezer)：sanyo electric Co.， Ltd;100μl金花移液器，批号为0021064;1 000μl金花移液器,批号为0041063;微孔板扫描分光光度计,型号为BIO-TEK/MQX200R;KQ-500V型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司产品;超纯水系统，Elix System，Mini-Q Synthesis Water Purification Sys ，美国 Millipore ，IMMAGE自动免疫透射比浊仪;SN-697全自动双探头放射免疫γ计数器;BECKMAN DxC800自动生化仪。
       2方法
       2.1动物模型制作、分组及给药模型制作: 按0.15 ml/kg 的剂量，用3%戊巴比妥钠麻醉大鼠后，行左侧输尿管结扎术。步骤：背部肋脊角处做一纵行切口，长约2～3 cm(与背部正中线平行)，夹住脂肪组织，取出肾脏，将其翻向脊柱侧，以生理盐水纱布覆盖，暴露肾蒂，找出输尿管，在中2/3与下1/3处，用0号线结扎，提起切口处皮肤肌肉，使肾脏回纳原位，分层缝合肌肉、皮肤层。空白组24只：不作处理，直接分笼饲养。假手术组24只:剖开大鼠腹腔，分离出左侧输尿管后，不结扎,分层缝合;动物模型制备成功后，再将造模组分为UUO模型组24只、UUO抗纤灵组24只、UUO氯沙坦组24只。正常组、假手术组、UUO模型组均予以生理盐水1 ml/d灌胃。UUO抗纤灵组予抗纤灵煎液1 ml/d灌胃，UUO氯沙坦组予氯沙坦水溶液1 ml/d，每毫升含抗纤灵或氯沙坦的剂量相等于60 kg体重成人每日临床用量的10倍。
       2.2观察指标及方法各组大鼠于7，14，21，28 d分批腹主动脉采血后处死，备测Scr、BUN。处死前1 d留取各组大鼠24 h尿液，备测MA、尿β2-MG、NAG。Scr、BUN用除蛋白法，测定过程均严格按照试剂说明书要求进行。MA用免疫透射比浊法，尿β2-MG用放射免疫法，NAG用酶法测定，交由曙光医院生化实验室完成。
       2.3统计学方法采用SPSS13.0统计软件，计量资料用±s表示，不同时间点数据间比较用t检验。
       3结果
       3.1对Scr、BUN的影响具体结果见表1。表1对UUO大鼠肾小球功能的影响模型组Scr、BUN于14 d升至最高，之后21，28 d持续下降，但28 d时的水平仍高于7 d，与假手术组和空白组比较都有统计学意义(P<0.01)。抗纤灵组各时间点的Scr、BUN水平均显著低于模型组(P<0.01)，氯沙坦组7 d，14 d Scr、BUN水平均显著低于模型组(P<0.01)，氯沙坦组21 d，28 d的Scr、BUN水平均低于模型组，但无统计学意义(P>0.05)。抗纤灵组与氯沙坦组比较，7，21，28 d时间点Scr比较有统计学意义(P<0.01)，14 d时比较无统计学意义;而各时间点BUN的比较无统计学意义(P>0.05)。
       3.2对MA、β2-MG、NAG的影响具体结果见表2。表2对UUO大鼠肾小管功能的影响MA水平模型组7，14，21 d逐渐升高，28 d稍有降低，与假手术组和空白组比较都有统计学意义(P<0.01);β2-MG模型组持续升高，与假手术组和空白组比较都有统计学意义(P<0.01)。NAG模型组7，14d持续升高，21d反而下降，28d时再次升高，与假手术组和空白组比较都有统计学意义(P<0.01)。抗纤灵组各时间点的MA、β2-MG、NAG水平均显著低于模型组(P<0.01);氯沙坦组各时间点的MA、NAG水平均低于模型组，有统计学意义(P<0.01，或P<0.05)，β2-MG水平7 d时显著低于模型组(P<0.01)，其余各时间点无统计学意义(P>0.05)。抗纤灵组与氯沙坦组比较，7 d MA有统计学意义(P<0.05)，14 d β2-MG水平有统计学意义(P<0.01)，其余各时间点β2-MG、NAG的比较无统计学意义(P>0.05)。
       4讨论
       对于UUO导致的梗阻性肾病，祖国医学认为脏腑气血失调，“久病入络”“久痛入络”，血络瘀阻为患，瘀血阻络为其主要原因，且贯穿其始终。如王刚[6]等认为在肾间质纤维化过程中，由于血流动力学的改变，免疫反应介导的凝血机制被激活，加速凝血酶原活化为凝血酶，促进纤维素在肾组织中沉积。王永钧[7]等通过光镜、电镜检测，结合中医理论，认为肾间质纤维化是发生在肾脏的微型癥积，瘀血阻络则是其主要病理基础。
       血瘀证贯穿于梗阻性肾病慢性肾衰发病过程之始终，在一定程度上，肾络瘀阻的程度可反映梗阻的程度，且活血化瘀中药在体内外均显示出明显的抗肾间质纤维化作用。如由活血化瘀为主组成的抗纤灵冲剂经科研及临床验证治疗早期慢性肾功能衰竭行之有效[8]。该方由丹参、制大黄、桃仁、当归、牛膝组成。其中丹参、制大黄为君药。近年来研究显示，该方能明显减少UUO大鼠模型α-SMA的表达，抑制胶原的合成，同时可促进胶原的降解，抑制TGF-β1激活肾间质成纤维细胞，拮抗TGFβ1导致的FN表达和合成，下调CTGF的表达，抑制肾小管间质细胞向肌成纤维细胞转化，从而减缓肾间质纤维化的发生与发展[9～11]。
       本研究中，模型组Scr、BUN于14 d升至最高，之后21，28 d持续下降，但28 d时的水平仍高于7d，与假手术组和空白组比较都有统计学意义(P<0.01)。Scr、BUN的动态变化表明，在输尿管梗阻的前两周，可能存在着一个急性肾功能损伤的过程，之后随着对侧肾脏的代偿作用，肾功能的下降放缓，但自UUO开始，总的趋势是肾功能持续损伤。抗纤灵组各时间点的Scr、BUN水平均显著低于模型组，表明抗纤灵冲剂通过活血化瘀、补益肝肾的作用，对梗阻性肾病引起的肾损伤有确切的疗效。氯沙坦组各时间点的Scr、BUN水平均低于模型组，但无统计学意义，说明氯沙坦作为AngⅡ受体阻断剂在梗阻性肾病的防治中，对肾功能不具有明显的保护作用。抗纤灵组与氯沙坦组比较，7，21，28 d时间点Scr比较有统计学意义，而各时间点BUN的比较无统计学意义，则表明在急性梗阻性病变的早期及慢性梗阻过程中，抗纤灵冲剂的肾保护作用显著优于氯沙坦，并且主要是通过降低血肌酐浓度来实现的。
       1982年Viberti在研究糖尿病性肾病时，首先提出了微量白蛋白尿的概念，是比较敏感的早期发现肾损伤的指标。本研究MA水平模型组7，14，21 d逐渐升高，28 d稍有降低，说明UUO模型大鼠随着梗阻时间延长，肾小管逐渐出现萎缩、变性及坏死，进而肾小管功能持续下降，梗阻后期对侧肾脏代偿了患侧的部分功能，所以MA的排出减少。而NAG和β2-MG亦是肾小管功能不全的标记物，本研究中β2-MG模型组持续升高;NAG模型组7 d，14 d持续升高，21 d反而下降，28 d时再次升高，表明模型组大鼠肾小管功能与梗阻时间成反比，后期随着健侧代偿，肾功能的损坏减缓。
       本实验显示抗纤灵组各时间点的MA、β2-MG、NAG水平均显著低于模型组(P<0.01)，表明抗纤灵冲剂可有效对抗梗阻肾脏肾小管间质纤维化及肾小管变性坏死引起的肾小管功能下降。抗纤灵组与氯沙坦组比较，只有7 dMA及14 dβ2-MG水平有统计学意义，表明UUO肾脏梗阻之初，对侧健肾尚未出现代偿时，抗纤灵冲剂通过活血祛瘀通络的肾保护作用，优于氯沙坦通过阻断RAS系统舒张血管引起的肾保护作用。
       本研究结果表明，经抗纤灵冲剂治疗,UUO模型大鼠血Scr、BUN及尿MA、β2-MG、NAG均显著降低，肾小管间质病变导致肾功能受损主要与下列因素有关：①肾间质的急慢性炎症，可引起肾间质的纤维化，后者可使小管间毛细血管变窄，使血管阻力增加，引起肾小球血流量的下降，肾小球滤过率降低，肾功能受损。②肾小管的病变往往导致肾小管的萎缩，必然损伤肾小管的功能，通过球管反馈机制影响肾小球的功能。已有资料证明肾小管间质病变与GFR间有高度的相关性。③肾小管间质病变，尤其是肾细胞外基质的堆积、间质纤维化可直接引起肾小球硬化或纤维化新月体的病变。④很多细胞因子、炎性介质在引起小管间质损害的同时也影响肾小球，损害小球的系膜、基底膜、血管内膜等结构，久之影响肾功能。推测抗纤灵冲剂可能是通过舒张血管、调节管球反馈、改善肾小管间质纤维化及影响细胞因子、炎症介质的合成与分泌等多途径、多靶点地保护肾功能的。
       【参考文献】
         　[1]Coresh J，Selvin E，Stevens LA，et al.Prevalence of chronic kidney diseases in the United States[J]. JAMA，2007，298：2038.
       
