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       【摘要】 
       目的综述近年来三七皂苷R1研究进展，阐述三七皂苷R1透皮吸收的可能性，为扩大其临床应用、开发新型制剂提供实验依据。方法该实验采用高效液相色谱仪检测三七皂苷R1 体外透皮吸收累积渗透量，实验结果经统计学处理。结果三七皂苷R1 24 h的累计渗透量为0.108 8 mg·ml-1,累计透皮率约为4.35%。结论三七皂苷R1 可以透过皮肤被吸收，本实验为研制三七皂苷R1的新型透皮制剂打下了实验基础。
       【关键词】  三七皂苷R1;透皮吸收;累计渗透量
       透皮吸收制剂是无创伤性给药的新途径[1]，不仅能够避免口服给药等可能发生的不良反应，降低毒副反应，而且使用方便,近年来透皮吸收制剂的开发研究日益受到重视。三七皂苷R1是从中药三七中提取的有效活性物质[2]，现代药理学研究证明三七皂苷在心脑血管系统方面具有较好的生理活性, 近年来出现了一些三七的新剂型，与传统的剂型相比具有方便、安全、见效快、易于携带等优点,但目前尚未见到透皮吸收制剂的上市。本试验研究三七皂苷R1体外透皮吸收累积渗透量，为新型透皮吸收制剂的研制打下了实验基础。
       1仪器与材料
       1.1仪器自制franz扩散池，高效液相色谱仪。
       1.2药品及试剂受试药物：三七透皮制剂。三七皂苷R1对照品(中国药品生物制品检定所,批号：07452200007,纯度>98%,分子式C48H82O18,相对分子质量947112)。
       1.3动物昆明种小鼠,体质量(20±2)g,雌雄各半,购自山东大学实验动物中心，合格证号：2004003004号。
       2方法
       2.1色谱条件Lab Alliace高效液相色谱仪：Lichrospher C18 (4.6 mm×150 mm，10 nm 5 μm);流动相:乙腈-水-磷酸 (25∶75∶0.05);流速:1.0 ml·min-1;进样量:20 μl;检测波长:205 nm。
       2.2三七皂苷R1标准曲线的测定三七皂苷R1对照品储备溶液：精密称取三七皂苷R1 40.2 mg置10 ml容量瓶中,加甲醇适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。三七皂苷R1对照品溶液：分别精密取三七皂苷R1对照品储备溶液0.5 ml置10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。取储备液0.01，0.04，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml分别置于10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸20 μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图(见图1)。峰面积与进样量关系结果如下:三七皂苷R1线性方程: A = 2 037 498C - 4 226.57,r= 0.998 8,线性范围:0.004 02 ～0.402 0 mg·ml-1。结果表明在各自的线性范围内三七皂苷R1的峰面积与溶液浓度线性关系良好。
       2.3精密度实验精密吸取标准品对照液 20 μl，在上述色谱条件下连续进样 6 次，计算相对标准偏差，结果表明RSD不超过3%, 符合规定标准，说明仪器系统的精密度良好。结果见图1。图1三七皂苷R1的标准曲线
       2.4回收率实验取三七皂苷R1对照品储备溶液(浓度：4.002 mg·ml-1)0.02，0.10，0.50 ml各三份，分别置10 ml容量瓶中;加0.9%氯化钠溶液稀释至刻度，摇匀，并标记为1.2.3号样品，精密吸20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算回收率。结果见表1。表1三七皂苷R1的加样回收率实验
       2.5三七皂苷R1透皮吸收累计渗透量的测定
       2.5.1准备透皮吸收装置[3]按照改良franz扩散池的图纸自制透皮吸收装置，将三七皂苷透皮制剂平铺于吸收池上方，中间为小鼠皮肤，下层为接受液。
