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       【摘要】 
       目的研究黄连解毒汤对自发性高血压大鼠(SHR)血压及纤溶系统改变，探讨SHR是否存在血栓前状态及黄连解毒汤的治疗作用。方法雄性自发性高血压大鼠(SHR)24只随机分为黄连解毒汤组、卡托普利组、模型组，治疗6周，分别检测治疗前后的血压变化，酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、组织型纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、血管性假血友病因子(vWF)变化，并设Wistar-kyoto(WKY)大鼠8只做空白对照。结果模型组血浆PAI-1增高，t-PA下降，vWF上升，黄连解毒汤组治疗后可以明显降低SHR血压，降低血浆vWF，但与模型组相比不能使PAI-1降低，t-PA升高。结论SHR存在血栓前状态，黄连解毒汤能降低SHR的血压，保护内皮，但不能改善SHR血浆t-PA和PAI-1的变化。
       【关键词】  高血压/中药;组织型纤溶酶原激活物;纤溶酶原激活物抑制物1;血管性假血友病因子;黄连解毒汤
       高血压病(EH)是当前最常见的心血管疾病之一，而其主要并发症脑卒中、心肌梗塞，严重危害人们的身体健康。高血压病的凝血、纤溶指标的异常与其血栓性并发症的发生、发展关系密切，在保持血压稳定的同时维持凝血、纤溶指标的平衡，有可能大幅度降低其并发症的发生率。血栓性事件是其严重威胁人类生命的常见并发症之一，这与EH患者体内存在着血栓前状态(PTS)密切相关[1]。PTS的发生机理十分复杂，它涉及到血管内皮功能损伤及纤溶系统等改变。现代药理研究表明，黄连解毒汤具有明显的抗炎、抗菌、抗内毒素、抗氧化、抗脑缺血、抗肿瘤、降血压、降血糖、降血脂、抑制脂肪细胞分化、抑制肝损害等作用。黄连解毒汤的应用几乎扩展到全身各个系统的病变中。本文以黄连解毒汤对SHR血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、组织型纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、血管性假血友病因子(vWF)变化及血压的影响，进一步探讨SHR是否存在血栓前状态，及黄连解毒汤的降压及保护内皮、改善凝血、纤溶作用。
       1材料与仪器
       1.1动物分组
       雄性SHR24只和同类正常血压大鼠WKY 8只，体质量200~250 g，12周龄，SHR购自北京维通利华实验动物技术有限公司[许可证号：SCXK(京) 2006～0009]。WKY组为空白对照，购自广西医科大学动物实验中心[合格证号：SCXK(桂)2006-0003]。SHR随机分为黄连解毒汤组、卡托普利组、模型组，每组8只。动物正常光照，食水自由摄取，室温控制在18~22℃之间。
       1.2试剂及仪器t-PA、PAI-1和vWF试剂盒，武汉中美科技有限公司生产。BP-6大鼠无创血压测试仪，成都泰盟科技有限公司生产;MK3酶标仪，美国Thermo生产;1575洗板机，美国BIO-RAD生产。
       2方法
       2.1药物干预黄连解毒汤由黄连、黄芩、黄柏、栀子按3∶2∶2∶3 比例组成。其药材均购于广西中医学院附属瑞康医院药剂科，专人负责质量标准，煎煮取汁，浓缩成清膏(1 g膏相当于1.5 g 黄连解毒汤生药)，蒸馏水稀释1倍后，黄连解毒汤组按20 ml/kg·d灌胃，卡托普利片购于广西中医学院附属瑞康医院，由山西亚宝药业集团股份公司生产，(国药准字H14020937)，按17.5 mg/kg·d日灌胃，模型组和正常对照组按20 ml/kg·d灌服蒸馏水。药物充分用蒸馏水混匀,于每上午9时灌胃给药，SHR对照组及WKY正常对照组每天同时用等容积蒸馏水灌胃，1次/d，连续给药6周。
       2.2血压测量分别于给药前及给药后1，2，4，6周，测量大鼠安静清醒状态下尾动脉收缩(SBP)。每只鼠测量SBP 3次，间隔60s，取其平均值为当日所测血压值。
