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       【摘要】 
       目的考察莪术对四氯化碳(CCl4)所致大鼠急性肝损伤的保护作用。方法将40只Wistar大鼠随机分为4组，即正常对照组，模型对照组，联苯双酯组及莪术给药组，分别灌胃等容积(15 ml/kg)的生理盐水，联苯双酯(13 mg/ml)和莪术溶液(6.3 mg/ ml)，连续7 d，1次/d。末次给药后，除正常组外其他各组腹腔注射CCl4(2 ml/kg)原液1次，造成大鼠急性肝损伤模型，检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、考马斯亮蓝蛋白、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果与模型组比较，莪术给药组ALT、AST及MDA含量均明显降低(P<0.01)，SOD活性明显升高(P<0.01);莪术给药组与联苯双酯组比较，AST、ALT及MDA、SOD水平无显著差异(P>0.05)。结论中药莪术对CCl4所致大鼠急性肝损伤具有保护作用。
       【关键词】  莪术;肝损伤;四氯化碳
       Abstract：ObjectiveTo observe the effect of Rhizome curcuma on acute liver injury induced by CCl4 in rats.Methods40 Wistar rats were randomly divided into four groups:the normal control group, the model control group, the Rhizome Curcuma group and the bifendate group. They were administered with NS, Rhizome Curcuma (6.3 mg/ml) and bifendate (13 mg/ml) at the equal volume(15 ml/kg) once daily for seven days. After the last administration, all groups except the normal group were injected with CCl4(2 ml/kg) stock solution to induce acute hepatic injury model. Five biochemical indexes were detected, including ALT, AST, PROTEIN, MDA and SOD.ResultsCompared with the model group, the contents of ALT, AST, PROTEIN and MDA were remarkably decreased (P<0.01) , the activity of SOD was remarkably improved (P<0.01). The contents of AST, ALT and MDA, SOD in the Rhizome Curcuma group were similar to those in bifendate group (P>0.05).ConclusionRhizome Curcuma has protective effects on acute hepatic injury of rats induced by CCl4.
       Key words：Rhizome Curcuma;Hepatic injury;CCl4
       莪术为姜科姜黄属植物蓬莪术Curcuma phaeocaulis Valeton、广西莪术Curcuma kwangsinensis S.G.Lee et C.F.Liang和温莪术Curcuma wenyujin Y.H.Chen etC.Ling的干燥根茎[1]。中医理论认为莪术辛、苦、温，归肝、脾经，具行气破血、消积止痛的功效，主要成分为挥发油和姜黄素两大类成分，挥发油中所含β-榄香烯、吉马酮、莪术二酮、莪术酮等成分且具有较强的生理活性，在抗肿瘤、抗菌、抗病毒等方面有较好的作用，且有保肝利胆的功能[2]。近年研究发现中药莪术可作用于HSCT6细胞，使基因TMP2、L-6、TGF-β1、P450α表达下调，从基因水平解释莪术具有抗肝损伤作用[3，4]，但对于CCl4所致大鼠急性肝损伤的保护作用暂无报道。本文研究了莪术对CCl4造成的大鼠急性肝损伤的保护作用, 以探讨其作用机制，为临床应用莪术治疗肝损伤提供实验数据。
       1材料与方法
       1.1动物健康Wistar大鼠，体质量(180±20)g ，雌雄随机。由佳木斯大学动物实验中心提供。
       1.2材料与仪器莪术购自哈尔滨市世一堂药材公司, 药典标注人体用药量为6~9g，按大鼠体表面积计算：945 mg生药量/kg。将过筛后的莪术粉末用0.9%NacL配置成6.3 mg/ml莪术混悬溶液。联苯双酯滴丸(BPD) ：浙江万邦药业限公司，批号090509。ALT测定试剂盒，批号20091106;AST测定试剂盒，批号20091115;SOD测定试剂盒，批号20091107;MDA 测定试剂盒，批号20091118;考马斯亮蓝测定试剂盒，批号20091109，均购自南京建成生物工程研究所。
