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       【摘要】 
       目的从神经内分泌免疫(NEI)网络角度探讨新风胶囊治疗类风湿关节炎的量效关系，为探讨该药的作用机制及寻求更安全有效的临床用药提供实验依据。方法以AA大鼠为研究模型，分为新风胶囊(XFC)低、中、高剂量组、甲氨蝶呤(MTX)组、雷公藤多苷片(TPT)组及模型组，分组处理30 d后，采用ELISA法检测各组大鼠血清5-HT，DA，ACTH，CORT，TNF-α，IL-10水平，进行统计学分析。结果①XFC各治疗组比较，中剂量组大鼠体重上升最为明显，与正常组无明显差异 (P>0.05);②XFC各治疗组均能不同程度的降低AA大鼠血清5-HT，ACTH，CORT，TNF-α，升高IL-1水平(P<0.05或P<0.01)，并呈现一定的量效关系。结论XFC中剂量组在维持大鼠体重稳定增长的同时仍能有效调节NEI网络紊乱，体现了中医“扶正祛邪，整体调节”的优势，是临床最佳的选择。
       【关键词】  类风湿关节炎;神经内分泌免疫
       类风湿关节炎(RA)是以对称性多关节炎为主要表现的慢性系统性自身免疫性疾病，单纯从免疫学角度难以阐释RA的发病机制和病变特点，近年来神经内分泌免疫(neuron-endocrine-immune，NEI)网络途径在RA的发病机制中越来越受到重视。虽然现代医学首先提出神经内分泌免疫网络的概念，但一直缺乏调节这一网络的有效手段，而单味中药或中药复方进入机体后能够多靶点、多环节、多层次、多途径发挥作用，对神经内分泌免疫网络能起到很好的良性调节作用。新风胶囊是在我院刘健教授“脾虚致痹”理论指导下，在多年临床经验基础上形成的中药复方制剂，具有健脾化湿通络之效。前期研究表明，新风胶囊能有效改善RA患者临床症状和炎症指标，显著改善患者的整体机能，且未见明显毒副作用。本研究拟从NEI网络角度探讨新风胶囊的量效关系，为进一步探讨该药的作用机制及寻求更安全有效的临床用药提供实验依据。
       1材料
       1.1动物清洁级Wistar雄性大鼠84只，体质量(150±10)g，由安徽省医学科学研究所动物房提供。实验室保持恒温、恒湿，动物在明暗周期为12/12 h(明期6:00~18:00)条件下进行适应性饲养。
       1.2药品与试剂新风胶囊(XFC)：由安徽中医学院第一附属医院制剂中心提供，药物组成主要有薏苡仁、黄芪、蜈蚣、雷公藤等，每粒胶囊含生药浸出物0.5 g，院内批号：20051204;雷公藤多苷片(TPT)：10 mg/片，上海复旦复华药业有限公司出品;甲氨蝶呤(MTX)：2.5 mg/片,由中国信谊药厂生产;弗氏完全佐剂(Freund"s complete adjuvant，CFA)由美国SIGMA公司提供。大鼠血清5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)、TNF-α、IL-10酶联免疫检测试剂盒均由美国R∝D公司出品。
       1.3仪器TECAN M8/4R洗板机，TECAN A-5082酶标定量测定仪，HH-W21-600电热恒温水温箱等。
       2方法