       2.3样品采集与测定大鼠给药6周后，用2%戊巴比妥钠(45 mg/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉取血6 ml，按3 000 r/min离心10 min，用于t-PA和PAI-1水平检测。标本均置于-20℃冰箱保存待测。测定采用ELISA法，t-PA产品编号为E0525r，PAR-1产品编号为E0532r，vWF产品编号为E0833r，操作步骤均严格按试剂盒说明书进行。
       2.4统计学处理数据以±s表示，两组数据间的比较应用t检验(组内为配对t检验)，采用SPSS11.0统计软件分析处理数据，P<0.05为有显著性统计学差异。
       3结果
       3.1黄连解毒汤对SHR血压的影响12周龄SHR的血压为血压升高的较高阶段，治疗前各组SHR大鼠血压均显著高于WKY大鼠(P<0.01)，随着时间的推移，模型SHR组随着鼠龄的增长呈现血压进行性增高，而黄连解毒组和卡托普利组均能降低SHR血压增高的趋势。与治疗前比，黄连解毒用药1周后即有显著的降压作用(P<0.05)，用药2周后，黄连解毒组和卡托普利组均产生了极其显著的降压作用(P<0.01)。黄连解毒组用药4周后与空白对照组的血压无显著差异(P>0.05)，卡托普利组用药6周后与空白对照组的血压无显著差异(P>0.05)。见表1。
       3.2黄连解毒汤对vWF,t-PA和PAE-1的影响治疗前后各组大鼠vWF、t-PA和PAI-1的变化,与空白组比较，模型组t-PA降低，PAI-1增加，vWF增加，且均有统计学显著或非常显著差异(P<0.05或P<0.01)，表明SHR处于血栓前状态。与模型组比，黄连解毒和卡托普利对t-PA和PAI-1的影响不明显(P>0.05)，但均能降低vWF的水平(P<0.01)。见表2。
       4讨论
       黄连解毒汤首载于葛洪《肘后备急方》，但未给出方名，王焘《外台秘要》始冠以黄连解毒汤之名。本方由黄连、黄芩、黄柏、栀子4味中药按3∶2∶2∶3比例配伍组成，其中以黄连泻心火、兼泻中焦之火为君;黄芩清肺热、泻上焦之火为臣;黄柏泻下焦之火，栀子通泻三焦之火，导热下行，合为佐使，共收泻火解毒之功，无论内服、外用，均有良好的治疗作用。临床以原发性高血压病患者为观察对象(其中5例单独给予黄连解毒汤)，黄连解毒汤的剂量为5~7.5 g/d，用长时间携带式血压计评价用药前后的血压变化，结果表明该方有降低收缩压的效果[2]。黄连解毒汤及其配伍成分在心血管疾病的防治中起着越来越重要的作用，在临床上已用于高血压病[3]等心血管疾病的治疗。此外研究表明黄连解毒汤提取物能明显延长血浆凝血酶原时间、白陶土活化部分凝血活酶时间及凝血酶时间，并能显著抑制ADP引起的血小板聚集[4]。本研究表明，与治疗前比，黄连解毒组SHR在用药1周后即有显著的降压作用(P<0.05)，用药2周后，黄连解毒组产生了极其显著的降压作用(P<0.01)。黄连解毒组用药4周后与空白对照组的血压无显著差异(P>0.05)，其降压作用与临床研究结果一致。表1黄连解毒汤对SHR血压的影响表2黄连解毒汤对vWF,t-PA和PAE-1的影响血栓形成是在血管内皮细胞、凝血、抗凝、纤溶系统以及血液流变学等多种改变的综合作用下发生的，这些因素在血栓形成之前已经发生不同程度的变化。因此,通过检测有关的血液指标有可能判定PTS，这对及时发现、防止高血压所致的血栓栓塞性并发症具有重要的临床意义。PAI、t-PA亦来源于血管内皮组织,血管内皮损伤后，由内皮细胞释放。血管内皮受损导致一系列因子释放，血管内皮损伤是血栓形成的前提条件。同时，vWF是一种多聚糖蛋白，主要由上皮细胞合成且储存于weibel-palade小体中。上皮细胞正常时血浆vWF含量不多，当上皮细胞受损伤时释放入血增多，vWF与血小板糖蛋白GPIb以GPIb-vWF-微纤维形式或直接与胶原相互结合，故vWF可促进血小板的粘附与聚集，vWF是内皮细胞损伤及功能不全的标记物之一。血浆vWF升高，表明存在内皮功能障碍。升高的vWF与缺血性心脏病或脑卒中等心血管事件相关，并可预测心肌梗死患者的再梗死、以及EH患者中的靶器官损害，表明升高的vWF具有一定的预后意义[5]。