       [2]Zhang L，Zhang P，Wang F，et al.Prevalence and factors associated with chronic kidney disease：a population study from Beijing[J]. Am J Kidney Dis，2008，51：373.
       
       [3]陈楠.肾小管间质疾病诊疗新技术[M].北京：人民军医出版社，2002：267.
       
       [4]沈庆法.中医肾脏病学[M].上海：上海中医药大学出版社，2007：514.
       
       [5]Klahr S， Morrissey JJ. Obstructive nephropathy and renal fibrosis[J]. Am J Physiol Renal Physiol， 2002， 283：F861.
       
       [6]王刚，陈以平，邹燕勤.现代中医肾脏病[M].北京：人民卫生出版社，2003：1057.
       
       [7]王永钧，张敏鸥.痰瘀互结与肾内微型瘕积[J].中国中西医结合肾病杂志，2003，4(1)： 1.
       
       [8]Wang Y，He LQ，Zheng PD.Effect of resisting-fibrosis agent on renal fibrosis and renal function of patients in chronic renal failure[J]. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Shen Bing Za Zhi， 2002，3(7)：396.
       
       [9]孙瑞芳，刘立新. 丹参及其单体治疗肝纤维化的研究进展[J].中国药物与临床，2009，9(2)：88.
       
       [10]林琼真，于洁，邓英辉，等.丹参注射液对大鼠梗阻性肾间质纤维化的保护作用[J].中国中西医结合肾病杂志，2003，4(2)：71.
       
       [11]王晓玲，王俭勤，夏延龄，等.大黄素对人肾成纤维细胞抑制作用的研究[J].中国中西医结合肾病杂志，2002，3(11)：629.