       2.1造模及分组给药将84只Wistar雄性大鼠适应性喂养1周后，随机分为正常对照组(12只)和模型组(72只)，除正常对照组外，向每只大鼠右足跖皮内注射FCA 0.1 ml致炎，复制成AA大鼠模型。致炎后第19天将AA大鼠模型组随机分为6组：XFC低剂量组、XFC中剂量组、XFC高剂量组、MTX组、TPT组及模型对照组，当天开始给药。各组的给药量如下：①XFC低剂量组：将XFC去除胶囊壳研成细末，加生理盐水制成混悬液(每毫升含药量为0.3g)，按0.5ml/100g的剂量灌胃，1次/d，剂量相当于临床用量的5倍;②XFC中剂量组：将XFC混悬液按1ml/100g的剂量灌胃，1次/d，剂量相当于临床用量的10倍;③XFC高剂量组：将XFC混悬液2ml/100g的剂量灌胃，1次/d，剂量相当于临床用量的20倍;④MTX组：将MTX研成细末，加生理盐水制成混悬液(每毫升含MTX0.3 mg)，按1 ml/100g的剂量灌胃，每周1次，未给药的实验日，给予生理盐水灌胃，1 ml/100 g，每天1次;⑤TPT组：将TPT研成细末，加生理盐水制成混悬液(每毫升含TPT1 mg)，按1 ml/100 g的剂量灌胃，每天1次;⑥正常对照组及模型对照组予生理盐水灌胃，1 ml/100 g，1次/d。各组疗程均为30 d。
       2.2足跖肿胀度分别在造模前1天、致炎后每3天、给药后每3天测量各组大鼠的右后足跖的容积,计算各组大鼠足跖肿胀度[1]。肿胀度E(%)=(Vt-Vn)/Vn×100%( Vn、Vt分别代表用致炎剂前后足跖容积值)。
       2.3关节炎指数(AI)的计算致炎后第12天开始观察并记录全身关节病变程度,每3天1次。全身病变按5级评分法评价,根据未注射佐剂的其余3只肢体的病变程度累积积分,计算出AI[2]。0分:无红肿;1分:小趾关节红肿;2分:趾关节和足跖肿胀;3分:踝关节以下的足爪肿胀;4分:包括踝关节在内的全部足爪肿胀。把各个关节的积分累计起来,即为每只大鼠的AI。
       2.4指标检测造模第49天，各组大鼠用10%水合氯醛(0.4 ml/100 g)按大鼠体重腹腔注射麻醉。腹主动脉取血，分离血清，置于-20℃冰箱保存待测;具体操作按试剂盒说明书进行，由专业人员一次检测。TECAN A-5082型酶标仪读出OD值后，按曲线拟合软件Curve Expert 1.3计算出浓度值。
       2.5统计分析实验数据以±s表示，应用SPSS 11.0 软件行单因素方差分析(One-Way ANOVA)及相关性分析。
       3结果
       3.1各组大鼠体质量、足趾肿胀度、关节炎指数的比较表1显示：致炎前各组大鼠体质量无差异，给药前1天(即致炎第18天)与正常组相比,造模组大鼠体质量均明显减轻(P<0.01);给药30 d后与模型组比较,各组大鼠体质量均显著上升(P<0.01);XFC低、中、高剂量组相比，XFC中剂量组大鼠体重上升最为明显，与正常组无明显差异 (P>0.05)。给药前1天(即致炎第18天)与正常组相比,模型组大鼠足跖肿胀度显著升高(P<0.01);给药30 d后与模型组比较,各组大鼠足跖肿胀度均下降(P<0.01或P<0.05);XFC低、中、高剂量组相比，XFC中、高剂量组足跖肿胀度下降较XFC低剂量组更为明显(P<0.05)。给药前1天(即致炎第18天)与正常对照组相比,模型组大鼠关节炎指数显著升高(P<0.01);给药30 d后与模型对照组相比,各组大鼠关节炎指数均显著降低(P<0.01);XFC低、中、高剂量组相比，XFC高剂量组关节炎指数降低较XFC低组明显(P<0.05)，与XFC中剂量组无明显差异(P>0.05)。表1各组大鼠体重、足趾肿胀度、关节炎指数的比较
