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       【摘要】 
       目的研究六味地黄生物制剂对果蝇的寿命和繁殖力的影响。方法经口饲喂果蝇不同浓度的六味地黄生物制剂 (浓度为0.1 %，0.3 %，0.9 %)，并以普通培养基为空白对照组，观察其对果蝇的寿命、繁殖力的影响。结果各浓度的含药组能不同程度地延长雌雄果蝇平均寿命，最高寿命和半数死亡期,增加果蝇子一代和子二代成虫数。结论六味地黄生物制剂具有良好的延缓果蝇衰老,提高果蝇生命活力的作用。
       【关键词】  六味地黄生物制剂;果蝇;寿命;繁殖力
       Abstract：ObjectiveTo study the effect of LW-PSB on life-span and productivity in Drosophila melanogaster.MethodsDifferent concentrations (0.1%,0.3%,0.9%) of LW-PSB were orally administered into Drosophila melanogaster. Normal nutrient medium was served as control group. In this paper, life span and productivity were assessed.ResultsLW-PSB of 0.1%,0.3%,0.9% concentrations could prolong average life, maximum life span and half death time of female and male Drosophila melanogaster and enhance productivity.ConclusionIt is concluded that LW-PSB has satisfactory effect in delaying aging of Drosophila melanogaster.
       Key words：LW-PSB ; Drosophila melanogaster;Life-span; Productivity
       衰老是生物体全身各组织、器官的退行性变化, 是多种变化综合的结果。中医对人体衰老的认识源远流长，肾虚衰老学说占有很重要的地位。“肾为先天之本”，肾虚是衰老的根本原因之一 。《素问·上古天真论》提到人体的发育是随着肾气的逐渐旺盛而成长, 继而又随着肾气的逐渐衰退而转为衰老, 最终死亡。现代衰老学说认为随年龄增加，内分泌系统合成、分泌、调节功能等都发生某些衰老性改变，这些因素促使机体整个内分泌系统功能的紊乱和减退，从而加速了机体衰老过程。其中神经—内分泌系统的影响尤为突出。神经内分泌说[1]认为下丘脑、垂体、肾上腺是调节衰老过程的主要场所,神经元及有关激素的功能下降,导致全身功能退行性变化。本实验室前期研究表明六味地黄生物制剂的抗衰老作用较传统的六味地黄汤更优。本实验以果蝇为研究对象，观察六味地黄生物制剂对果蝇的寿命和生殖内分泌的影响，探讨其抗衰老作用及其机制，为深入研究该制剂奠定了基础。
       1材料
       1.1器材与试剂恒温生化培养箱BOXUN SPX-250B-Z型(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)，果蝇培养瓶(50 ml三角瓶)，麻醉瓶等。白砂糖、琼脂、玉米粉、酵母粉(均为食品级);丙酸、乙醚(均为分析纯)。
       1.2动物美国野生型黑腹果蝇Drosophila melanogaster，购自华南农业大学生命科学院，温度为(25±1)℃ ，相对湿度为(60±5)% 环境中培养，每天给予12 h光照。
       2方法
       2.1六味地黄生物制剂的制备熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、牡丹皮、茯苓按处方的比例(8∶4∶4∶3∶3∶3) 配药。加8 倍量的水, 文火煎煮1. 5 h, 滤过。药渣再加6 倍量的水煎煮1. 5 h，滤过。合并滤液, 浓缩至0. 5 g/ml备用。按上述方法制备的六味地黄汤经自然发酵后, 按一定比例加入光合细菌即得。
       2.2培养基的制备
       2.2.1普通培养基制备水180 ml，白糖13 g，琼脂1.3 g，玉米粉17 g，酵母粉1.4 g，丙酸1 ml。
       2.2.2含药培养基制备分别取LW-PSB 0.1 g，0.3 g，0.9 g加入到100 g普通培养基中,得到浓度为0.1%，0.3%，0.9%的含药培养基。