       1.3仪器BT815A型半自动生化分析仪(上海三科仪器有限公司);723可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司);80- 2B离心机(湖南星科科学仪器有限公司);HH-2电子恒温水浴锅(苏州威尔实验用品有限公司);FA20004电子分析天平(上海恒平科学仪器有限公司)。
       1.4动物分组与处理大鼠40只，称重，随机分为4组，即正常对照组、联苯双酯组、模型对照组和莪术给药组，每组10只。正常对照组和模型对照组每日灌胃15 ml/kg生理盐水;联苯双酯组，根据成人用量以K折算系数法[5]换算确定灌胃15 ml/kg的联苯双酯溶液，质量浓度为13 mg/ml，给药剂量为200 mg/kg;莪术给药组，按15 ml/kg莪术溶液灌胃，1次/d，连续7 d。末次给药后，除正常对照组外，其余均按2 ml/kg腹腔注射CCl4 原液1次，建立急性肝损伤模型，给药量由实验确定，为文献报道[6]的2倍。禁食24 h后，称体质量，乙醚麻醉大鼠，腹腔肝门静脉取血，3 500 r/min离心10 min分离血清，待测;取肝组织作病理学指标检测。
       1.5数据处理方法数据处理源程序采用MATLAB7.0.1编写。实验数据均采用±s表示，组间比较采用t检验，各组间数据比较采用方差分析， P<0.05有显著性差异。
       2结果
       2.1对CCl4肝损伤大鼠血清ALT和AST活性的影响正常对照组血清ALT，AST水平明显低于模型对照组(P<0.01)，说明肝损伤模型造模成功。与模型组比较，联苯双酯组与莪术药材组ALT、AST水平均显著降低(P<0.01)，与正常对照组比较，联苯双酯组与莪术药材组ALT、AST水平无显著性改变(P>0.05)，联苯双酯组与莪术药材组ALT、AST水平无显著性差异，且在AST水平上莪术给药组低于联苯双酯组。实验结果表明，莪术有降低肝损伤大鼠血清酶ALT、AST水平的作用，对CCl4 肝损伤大鼠肝脏有保护作用;实验中此剂量莪术保护肝损伤的效果强于联苯双酯。结果见表1。表1莪术药材对CCl4肝损伤大鼠血清ALT和AST活性的比较
       2.2莪术对大鼠肝组织考马斯亮蓝蛋白含量、超氧化物歧化酶( SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的影响 模型组与正常组比较，肝组织匀浆考马斯亮蓝蛋白含量、SOD明显降低，MDA水平明显升高;与模型组比较，联苯双酯组和莪术药材组SOD升高与MDA水平降低，有显著差异(P<0.01)。实验结果表明，药物莪术药材组能对肝脏产生保护作用，减轻四氯化碳对大鼠肝脏的损伤;可以降低肝组织蛋白含量，抑制脂质过氧化反应MDA水平，提高抗过氧化酶SOD活性的功能。结果见表2。表2莪术药材对大鼠肝组织SOD活性和MDA含量的影响
       2.3动物肝组织病理学检查镜下可见：正常组大鼠的肝小叶结构完整，肝细胞索结构清晰可辨,核膜清晰、核大而圆;模型组动物肝细胞大片坏死，肝组织充血、肝细胞坏死，肝小叶结构被破坏，炎症细胞浸润较明显。莪术药材组大鼠的肝组织损伤明显减轻，肝小叶结构较清晰，肝组织轻微变性，肝细胞有再生现象。联苯双酯组大鼠肝损伤基本恢复，肝小叶病变不明显，结构清晰，肝细胞再生明显。
       3结论
       CCl4所致肝细胞损伤的主要机制是CCl4在体内的活性代谢作用和直接的膜溶解作用。CCl4进入体内后，在肝细胞内质网中经细胞色素P450α依赖性混合功能氧化酶的代谢，生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基。这些自由基可与细胞内和细胞膜的大分子共价结合，使酶的功能丧失，细胞膜脂质过氧化，胞浆Ca2+ 浓度升高，导致肝细胞损伤。在活体动物上应用CCl4 复制急性肝损伤模型是一个经典方法[7，8]。中医理论认为莪术归肝、脾经，具行气破血、消积止痛的功效，其主要成分具有较强的生理活性，可作用于HSCT6细胞，使基因P450α表达下调。研究结果表明：中药莪术明显地降低大鼠血清AST和ALT，稳定肝细胞膜，促进实验性急性肝损伤大鼠血清ALT、AST恢复的作用;具有清除自由基，抑制脂质过氧化，提升肝组织中蛋白含量，抑制肝组织MDA 的升高,阻止SOD的损耗，提高SOD活性，与避免肝细胞的损害呈明显的量效关系，可作为护肝药物。本研究为莪术临床用药提供了实验依据。
       【参考文献】
         　[1]国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005: 230.
       
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       [3]聂广,江远，李泽松，等.4种莪术有效成分对肝星状细胞T6基因表达的影响[J].中国中西医结合急救杂志,2005,12(3):135.
       
       [4]陈斌,孙克伟,谢凤英,等.莪术治疗慢性肝损伤时的肝毒性作用研究[J]. 中西医结合肝病杂志, 2003,13(1) : 20.
       
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       [7]Nagoev BS. LPO and free - radical oxiation parameters inpatients with acute viral hepatitis[J]. Bull Exp BiolMed，2002，134(6) ：557.
       
       [8]刘建文.药理实验方法学-新技术与新方法，第2版[M].北京:化学工业出版社,2008：206.