       3.2各组大鼠NEI网络相关指标的变化表2显示：与正常组比较，模型组大鼠5-HT、ACTH、CORT、TNF-α显著升高，IL-10值降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较，XFC低、中、高剂量组均能显著降低5-HT水平(P<0.01)，且随剂量的增大，降低越明显，XFC高剂量组的5-HT水平与正常组比较无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较，XFC中、高剂量组均能显著降低血清ACTH水平(P<0.01)，而XFC低剂量组ACTH水平无显著下降(P>0.05)。与模型组比较，XFC低、中、高剂量组均能显著降低血清CORT、TNF-α水平，升高IL-10水平(P<0.01)，并呈现一定的量效关系。与XFC低剂量组比较，XFC中剂量组在降低ACTH、升高IL-10方面更为明显(P<0.01)，XFC高剂量组在降低5-HT、ACTH、CORT、TNF-α，升高IL-10方面均更为显著(P<0.05或P<0.01)。与XFC中剂量组比较，XFC高剂量组在降低5-HT、ACTH、CORT、TNF-α，升高IL-10方面更为明显，但无统计学意义(P>0.05)。各组DA水平无明显差异(P>0.05)。表2各组大鼠NEI网络相关指标的变化
       4讨论
       RA是一种慢性全身性自身免疫性疾病,越来越多的学者认识到在这种慢性免疫性炎症过程中有神经内分泌系统及免疫系统的参与，即神经-内分泌-免疫网络在RA的发病过程中发挥重要作用。三大系统之间通过神经递质、内分泌激素和细胞因子进行信息传递，即神经、内分泌系统能调节免疫系统的功能，而免疫系统也能调控神经内分泌系统的某些功能。看似独立的三大系统实际上是一个有着广泛内在联系的有机整体，它们构成一个立体的网络结构，共同调节机体内环境的平衡与稳定。
       RA病程中NEI网络的变化非常复杂，中医药以其多靶点、多环节、多层次、多途径作用的整体调节优势在复杂系统的调控方面颇具优势。新风胶囊主要由黄芪、雷公藤、薏苡仁、蜈蚣等药味组成，前期研究发现XFC在显著改善RA患者临床症状及炎症指标的同时，能显著降低RA患者血清皮质醇浓度，改善患者抑郁症状[3]，并观察了XFC对佐剂性关节炎大鼠脑组织氨基酸类神经递质的影响，结果显示XFC能明显下调抑制性氨基酸GABA水平，上调兴奋性氨基酸GLU与GABA的比值;电镜下XFC组大鼠脑组织的病理改变亦明显轻于其它组[4]。
       现代药理学研究表明，黄芪含有多糖、苷、黄酮和微量元素等多种成分，对人体免疫系统、神经系统、内分泌系统均有广泛作用，黄芪多糖能促进T细胞、B细胞、NK细胞、吞噬细胞等免疫细胞的增殖与分化，并促进各种细胞因子的产生，如白细胞介素-2、干扰素、TNF等，以及抗体的产生，调节神经-内分泌-免疫网络的平衡，影响免疫细胞过氧化物酶系统等[5]。雷公藤可通过促进HPA轴功能、调节神经内分泌多肽分泌、抗炎抗免疫、基因调控、调节骨代谢及诱导细胞凋亡等多种途径发挥其对RA的治疗作用[6~11]。
       本研究结果显示XFC中剂量组大鼠体重上升最为明显，与正常组无明显差异 (P>0.05);XFC各治疗组均能不同程度的降低AA大鼠血清5-HT，ACTH，CORT，TNF-α，升高IL-1水平(P<0.05或P<0.01)，并呈现一定的量效关系。组间比较显示，XFC高剂量组在降低5-HT、ACTH、CORT、TNF-α，升高IL-10方面均更为显著，明显优于XFC低剂量组(P<0.05或P<0.01)，但与XFC中剂量组比较，无显著差异(P>0.05)。上述研究结果表明XFC中剂量组在维持大鼠体重稳定增长的同时仍能有效调节NEI网络紊乱，体现了中医“扶正祛邪，整体调节”的优势，是临床最佳的选择。
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