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       【摘要】 
       目的建立家兔酒精性肝损伤病理模型，探讨茶多酚对酒精性肝损伤的治疗作用。方法家兔分为4组：对照组，茶多酚低剂量组、中剂量、高剂量组。茶多酚低、中、高组分别灌胃以浓度为10，20，40 mg/ml的茶多酚溶液进行治疗，实验期2周。测定肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量，并取肝组织制作石蜡切片，HE染色，普通光镜观察。结果茶多酚能够直接降低MDA含量，且中剂量（20 mg/ml）和高剂量（40 mg/ml）能够有效地清除活性氧和自由基。结论茶多酚对酒精性肝损伤有良好的治疗和保护作用。
       【关键词】  茶多酚； 肝损伤； 超氧化物歧化酶； 丙二醛
            茶多酚是从茶叶中提取的有效成分之一，由多种酚性物质组成，是一种多酚类化合物，具有清除自由基和抗氧化等作用的生物活性。Marnewick［1］也发现，喂饲绿茶和红茶的大鼠，其肝组织匀浆中氧自由基浓度明显下降。本实验试图建立酒精性肝损伤病理模型，运用茶多酚治疗的方法，从组织学与病理学的角度研究茶多酚在酒精性肝损伤中起到的治疗作用，同时研究其机制。
       1  材料与方法
       1.1  材料
       98%的茶多酚15g，超氧化物歧化酶试剂盒（南京建成生物工程公司）、丙二醛试剂盒（南京建成生物工程公司）。
       1.2 动物和分组 
       3月龄雌性大耳白兔24只，体质量1～1.5 kg，体质健康。统一编号后随机分为4组，各组6只，分笼喂养，自由饮水摄食。
       1.3  酒精性肝损伤病理模型建立［2］通过连续10d对4组实验动物灌胃50%的酒精5 ml建立酒精性肝损伤模型；同时，对照组灌胃生理盐水，低剂量组灌胃10 mg/ml的茶多酚溶液5ml(相当于25mg·kg-1·d-1)治疗，中剂量组灌胃20 mg/ml的茶多酚溶液5 ml(相当于50 mg·kg-1·d-1)治疗，高剂量组灌胃40 mg/ml的茶多酚溶液5 ml(相当于100 mg·kg-1·d-1)治疗。治疗两周，观察并作相关记录。
       1.4  观察指标和方法取家兔肝组织制备匀浆液，测定蛋白质的含量，采用超氧化物歧化酶（SOD）活力试剂盒和丙二醛（MDA）含量试剂盒分别测定SOD的活力和MDA的含量；同时对肝组织常规石蜡包埋，连续切片，HE染色，光学显微镜观察并记录。
       2  结果
       2.1   剖检变化 
       解剖前，家兔身体消瘦，食欲不振，体毛蓬松，其中对照组有2只家兔死亡，低剂量组有1只家兔死亡，高剂量组体重无明显变化，能够正常饮食，毛色光滑雪白。  
        解剖后，对照组肝组织质地松软，颜色为土黄色；低剂量组肝组织质地较松软，颜色为土黄色；中剂量组肝组织质地轻度松软，颜色为深红色；高剂量组肝组织有韧性，颜色为深红色。
       2.2  肝组织中SOD活力和MDA 含量的变化
       随着对酒精性肝损伤的治疗, 模型组 SOD 活性和MDA 含量都显著性下降。经方差分析，高剂量组和低剂量组SOD的活力与对照组比差异极显著，低剂量组与对照组之间无显著差异；高剂量组MDA 含量与对照组比差异极显著，中剂量组与对照组之间差异显著，低剂量组与对照组之间无显著差异。结果见表1。表1  肝组织中SOD的活力和MDA的含量（略）
       2.3  肝组织病理变化光镜下，对照组肝组织受损较严重，肝细胞条索状不明显，且杂乱无章，肝板间隙较小，肝小叶边缘模糊，界限不清（图1）。肝细胞结构不完整，细胞膜破损，双核现象较多（图2）。低剂量组与正常组的变化基本相同（图3～4）。茶多酚中剂量组肝小叶边缘界限清楚，肝细胞以中央静脉为中心呈发射状排列，肝板间隙较大（图5）。细胞核双核较多，细胞膜完整（图6）。高剂量组肝细胞呈有规律的条索状，肝板间隙较大（图7）。细胞结构完整，双核现象较少（图8）。
       3  讨论
        研究表明，茶多酚清除自由基的能力大大超过目前已知的抗氧化剂维生素C和维生素E，其抗氧化能力是维生素C的3～10倍，是维生素E的3～9倍［3］。通过对组织中SOD活力和MDA含量的测定可以间接反映出茶多酚清除活性氧与自由基的能力。MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度。许多研究表明，茶多酚不仅能防护体内抗氧化酶，还能促进和调动机体内各种抗氧化酶的活性，生物体内的抗氧化酶主要有超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽酶(GSH)和过氧化氢酶(CAT)。因此，茶多酚对氧自由基的清除主要表现在能使SOD活性显著提高，MDA水平显著降低，且呈剂量效应关系［4］。
       本研究通过对酒精性肝损伤家兔动物模型进行茶多酚治疗实验，检测了肝损伤中相关酶的活性，发现肝组织中SOD活力和MDA含量都呈下降趋势，茶多酚高剂量组和低剂量组SOD的活力与对照组比差异极显著；茶多酚高剂量组MDA含量与对照组比差异极显著，中剂量组与对照组之间差异显著。说明茶多酚能显著降低肝组织中丙二醛的含量，但不能显著提升超氧化物歧化酶的活性，此结果与以往大多数研究结果并不完全一致。究其原因，可能与茶多酚抗自由基机理的多样性有关，茶多酚并没有提高抗氧化物酶活性和协同抗氧化物酶清除自由基。对于肝脏的损害，主要是氧自由基形成的脂质过氧化引起的。铁离子能促使氧自由基生成，催化脂质过氧化物裂解，引发新的脂质过氧化链式反应，而茶多酚能有效络合铁离子与低分子铁结合成配合物，促使低分子铁排出体外，从而减少自由基的形成［5，6］，说明茶多酚可以自身直接清除组织细胞中的MDA，因此随着茶多酚的浓度不断增高，MDA的含量逐渐降低。通过此途径减轻自由基对机体的损伤可能是造成本实验结果的主要原因。另一方面，通过组织学的观察发现随着灌喂的茶多酚浓度的增加，肝组织的受损程度就越低。其中中剂量和高剂量的浓度对该病理现象起到了很好的治疗效果。
       
