文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的利用高效毛细管电泳技术分离测定液体中药制剂中苯甲酸和山梨酸的含量。方法采用未涂层熔融石英毛细管柱(50.2 cm×75 μm,有效长度40 cm)，以50 mmol/L硼砂(pH=9.5)为运行缓冲液，分离电压20 kV，柱温25℃，检测波长228 nm进行测定。结果苯甲酸和山梨酸的线性范围分别是2.5～200.0 μg/ml(R2=0.999 7)，2.5 ～200.0 μg/ml(R2=0.999 4)，检测限分别为1.50 ng/ml，1.54 ng/ml，检测灵敏度高，精密度良好;将此方法应用于实际样品测定，苯甲酸和山梨酸的回收率分别为98.61 %～103.3 %，98.12 %~102.5 %。结论该法简单快速、准确可靠、灵敏度高，为药物中微量的苯甲酸和山梨酸检测提供简便易行精确的方法。
       【关键词】  高效毛细管电泳;山梨酸;苯甲酸;液体中药制剂
       随着人们药品安全意识的增强，药品中添加剂的限量问题日益受到人们的关注，药品的特殊性使其质量检测变得更为重要。液体制剂特别是以水为溶剂的液体制剂，易被微生物污染而发生霉变，尤其是含有糖、蛋白质等营养物质的液体制剂，更容易引起微生物的滋长和繁殖，从而引起理化性质的变化，严重影响制剂质量，有时会产生细菌毒素危害人体[1]。苯甲酸和山梨酸作为防腐剂是药物制剂中常用的添加剂，用于防止药物制剂由于细菌、酶、霉等微生物的污染而产生变质。毛细管电泳(CE)是依据荷电离子在毛细管中以电场力为推动力，按其淌度差别而进行分离的技术，具有应用范围广、高效、 快速、 仪器操作简单、 样品和试剂耗用量少、 抗污染能力强[2]、 可供选择的分离模式多、 适应性广等特点。毛细管电泳在药物分析、中药成分分析、 手性对映体分析、 医学临床检验、 法医及单细胞分析等方面已得到广泛应用;被分析的物质有离子、 小分子药物、 基因工程产品、 蛋白、 DNA基因诊断、 手性对映体等[3～5]。本文利用高效毛细管电泳法测定液体中药制剂中常用防腐剂山梨酸和苯甲酸的含量，旨在为药物中微量成分(辅料)的检测提供简便易行精确的方法。
       1仪器与试剂
       1.1仪器BenckmanP/ACETMMDQ型毛细管电泳仪(Benckman Coulter公司，美国)，32KaratTM Software ver 5.0工作站采集和处理数据，二极管阵列检测器，弹性石英毛细管(Benckman Coulter公司)，50.2 cm×75 μm i.d，有效长度40 cm，PHS-29A型酸度计(上海精密科学仪器有限公司)，METTLER TOLED O AX205型分析天平。
       1.2试剂和材料苯甲酸和山梨酸对照品购于中国药物生物制品检定所，直接使用没有进一步纯化，其它化学试剂均为分析纯。川贝清肺糖浆(北京龙泰基药业有限责任公司，批准文号：国药准字Z11021256，产品批号：0807001)，蛇胆川贝液(广西灵峰药业有限公司，批准文号：国药准字Z45022081，产品批号：3108029)购于泰安当地药店。不同浓度的缓冲溶液由0.2 mol/L硼砂溶液稀释而成，其pH值用2 mol/L NaOH和2 mol/L HCl调节。实验中所用水均为纯化水。所有溶液在使用前均用0.45 μm的滤膜过滤。
       2方法
       2.1溶液配制
       2.1.1标准溶液的制备分别精密称定一定量的苯甲酸和山梨酸对照品，用20 %的甲醇配置成1 000 g/ml的混合储备液。实验时，工作溶液由储备液用20 %的甲醇稀释到所需浓度。
       2.1.2样品溶液的制备精密称取5.006 g蛇胆川贝液，置于250 ml的分液漏斗中，加30 ml蒸馏水，混匀后加入1.5 ml 的6.0 mol/L HCl，用30 ml×2无水乙醚提取，合并提取液于容量瓶，用乙醚定容至50.0 ml，在40℃水浴中挥干乙醚，用20%甲醇定容至2.0 ml，用0.45 μm的微孔滤膜过滤后备用。川贝清肺糖浆处理方法同上。
       2.2实验方法CE条件：缓冲溶液，pH 9.5的50 mmol/L硼砂溶液;分离电压20 kV;柱温25℃;阳极压力进样(0.5 psi×5 sec)，阴极紫外检测，检测波长228 nm。新毛细管前使用(内壁未经处理)，分别用0.1 mol/L NaOH(10 min)、蒸馏水(10 min)、缓冲溶液(10 min)依次冲洗毛细管。为了使毛细管内表面保持一致，两次运行之间，依次用蒸馏水(2 min)、0.1 mol/L NaOH(2 min)、蒸馏水(2 min)、缓冲溶液(2 min)冲洗毛细管，以提高迁移时间、峰面积和峰高的重复性。通过加入纯对照品和比对吸收光谱鉴定苯甲酸、山梨酸的峰。
