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       【摘要】 
       目的观察苦参碱微乳制剂对小鼠四氯化碳(CCl4)肝损伤模型的保护作用。方法采用CCl4造成小鼠急性肝损伤模型，预防性经皮肤给苦参碱微乳制剂高、中、低剂量(200,100，50 mg/kg)和灌胃给苦参碱水溶液(200 mg/kg)，测定血清丙氨酸转移酶(ALT)，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。结果与CCl4组相比，微乳高、中剂量和苦参碱口服水溶液组，ALT均显著降低，微乳高剂量和苦参碱口服水溶液组，AST均显著降低，苦参碱微乳制剂组ALT，AST水平与苦参碱口服水溶液组间无显著差异。结论苦参碱微乳制剂对小鼠急性CCl4肝损伤有降转氨酶作用，具有一定的新药开发前景。
       【关键词】  苦参碱;微乳;经皮给药;CCl4肝损伤
       Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effects of matrine microemulsion on mouse model of liver injury induced by carbon tetrachloride.　MethodsThe mouse model of liver injury was induced by CCl4. The matrine microemulsion by transdermal delivery in high, medium and low-dose (200, 100, 50 mg/kg),and water solution of matrine by oral administration(gavage control 200 mg/kg), and the activities of alanine transferase (ALT) and aspartate amino transferase (AST) in serum were determined.ResultsCompared with CCl4 group, ALT was significantly decrcased in the groups of high and medium doses of the matrine microemulsion and the group of water solution of matrine, and the AST was significantly reduced in the group of high doses of the matrine microemulsion and the group of water solution of matrine. The ALT and AST levels were no significantly different between the two groups of matrine microemulsion and water solution of matrine.ConclusionMatrine microemulsion plays a role in prevention of acute CCl4 liver injury in mice with reduced transaminase. Matrine microemulsion has a certain prospect in new drug development.
       Key words：Matrine;Microemulsion;Transdermal delivery;CCl4 liver injury
       苦参碱是豆科槐属植物苦参Sophora flavescens Ait的主要有效成分，具有抗炎、抗病毒、抗肝纤维化 、保肝降酶、抗癌及升高白细胞、抗心律失常等作用。目前临床上使用的苦参碱制剂主要有注射剂和口服制剂，在治疗慢性乙型肝炎方面取得了一定的效果。但是，苦参碱注射剂在体内消除快，半衰期短，血药浓度不能持久稳定;口服制剂药物半衰期短，血药浓度起伏大，生物利用度低[1]。本课题组研制的苦参碱经皮吸收微乳经兔体内药代动力学试验表明，微乳中的苦参碱以零级动力学透过皮肤进入血液，从而使血药浓度持久稳定，并且比口服制剂的生物利用度高，便于合理用药。已有报道苦参碱对CCl4所致肝损伤动物模型有肝细胞保护作用，而苦参碱微乳制剂保护肝损伤作用的实验研究尚未见报道。本实验通过观测苦参碱微乳制剂与苦参碱口服制剂对小鼠CCl4肝损伤模型的影响，探讨苦参碱微乳制剂透皮给药对小鼠CCl4肝损伤的保护作用，并比较苦参碱微乳制剂与口服制剂的药效学差异。
       1材料与仪器
       1.1药品与试剂O/W型苦参碱微乳(自制，批号20090918);苦参碱(陕西昂盛生物医药科技有限公司，纯度98.4%，批号： 20080225);四氯化碳(上海志锦化工有限公司提供，批号：20090109，使用时将其配成0.1%的植物油稀释液);植物油(市场购入); AST、ALT试剂盒(由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供，批号分别为：110708015和110308029)。