       综上所述，茶多酚有众多的生物学活性，本研究表明茶多酚对家兔酒精性肝损伤有一定的预防和治疗效果，具有广泛的临床应用价值，但其机理还有待于进一步研究。
       【参考文献】
         1］Marneurick. The inhibition of mitochondrial peroxidation by ubiquinone and ubiquinol［J］.The Journal of Biological Chemistry，1966，2 41(19):4353.
       
       ［2］杜施霖,迟宝荣.酒精性肝损伤动物模型的研究［J］.白求恩医科大学学报,2001,27(6):682.
       
       ［3］龚盛昭,叶孝兆,骆雪萍.利用废茶制备茶多酚护肤霜的研究［J］.广西化工,2002,31(1):12.
       
       ［4］李春美,谢笔钧,姚 平.茶色素体外清除氧自由基及对老龄小鼠脂质过氧化作用的影响［J］.中国药理学通报,2001,17:233.
       
       ［5］林春兰,蒋建伟,严玉霞，等. 茶多酚对酒精诱导的小鼠肝脂质过氧化和血清ALT活性变化的影响［J］.中国病理生理杂志,2002,19:110.
       
       ［6］窦若兰,刘书德,胡若梅，等.茶多酚对阻塞性黄疸肝脏过氧化损伤的保护作用［J］.营养学报,2000,22(4) ：328.