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       【摘要】 
       目的观察赤雹根的镇痛作用并筛选其有效部位。方法采用小鼠48℃热板法和扭体法，观察赤雹根水提物、醇提物及醇提物的石油醚萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物及水溶性部分的镇痛作用。结果除石油醚萃取物以外，其余赤雹根各提取物均能明显延长热板试验小鼠痛反应潜伏期，减少ip酒石酸锑钾所致小鼠扭体次数,上述作用的主要有效部位之一为正丁醇萃取物中所含的总皂苷。结论赤雹根具有明显的镇痛作用,其所含总皂苷为其镇痛作用的主要有效部位之一。
       【关键词】  赤雹;总皂苷;镇痛
       Abstract：Objective To observe the analgesic effect and the effective fractions of the roots of Thladiantha dubia Bunge.MethodsThe analgesic effect of 2 extracts of the roots of Thladiantha dubia Bunge extracted by water and ethanol , 4 extracts of the ethanol extract by petroleumetter , chloroform, N-butanol and water were respectively evaluated by the hot plate test (48℃) and classical writhing test in mice.ResultsExcept the petroleumetter extract, the other extracts of the roots of Thladiantha dubia Bunge could markedly heighten the pain threshold value in 48℃hot-plate test and reduce the times of writhing induced by intraperitoneal injection of antimony potassium tartrate in mice.Total saponins was one of the most effective fractions of the N-butanol extract .ConclusionThe roots of Thladiantha dubia Bunge has marked analgesic effect ,and total saponins is one of the mosteffective fractions.
       Key words：Thladiantha dubia Bunge; Total saponins ; Analgesic effect
       赤雹(Thladiantha dubia Bunge, TDB)为葫芦科多年蔓生草本植物[1],主要分布于华北、东北、内蒙等地区,为满族民间长期沿用的药材，多为民间自种备用。赤雹根为赤雹的干燥成熟块根,味苦性寒，功能活血祛淤，清热解毒，且具通乳作用，主要用于瘰疬、痈肿及产后血淤、乳汁不通等症。但文献调研中鲜见其药理研究的报道，仅有报道赤雹根中含有赤雹苷A、B、C、D、E、F[2]，而近年的研究表明中药中的总皂苷成分具有广泛的镇痛作用[3]，同时相关的预试验表明赤雹根水提物、醇提物具有一定的镇痛作用，且醇提物中正丁醇萃取部分的镇痛作用较强。为进一步全面开发应用此药，本文从镇痛作用方面研究了赤雹根水提物、醇提物及醇提物的石油醚萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物及水溶性部分的药理活性,并通过大孔吸附树脂对正丁醇萃取物进行了纯化处理，试图初步探明其镇痛作用的有效部位。
       1材料
       热板仪(山东医学科学院,YLS-6B) 。干燥赤雹根,采自青龙满族自治县，药材经承德医学院中药研究所赵春颖副研究员鉴定为葫芦科草本植物赤雹的干燥成熟块根;吗啡(东北第六制药厂生产,批号950509);酒石酸锑钾(杭州临安金龙化工有限公司);95 %乙醇(石家庄新宇三阳实业有限公司)。昆明种小鼠,河北医科大学实验动物中心提供,许可证号:SCXK(冀)2008-1-003。
       2方法
       2.1赤雹根各提取物的制备 取赤雹根100 g,加8倍水浸泡12 h, 煎煮2次,40 min/次,合并药液,过滤,减压浓缩至0.4 g生药/ml的赤雹根水提物备用; 取赤雹根100 g,加8倍70%乙醇浸泡12 h, 80℃回流提取2次,1 h/次，合并药液,过滤,减压浓缩，再置80℃烘箱中烘干得干燥粉末，制成0.4 g生药/ml的赤雹根醇提物备用; 取上述赤雹根醇提物干粉适量，加水制成水溶液，依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物及水溶性部分，将各部分减压浓缩干燥得各部分萃取物干粉。以生药量计算制成0.4 g生药/ml的药液备用，其中正丁醇萃取物干粉又经AB-8大孔吸附树脂吸附处理，依次经水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱物[4]，减压浓缩，用水制成0.4 g生药/ml的乙醇洗脱物备用。