       2.5.2制备小鼠角质层皮肤取体质量为18～22 g昆明种小鼠，雄性，用眼科手术剪沿鼠毛根部将腹部的鼠毛清理干净，然后脱颈椎处死后,马上将鼠皮浸泡于生理盐水中，15 min后捞出，贴于小烧杯外壁，用脱脂棉快速将鼠皮皮下组织和脂肪擦去，作为受试皮肤。受试皮肤每次试验现用现制。
       2.5.3样品的制备准备好经过改良franz扩散池,将处理后的小鼠皮角质层皮肤向上夹在顶盖和接收器之间，用橡皮筋固定好扩散池边缘四周，将扩散池横放，从取样门加入0.9%生理盐水，直至液面到达取样支管长度一半的地方，再将扩散池竖起，置于磁力搅拌器之上，与超级恒温水浴相连，温度保持在(37±0.5)℃。将配好的三七透皮吸收药液倾倒在小鼠皮角质层上，开启磁力搅拌器，于0.5 ，1.0 ，1.5 ，2.0，4.0，6.0，8.0，16.0，18.0 ，20.0，22.0，24.0 h分别取生理盐水作为接受液。平行进行3次实验，将3次实验收得的接受液,用水饱和正丁醇和正丁醇饱和水进行处理，残渣用甲醇溶解至5 ml,摇匀，用0.45 nm 微孔滤膜过滤，即得样品。
       2.5.4三七皂苷R1含量的测定精密吸取样品0.25 ml,依上述供试品溶液制备方法,用甲醇定容至5 ml,进样10 μl，高效液相法测定其中三七皂苷R1的吸收峰面积并记录结果。
       2.5.5结果处理方法累计渗透量M:M"=C"n×V池A
       3结果
       透皮吸收结果：测定除盐后样品中三七皂苷R1的含量。以单位面积累计渗透量为纵坐标，时间为纵坐标，绘制曲线，将渗透曲线尾部直线部分的M-t数据进行线性回归，求得直线斜率，即为渗透速度J。结果见表2。表2三七皂苷R1不同时间的累计渗透量根据实验数据，三七皂苷R1透皮吸收制剂的渗透速率为0.003 867 mg·h-1，回归方程为Y = 0.003 867X +0.003 150 946。曲线图见图2~3。图2三七皂苷R1累计渗透量-时间曲线图3三七皂苷R1累计渗透量-时间一元回归曲线
       4讨论
       三七皂苷是中药三七主要生理活性成分,含量高达12%[4，5]，现代化学和药理学研究发现三七总皂苷在耐缺氧、抗衰老、提高机体免疫力等方面的药理作用显著，且三七总皂苷和部分单体皂苷在心脑血管系统等方面均有较好活性[2，4，6，7 ]，但是，目前市面上的剂型多集中于注射液、口服液等。透皮制剂是一种新的给药途径，因此，三七皂苷R1透皮吸收的研究具有一定的创新性。
       实验结果显示，三七皂苷R1的累计渗透量随着时间的增加而增加。从趋势上来看，20～24 h达到稳态，提示我们制作体外透皮吸收制剂时，可以制做成缓释制剂，既能提高药效，又能保持稳定的药物浓度，达到较佳的治疗效果。初略考察三七皂苷R1 24 h的累计渗透量为0.108 8 mg·ml-1, 透皮率约为4.35%，说明透皮实验较为成功，同时也说明可以将三七皂苷透皮进行深入的研究。以上的研究为三七皂苷新剂型的开发提供了实验依据，为扩大其临床应用途径提供了新的思路。
       【参考文献】
         　[1]雷璐.透皮吸收新剂型-水杨酸乙酯巴布剂[J].中国处方药，2004，24(3):72.
       
       [2]黎芸，程一帆，古碧秀.三七总皂苷制剂的临床应用近况[J].中国药业，2006，15(6):57.
       
       [3]户美玲，刘文双，刘卫，等.促渗剂对贴剂中双氯芬酸二乙胺的经皮促渗作用[J].华西药学杂志，2009，24(1):16.
       
       [4]邓志军，郭洁文，杨敏，等.三七总皂苷及其活性单体药代动力学的研究进展[J].药学进展，2009，19(1):24.
       
       [5]耿仕霞.HPLC法测定复方三七注射液中三七总皂苷的含量[J].齐鲁药事，2006，25(4):216.
       
       [6]张玉军.三七总皂苷的药理研究进展[J].广西医学，2009，31(4):589.
       
       [7]张秀丽，梁朝侠，李杰.补阳还五汤配合血塞通注射液治疗短暂性脑缺血急性发作临床观察[J].湖北中医杂志，2007，29(8):26.