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       【摘要】 
       目的研究枳实中的多甲氧基黄酮类化合物。方法对枳实95%乙醇提取物的醋酸乙酯部分和正丁醇部分进行色谱分离，通过核磁共振和质谱分析鉴定其化合物的结构。结果从枳实中分离鉴定出4个多甲氧基黄酮类化学成分，分别为桔皮晶 (Tangeretin，Ⅰ)，蜜桔黄素 (Nobiletin ，Ⅱ)，4", 5, 7, 8-四甲氧基黄酮(4",5,7,8-Tetramethoxyflavone，Ⅲ)，5-降甲基蜜桔黄素( 5-Demethylnobiletin，Ⅳ)。结论Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ化合物均为首次从枳实中分离得到。
       【关键词】  枳实;多甲氧基黄酮;化学成分
       Abstract：ObjectiveTo investigate the chemical constituents of Fructus Aurantii Immaturus.MethodsThe constituents of the EtOAc-solube portion and normal butanol solube portion in the 95% ethanol extract were isolated and purified by means of chromatography.Compounds were identified by 1H-NMR, 13C-NMR and MS.Results Four polymethoxylated flavonoids were isolated and identified as Tangeretin (Ⅰ), Nobiletin (Ⅱ), 4", 5, 7, 8-Tetramethoxyflavone (Ⅲ) and 5-Demethylnobiletin (Ⅳ).ConclusionCompoundsⅠ-Ⅳ were isolated from Fructus Aurantii Immaturus for the first time.
       Key words： Fructus Aurantii Immaturus;Polymethoxylated flavonoids;Chemical constituents
       枳实Fructus Aurantii Immaturus是芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinesis Osbeck的干燥幼果，具有破气消积、化痰散痞的作用，用于治疗积滞内停、痞满胀痛、泻痢后重、大便不通、结胸、胃下垂、脱肛、子宫脱垂等症[1]，主要含挥发油、生物碱(辛弗林、N-甲基酪胺)、黄酮类化合物、维生素C及维生素D等成分[2]。黄酮类化合物是枳实中的主要有效活性成分，此前的研究多集中在枳实中含有的芸香柚皮苷与柚皮苷、橙皮苷与新橙皮苷等黄酮苷类化合物中[3~7]，而对多甲氧基类黄酮化合物(PMFs)的研究较少。近年来有关PMFs抗癌的研究取得了很大进展[8～11]，由于PMFs对多种癌细胞有较强的抑制作用，受到国内外的广泛关注。国内外对多甲氧基黄酮类成分的抗癌活性报道越来越多，提示这类成分具有潜在的新药开发价值。为进一步开发利用枳实中的多甲氧基黄酮类成分，作者利用现代色谱和波谱技术对其所含有的此类黄酮进行了分离纯化和结构鉴定，从中得到了4个PMFs类活性成分，分别鉴定为桔皮晶 (Tangeretin，Ⅰ)，蜜桔黄素 (Nobiletin，Ⅱ)，4"，5，7，8-四甲氧基黄酮(4"，5，7，8-Tetramethoxyflavone， Tetramethyl-O -isoscutellarein， Ⅲ)，5-降甲基蜜桔黄素( 5-Demethylnobiletin， Ⅳ)。
       1仪器与材料
       1.1仪器与试剂X-4 数字显示显微熔点测定仪 (温度计未校正);Nicolet NEXUS-470 型红外光谱仪(溴化钾压片);Bruker 500 AVANCE Ⅲ 型核磁共振仪，内标为TMS (实验所测 1H-NMR和13C-NMR 分别为500，125 MHz);Thermo LCQ FLEET 型电喷雾质谱仪(ESI-MS);柱色谱用硅胶 (青岛海洋化工厂);Sephadex LH-20 (Pharmaeia 公司);GF254高效薄层板 (烟台汇友硅胶开发有限公司)。其余试剂均为分析纯。
       1.2材料枳实，由杭州惠松医药公司提供。
       2方法与结果
       2.1提取与分离将枳实10 kg机械粉碎后，用95%的乙醇水溶液回流提取3次，减压蒸馏回收溶剂后得到浸膏1.5 kg，上述浸膏加入2.5 L水，成悬浮液，分别用醋酸乙酯，正丁醇萃取，减压蒸馏回收溶剂，得到醋酸乙酯部分浸膏335 g，正丁醇部分浸膏847g。醋酸乙酯部分浸膏经多次硅胶柱层析，Sephadex LH-20纯化得到化合物桔皮晶(Ⅰ)，蜜桔黄素(Ⅱ)，4", 5, 7, 8-四甲氧基黄酮(Ⅲ)和5-降甲基蜜桔黄素(Ⅳ)。
       2.2结构鉴定分离所得的化合物结构见图1。