       2.2镇痛实验
       2.2.1小鼠48℃热板实验 将雌性小鼠放置到预热到48℃的恒温热板仪上,以舔后足为痛反应指标,以出现舔后足的潜伏期作为痛阈值,以给药前2次痛阈的均数作为基础痛阈,选取基础痛阈合格(5 s<痛阈<30 s)的小鼠90只,随机分为赤雹根水提物、赤雹根醇提物、石油醚萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物、乙醇洗脱物、水溶性部分组、吗啡5 mg/kg组和盐水对照组(NS),每组10只。吗啡(Mor)Sc给药;其它组ig给药,ig给药容积0.2 ml/10g体重,盐水组ig等容积的生理盐水。Sc给药后15 min,ig给药后40 min,测定药后痛阈。并按文献方法[5]计算痛阈提高百分率。
       2.2.2小鼠扭体法小鼠90只(雌雄不拘), 随机分组,分组方法、给药剂量和途径均与“2.2.1”项相同，Sc给药后15 min,ig给药后40 min,腹腔注射0.05%酒石酸锑钾0.2 ml/只致痛,计数致痛后15 min内各小鼠的扭体反应次数,按文献[5]方法计算扭体反应抑制率。
       3 结果
       3.1赤雹根对48℃热板法小鼠痛阈的影响赤雹根水提物、赤雹根醇提物及各部分萃取物均可明显延长致痛潜伏期,提高痛阈(P<0.05或P<0.01)。结果见表1。表1赤雹根对48℃热板法小鼠痛阈的影响
       3.2 赤雹根对酒石酸锑钾致小鼠扭体反应的影响 赤雹根水提物、赤雹根醇提物及各部分萃取物使各组小鼠的扭体反应次数均明显减少(P<0.05或P<0.01)。结果见表2。表2赤雹根对酒石酸锑钾致小鼠扭体反应的影响
       4讨论
       赤雹根为赤雹的干燥成熟块根, 作为满族民间长期沿用的药材，具有深厚的民间用药基础。民间用药多为水提物，但由于其水提物中含有大量淀粉，后续处理较为复杂，而醇提物相对较为容易，所以本文对水提物和醇提物的镇痛活性进行了比较。小鼠热板法和扭体法结果表明，赤雹根水提物、醇提物均确有显著的镇痛作用，但醇提物镇痛作用强于水提物，其中醇提物中正丁醇萃取后乙醇洗脱部分的镇痛作用最强，理化研究表明,本实验样品中正丁醇萃取部分经大孔树脂吸附后乙醇洗脱物实际上即为总皂苷,经测定该样品中总皂苷含量为54.14%,提示赤雹根镇痛的主要有效部位之一为总皂苷。
       热板法属于热刺激致痛模型,麻醉性镇痛药和外周性镇痛药可缓解不同温度热刺激引起的疼痛,中枢性镇痛药可缓解较高温度(55℃)热刺激引起的痛反应,而外周性镇痛药可缓解较低温度(48℃)热刺激引起的痛反应[6]。小鼠扭体实验是由于化学刺激性物质注入小鼠腹腔后,刺激脏层和壁层腹膜,引起较大面积较长时间的炎性疼痛,致使小鼠出现扭体反应。赤雹根总皂苷有较显著的镇痛作用，是赤雹根镇痛作用的有效部位之一，但其作用是以外周还是中枢为主以及其具体的镇痛作用机制还有待进一步研究。
       【参考文献】
         　[1]宋立人,洪恂,丁绪亮,等.现代中药大辞典，上册[M].北京: 人民卫生出版社, 2001：1022.
       
       [2]Nagao T,Okaba H,Mihashi K.Studies on the constituents of T hladiantha Dubia Bunge.Ⅰ.The structure of dubiosides A,B and C,The quillaic acid glucuronide saponins isolated from the tuber[J].Chem Pharm Bull,1989,37(4):925.
       
       [3]彭媛,顾振纶.植物药镇痛作用的研究进展[J].中国野生植物资源，2005，24(1)：20.
       
       [4]王学习,陈茹,李世刚,等.糙叶败酱总皂苷的提取纯化和含量测定[J].中药材，2007，30(5)：595.
       
       [5]徐叔云.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2003：882.
       
       [6]Duman EN,Kesim M,Kadioglu M,et al.Effect of gender on antinociceptive effect of paroxetine in hot plate test in mice[J].Prog Neuropsychopharmacol Biol psychiatry, 2006,30(2):292.