       3结果
       3.1缓冲溶液pH的影响在毛细管区带电泳中，缓冲溶液的pH对于可离解的化合物的分离效果影响很大，因为它能决定每个分析物所帯电荷的种类和大小。在7.5～10.0范围内调节50 mmol/L硼砂缓冲溶液，在20 kV分离电压下考察pH对山梨酸和苯甲酸峰高和分离度的影响(图1)。由图1可知，峰高开始随着缓冲液pH的增大而增大，当pH到9.5时， 山梨酸和苯甲酸的峰高达到最大;且随着pH值的升高，分离度也在于9.0时达到极值。综合峰高和分离度，选择9.5为缓冲液的最佳pH值。
       3.2缓冲溶液浓度的影响缓冲溶液的浓度通过影响电渗流和介质的黏度而影响分离效果。本文在pH 9.5、20 kV分离电压下，考察了硼砂缓冲溶液在10～60 mmol/L范围内变化时对峰面积和分离度的影响(图2)。结果表明，随着缓冲溶液浓度的增大，分析物的迁移时间延长，大于40 mmol/L时，两组分的峰面积和分离度都显著增加。因此，选择50 mmol/L为缓冲液的最佳浓度值。图1pH值对苯甲酸(B)和山梨酸(S)峰高和分离度(R)的影响图2缓冲液浓度对苯甲酸(B)和山梨酸(S)峰面积和分离度(R)的影响
       3.3分离电压的影响分离电压与电渗流和焦耳热有关，在一定的范围内，分离电压增大，电渗流增大，焦耳热也增大，分离度减小，检测灵敏度降低。因此，分离电压是影响体系性能的重要因素之一[10]。本文在50 mmol/L硼砂缓冲液，pH9.5的条件下考察了分离电压18～25 kV范围内对分离度、迁移时间及峰高的影响。结果表明，迁移时间随着分离电压的增加而减小，在20 kV时分离度和峰高达到最大，综合考虑分析速度、分离度及检测灵敏度，本文选择最佳分离电压为20 kV。综合上述实验结果，本文选择的分离条件为，pH 9.5的50mmol/L硼砂缓冲液，分离电压20 kV。
       3.4标准曲线、线性范围和检测限在最佳条件下测定了7个浓度苯甲酸和山梨酸(2.5，5.0，10.0，25，50，100，200μg/ml)的标准混合物溶液，得到峰面积和浓度间的回归方程、线性范围和检测限(LOD)结果见表1，标准谱图见图3 A。　　表1分析物的回归方程、线性范围和检测限
       3.5精密度为了考察体系的精密度，在上述最优条件下对高、中、低3个标准混合液(10，50，200 μg/ml)分别重复进样6次，用峰面积和迁移时间的RSD作为考察体系精密度的指标。结果见表2。由表中数据可知体系精密度良好。
       3.6样品和回收率测定果将“2.1.2”制备的样品溶液分别进行测定(图3 B和3 C)，通过比较光谱图和标准加入法对实际样品电泳图中各组分的峰进行确定。样品中各分析物的测定结果见表3。通过标准加入法测定了方法的回收率。结果见表4。由两表可以看出测定量与标示量基本一致，回收率的RSD(%)均小于2%[6]，符合《中国药典》规定。表2精密度(RSD)实验结果图3标准混合溶液和样品溶液电泳图表3样品测定结果表4山梨酸和苯甲酸的回收率
       4结论
       本文建立了一种液体药品中苯甲酸和山梨酸含量测定的高效毛细管电泳新方法，分离和测定在15 min内完成，检测灵敏度高，分离效能高，且不需要复杂仪器，可用于液体中药制剂的质量控制。
       【参考文献】
         　[1]吴沁航，李建其. 3 ,5 - 双三氟甲基苯乙醇的手性毛细管电泳拆分[J] . 中国现代应用药学杂志, 2007, 24 (4): 256.
       
       [2]彭清淘，胡文祥. 药物分析新技术[J]. 现代仪器，2001，3：4.
       
       [3]班丽娜，许海棠，徐远金. 桂林西瓜霜喷剂中盐酸小檗碱、苦参碱与黄芩苷的毛细管电泳测定[J]. 分析测试学报，2008，27(11)：1217.
       
       [4]李玉琴，宗素艳，崔英杰，等. 毛细管电泳-场强放大堆积技术测定制剂中的磺胺嘧啶和磺胺甲唑[J] .分析测试学报，2007，26(6)：784.
       
       [5]S.H. Liu, X.G. Chen, Z.D. Hu. Electrophoresis, 2002, 23: 3392.
       
       [6]国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S]. 北京：化学工业出版社，2005：制剂通则，附录Ⅰ：H糖浆剂.