       1.2动物昆明种小鼠，雌雄各半，SPF级，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号：SYXK(鲁)20050055。动物饲养于普通级环境，室温19～26℃，湿度40%～70%，日温差≤4℃，换气次数10～20次/h，昼夜明暗交替时间12 h/12 h。饲料由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。
       1.3仪器
       JY2001型电子天平,上海精密科学仪器有限公司生产;BS300型全自动生化分析仪：由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供;AY220型电子分析天平：由日本岛津公司生产提供。
       2方法
       昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组：正常对照组，模型组，苦参碱微乳制剂高、中、低组及苦参碱口服阳性对照组。正常组、模型组及苦参碱口服阳性对照组分别给予0.9%生理盐水(NS)、NS、苦参碱(200 mg/kg)灌胃，给药体积为0.2 ml/10 g，苦参碱微乳高、中、低组分别予200，100，50 mg/kg经皮给药，各组动物连续给药14 d。CCl4损伤模型按照文献法制备[2]。各组动物给药14 d后，除正常对照组的小鼠外，各组小鼠按10 ml/kg体重，腹腔注射0.1%的四氯化碳稀释液，16 h后取血测定小鼠血清中ALT、AST含量。实验数据以±s表示，用spss11.5统计软件进行分析，各组差异用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
       3结果
       与正常对照组相比较，模型组小鼠血清中ALT、AST含量明显升高，具有显著性差异;与模型组相比，苦参碱微乳制剂高、中剂量组及苦参碱口服制剂小鼠血清中ALT含量降低，苦参碱微乳制剂高剂量组及苦参碱口服制剂小鼠血清中AST含量降低，均具有显著性差异;苦参碱微乳制剂低剂量组(50 mg/kg)具有降低血清中ALT含量的趋势(P=0.056)。苦参碱口服制剂与微乳制剂间无统计学差异。结果见表1。　　表1苦参碱微乳制剂对CCl4致小鼠急性肝损伤模型的影响
       4讨论
       本实验采用CCl4肝损伤模型，观察苦参碱微乳制剂对肝损伤的保护作用。CCl4所致肝损伤主要是经肝微粒体细胞色素P450激活生成自由基，攻击肝细胞膜上磷脂分子，损伤肝细胞膜结构与功能的完整性，从而使胞浆内可渗性酶如ALT、AST等渗入血中，血清ALT、AST活性明显升高。本研究中模型组ALT、AST活性明显升高，说明造模成功。实验中预防应用苦参碱微乳高、中剂量制剂及口服制剂血清ALT活性降低，并与模型组相比有显著性差异;预防应用苦参碱微乳高剂量制剂及口服制剂血清AST活性降低，并与模型组相比有显著性差异，表明苦参碱微乳制剂及口服粉末具有良好的保肝降酶作用，该研究与文献研究相一致[3];认为其保护肝细胞的作用可能与其清除自由基、钙拮抗作用、诱导肝细胞线粒体药物代谢酶、增加肝脏血液循环、促进肝再生等作用有关[4，5]。
       本研究表明，苦参碱微乳制剂中剂量组及高剂量组对肝转氨酶具有降低作用，这对保护肝脏免受损伤，具有十分重要的意义。本研究显示苦参碱微乳制剂保护肝细胞降酶的作用虽然与口服粉末给药方式在统计学上无显著性差异性影响，但在统计过程中，苦参碱微乳制剂高、中剂量组较苦参碱粉末口服有一定的降低趋势。同时本课题组前期小鼠体内药代动力学实验表明，本课题组所研发的苦参碱经皮吸收微乳制剂，具有避免肝脏首过效应和其它生理因素的影响，其绝对生物利用度高于苦参碱口服给药和腹腔注射给药的生物利用度，并且以零级动力学透过皮肤进入血液，使血药浓度稳定而持久，从而减少给药次数，有利于合理用药。另外，苦参碱微乳制剂具有应用方便的优点，而且还可以根据治疗的需要，及时移去给药系统，大大降低毒副作用。从药效学、药动学及临床应用的角度看，苦参碱微乳透皮给药是一种保肝治疗的优选制剂，显示出具有良好的新药开发前景。
       【参考文献】
         　[1]Man FL，Cheng Y. Progress of study on pharmacokinetics of Matrine for many preparation[J].Chinese Traditional Patent Medicine, 2004，26(5)：420.
       
       [2]徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2002:1346.
       
       [3]张明华，李灵芝，陈虹，等.苦参碱和氧化苦参碱对CCl4肝损伤小鼠转氨酶的影响[J].武警医学院学报，2002，2:74.
       
       [4]余淑霞，昊碌，杨卫东.苦参碱对BALB/c免疫性肝损伤小鼠的保护作用[J].宁夏医科大学学报，2009，31(1)：11.
       
       [5]陈立波，郝六平，王宏，等.注射用盐酸苦参碱对卡介苗加脂多糖致小鼠免疫性肝损伤的保护作用[J].现代预防医学，2008，35(21):4305.