       2.3果蝇寿命实验收集8 h内新羽化黑腹果蝇成虫，乙醚麻醉分雌雄;在普通培养基中饲养14 d后，随机分组试验。每组果蝇雌雄各200只，每瓶50只，每组4瓶。每4天更换新鲜培养基。实验开始后，每天定点观察，记录果蝇死亡数，直到各组果蝇全部死亡为止。全部果蝇生存天数的均数为平均寿命，最后死亡的15只果蝇生存天数的均数为最高寿命，前一半死亡的果蝇生存天数的均数为半数死亡期。统计各组果蝇半数死亡期，最高寿命和平均寿命。
       2.4繁殖力实验收集8 h内新羽化黑腹果蝇成虫，乙醚麻醉分雌雄，每组5瓶，每瓶雌雄果蝇5对。培养5 d后把亲本转出，而原来培养瓶继续培养，每天定点观察，各组从第1只成虫出现开始计数，并连续观察8 d，记录每组每 d羽化成虫的数量，统计各组子一代(F1)和子二代(F2)成虫数量。
       2.5统计方法采用SPSS13.5统计软件进行单因素方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义。
       3结果
       3.1六味地黄生物制剂对果蝇寿命的影响从表1可知，不同浓度的LW-PSB对果蝇的寿命均有不同程度的延长作用。LW-PSB各浓度组果蝇的半数死亡期、最高寿命和平均寿命均比空白对照组长，且有随着LW-PSB浓度增加而增加的趋势。 但雌雄受药有差异，雌性果蝇有效浓度为0.3%~0.9%，雄性果蝇有效浓度为0.1%~0.3%，雄性果蝇比雌性果蝇对LW-PSB的更敏感。表1六味地黄生物制剂对果蝇寿命的影响
       3.2六味地黄生物制剂对果蝇繁殖力影响表2六味地黄生物制剂对子一代(F1)成虫数的影响
       3.2.1六味地黄生物制剂对子一代(F1)成虫数的影响表2表明LW-PSB各组均能增加果蝇F1代成虫数量，且随浓度的增加(0.1%～0.9%)其产生的数量也增加，尤其是0.3%组和0.9%组与空白对照组比较有显著性增加(P<0.05或P<0.01)，其增殖率分别达到60.5%，81.8%，说明LW-PSB具有促进果蝇的繁殖能力，提高果蝇生育力和生命活力的作用。
       3.2.2六味地黄生物制剂对子二代(F2)成虫数的影响0.1%组，0.3%组能显著增加果蝇F2代成虫数量(P<0.05)，增值率分别达到49.0%，51.0%,且随着浓度的增加而增加。而0.9%组与空白对照组比较没有显著性差异(P>0.05),这可能是因为F2代比F1代对LW-PSB的敏感性增加，浓度为0.1%就能显著增加成虫数量，当浓度达到0.9%时，已经超过果蝇能耐受的有效浓度范围。0.1%组和0.3%组F2代成虫总数较F1代成虫总数有增加的趋势，但0.9%组F2代成虫总数较F1代成虫总数却减少了(见表3)。表3六味地黄生物制剂对子二代(F2)成虫数的影响
       4讨论
       六味地黄丸能滋阴补肾，用于肾阴亏损，头晕耳鸣，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精，消渴[2]。现代药理学研究表明六味地黄丸对雄性和雌性大鼠的生殖内分泌均具有调节作用，对雄性大鼠的垂体，精囊有增重作用，对雌性大鼠有雌激素样作用[3]。光合细菌是一种具有很高营养价值的古老菌体[4]，含有大量的蛋白质和氨基酸，还含有多种生物活性成分，胡萝卜素，泛醌，B族维生素以及 16 种人体必需氨基酸、叶酸、生物素、辅酶Q 等。 通过现代生物技术制成的六味地黄生物制剂是将六味地黄汤和光合细菌的功效结合在一起，既能发挥六味补肾益气抗衰老的作用，又含有光合细菌丰富的营养成分。
       本实验研究表明六味地黄生物制剂对雌雄果蝇的平均寿命，最高寿命和半数死亡期都有延长作用，尤其是0.3%组。但其对雌雄果蝇的有效剂量范围不同，雄性果蝇敏感性更强些，浓度为0.1%即可显示出延长寿命效果，而对雌性果蝇而言，浓度为0.3%才显示出效果。这种雌雄果蝇的性别差异，在其它动物间是否存在还有待进一步研究。另外，六味地黄生物制剂还能显著增加果蝇F1代和F2代成虫数量，且具有剂量依赖性，在两代间显示出不同的有效浓度，这可能是由于F2代比F1代对药物敏感性的增加，显示出相同效果时，所需的浓度就减小。综上所述，六味地黄生物制剂可以延长果蝇的寿命，延缓衰老，并能保护生殖内分泌，提高生育力和生命活力的作用。
       【参考文献】
         　[1]刘晶,邹伟,安利佳.从现代衰老学说谈地黄的抗衰老作用研究进展[J].辽宁中医杂志,2008,35(6):952.
       
       [2]国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:402.
       
       [3]张艳,刘西建.六味地黄丸的药理研究进展[J].国医论坛,2004,19(2):50.
       
       [4]刘如林,刁虎欣,梁凤来,等.光合细菌及其应用[M].北京:中国农业科技出版社,1991: 95.