       正常情况下，t-PA及PAI处于动态平衡，PAI主要作用是灭活t-PA的活性。两者形成复合物，共同调节着纤溶酶原转变为纤溶酶。t-PA有高度纤维蛋白特异性，清除血管纤维蛋白沉积，不伴有全身性纤溶系统激活。t-PA、PAI-1是一对反映血管内皮细胞受损的和纤溶活性降低的分子标志物，其活性与心脑血管疾病PTS最为密切，两者功能平衡是防止血栓形成的重要条件。血管内皮结构和功能受损，t-PA和PAI-1合成与释放异常，使纤溶功能受损，是易于发生血栓栓塞性并发症的重要因素。EH患者纤溶功能异常可能与包括胰岛素抵抗在内的多种因素如体内儿茶酚胺、血管紧张素Ⅱ、血脂增高，促进内皮细胞及血小板释放t-PA，PAI-1增多;广泛血管内皮细胞损伤使t-PA合成、储存和释放减少;血管平滑肌增厚，合成PAI-1增加有关[6]。目前文献报道高血压病患者血浆纤溶功能多减低，PAI-1活性上升，t-PA活性下降[7]，本研究结果SHR模型组血浆中PAI-1增高，t-PA活性下降，vWF升高，说明SHR存在血栓前状态，存在内皮损伤，但黄连解毒汤治疗后可以降低SHR血压，保护血管内皮，血浆纤溶活性较模型对照组有增高的趋势，但无显著统计学意义。卡托普利组可以降低SHR血压，改善内皮，但亦不影响SHR血浆的纤溶活性，与郭倩玉[8]研究结果一致。
       总之，黄连解毒汤可以明显降低SHR的血压，保护血管内皮作用其原因仍需研究，但无改善SHR血浆纤溶活性的作用，其原因仍需研究，可能与药物剂量、灌胃治疗的时间长短等有关，是否改变局部组织的纤溶亦有待研究。
       【参考文献】
         　[1]Sechi LA, Aingaro L, Catena C, et al. Relationship of fibrinogen levels and hemostatic abnormalities with organ damage in hypertension[J]. Hypertension, 2000, 36(6): 978.
       
       [2]成味纯. 应用长时间携带式血压计评价黄连解毒汤的降压效果[J]. 国外医学·中医中药分册，1996，18(4)：32.
       
       [3]李运伦. 黄连解毒汤加减治疗高血压病30例临床研究[J]. 国医论坛，2000，15(2)：38.
       
       [4]付晓春，王敏伟. 黄连解毒汤的抗血栓作用研究[J]. 沈阳药科大学学报， 2001， 18(6)：425.
       
       [5]Spencer CGC, Gurney D, Blann AD, et al. von willebrand factor, soluble P-selectin, and target organ damage in hypertension: a substudy of the Anglo- Scandinavian cardiac outcome trial[J]. Hypertension, 2002, 40: 61.
       
       [6]张润峰，李霞. 高血压病与血栓前状态[J]. 高血压杂志，2004，12(1)：8.
       
       [7]Poli KA, Tofler GH, Larson MG, et al. Assiociation of blood pressure with fibrinolytic potential in the Framingham offspring population[J]. Circulation, 2000, 101: 264.
       
       [8]郭倩玉，王佩显，杜卫京，等. 卡托普利和氯沙坦对自发性高血压大鼠纤溶功能的影响[J]. 天津医药，2005，33(1)：33.