       2.2.1化合物Ⅰ淡黄色针状结晶， mp. 153~154℃。 ESI-MS m/z：373 [M+H]+;IR (KBr) cm-1：2 948， 2 842， 1 651，1 588，1 512， 1 462， 1 362， 1 265，1 111， 1 075， 1 016，828;1H-NMR (DMSO-d6) δ：7.89 (2H， dd，J=9.0，2.0 Hz， H-2"，6")， 7.03 (2H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-3"，5")，6.64 (1H，s，H-3)，4.11，4.03，3.97，3.95，3.89，(each 3H，s，5×OCH3);13C-NMR (DMSO-d6) δ：161.1 (C-2)，106.4 (C-3)，177.3 (C-4)，148.2 (C-5)，143.9 (C-6)，151.2 (C-7)，138.9 (C-8)，147.6 (C-9)，114.6 (C-10)，123.6 (C-1")，127.6 (C-2"，6")，114.3 (C-3?，5?)，162.1 (C-4")，62.1，61.9，61.6，61.5，55.3 (5×OCH3)。以上数据与文献 [11] 报道的桔皮晶数据基本一致，故该化合物鉴定为桔皮晶(Tangeretin) 。见图1。
       2.2.2化合物Ⅱ淡黄色针状结晶，mp. 137~138℃。ESI-MS m/z：403[M+H]+ ，425[M+Na]+;IR (KBr) cm-1：2 944，2 840，1 588，1 514，1 462，1 365，1 267，1 016，830;1H-NMR (DMSO-d6) δ：7.59(1H，d，J=8.0 Hz，H-6")，7.49(1H，s，H-2’)，7.10(1H，d，J=8.0 Hz，H-5’)，6.80 (1H，s，H-3)，4.02，3.97，3.87，3.78(each 3H，s， 4×OCH3)，3.84(6H，s，2×OCH3);13C-NMR (DMSO-d6)δ：161.3 (C-2)，107.3 (C-3)，176.9 (C-4)，148.6 (C-5)，144.6 (C-6)，152.0 (C-7)，138.7 (C-8)，148.2 (C-9)，115.3 (C-10)，124.2 (C-1’)，109.4 (C-2’)，150.0 (C-3’)，152.2 (C-4’)，112.2 (C-5’)，119.8 (C-6’)，62.3，62.2，62.0，61.9，56.2，56.1 (6×OCH3)。以上数据与文献[11]报道的蜜桔黄素数据基本一致，故该化合物鉴定为蜜桔黄素(Nobiletin) 。见图1。
       2.2.3化合物 Ⅲ淡黄色针状结晶，mp. 166 167℃。ESI-MS m/z： 343[M+H]+，365 [M+Na]+;1H-NMR (CDCl3)δ：7.97 (2H，dd，J=7.0，2.0 Hz，H-2’，6’)，7.12 (2H，dd，J=7.0，2.0 Hz，H-3’，5’)，6.68(1H，s，H-8)，6.67(1H，s，H-3)，3.98，3.88，3.85，3.84(each 3H，s，4×OCH3); 13C-NMR (CDCl3)δ：：163.2(C-2)，107.7(C-3)，177.2(C-4)，157.0(C-5)，131.3(C-6)，157.7(C-7)，95.1(C-8)，152.4(C-9)，109.4(C-10)，124.6(C-1’)，128.9(C-2’，6’)，116.0(C-3’，5’)，160.9 (C-4’)，62.4，57.7，57.6，56.9(4×OCH3)。以上数据与文献[12]报道的Tetramethyl-O-isoscutellarein数据基本一致，故化合物Ⅲ鉴定为4"，5，7，8-四甲氧基黄酮(Tetramethyl-O-isoscutellarein) 。见图1。
       2.2.4化合物 Ⅳ淡黄色针状晶体，mp. 145~146℃。ESI-MS m/z： 389[M+H]+，411[M+Na]+;IR (KBr) cm-1：2 940，1 650，1 514，1 483，1 374，1 145，1 023，835;1H-NMR (DMSO-d6)δ ：7.62(1H，d，J=8.0 Hz，H-6’)，7.49(1H，s，H-2’)，7.09(1H，d，J=8.0Hz，H-5’)，6.96(1H，s，H-3)， 4.02，3.91，3.89，3.85，3.81(each 3H，s，5×OCH3);13C-NMR (DMSO-d6)δ：163.9(C-2)，103.9 (C-3)，183.0(C-4)，149.0(C-5)，136.2(C-6)，152.7(C-7)，133.0(C-8)，145.6(C-9)，106.6(C-10)，123.1(C-1’)，109.5(C-2’)，149.4(C-3’)，152.9(C-4’)，112.1(C-5’)，120.3(C-6’)，62.2，62.0，60.9，56.1，56.0(5×OCH3)。以上数据与文献[11]报道的5-降甲基蜜桔黄素数据基本一致，故该化合物鉴定为5-降甲基蜜桔黄素(5-Demethylnobiletin) 。见图1。图1化合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ和Ⅳ的结构式
       3结论
       从中药枳实中分离得到了4 个多甲氧基黄酮类化学成分，分别为桔皮晶 (Tangeretin，Ⅰ)，蜜桔黄素 (Nobiletin，Ⅱ)，4",5,7,8-四甲氧基黄酮(4",5,7,8-Tetramethoxyflavone，Ⅲ)和5-降甲基蜜桔黄素(5-Demethylnobiletin，Ⅳ)。所有化合物均为首次从该中药中分离得到。
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