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       【摘要】 
       目的通过实验研究进一步完善复方龙脉宁滴丸纯化工艺参数，为该制剂实现工业化生产奠定基础。方法以葛根素含量为指标，采用薄层色谱法和高效液相色谱法测定其含量，对AB-8大孔吸附树脂纯化该制剂处方进行纯化实验研究。结果采用静态吸附-动态洗脱的纯化方法较为合理，需3BV的70%乙醇即可洗脱完全。结论该纯化工艺参数合理，方便可行，重复性好。AB-8型大孔吸附树脂具有较好的纯化效果，可有效除杂，从而降低服用量，同时保证药物制剂疗效。
       【关键词】  复方龙脉宁； 纯化工艺； 葛根素
            滴丸剂系指药材经适宜的方法提取、纯化、浓缩并与适宜的基质加热熔融混匀后，滴入不相混溶的冷凝液中，收缩冷凝而制成的球形或类球形制剂［1］。复方龙脉宁滴丸由葛根、穿山龙等4味中药提取加工而成，具有通络活血、消炎化瘀的作用，用于治疗中风所致半身不遂，肢体麻木，口眼歪斜及胸痹所致胸闷，心悸，气短等症。该制剂的基础研究相对成熟，通过两年的实验研究，得到了重复性较高，较为科学、合理的提取工艺参数。为了降低服用剂量，对该复方进行了大孔吸附树脂纯化实验研究，通过纯化处理制备的滴丸剂，服用量大大的减少，初步的药效学观察，该制剂具有较好治疗作用。本文在已有的研究基础上，进一步对大孔吸附树脂纯化复方的工艺进行研究，为该制剂实现工业化生产奠定良好基础。
       1  仪器与材料
        HITACHI液相色谱仪:L-2130泵、HITACHI检测器、ORGNIZER色谱工作站。甲醇为色谱纯(天津康科德化学试剂),水为重蒸水。葛根素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0752-9907)；其余试剂为分析纯。葛根、穿山龙等4味药材混合提取药液（自制）。AB-8大孔吸附树脂(上海树脂厂有限公司，批号20080505)。
       2  方法与结果
       2.1  药材的提取将葛根等4味药按处方比例和最佳提取工艺提取。
       2.2  葛根素的含量测定方法
       2.2.1  色谱条件色谱柱为Accurasil C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)；流动相为甲醇和水（25∶75）；检测波长250 nm［1］；柱温为室温； 流速1 ml/min。
       2.2.2  标准曲线的绘制精密称定葛根素对照品10.0 mg，加30%乙醇定容于25 ml容量瓶中，摇匀。精密吸取1 ml葛根素标准品溶液置于50 ml容量瓶中，加水至刻度线，摇匀，即得浓度为0.008 mg/ml的标准品溶液，作为对照品溶液［2］。分别精密吸取对照品溶液（c=0.008 mg/ml）2，4，6，8，10 μl，按上述色谱条件测定峰值面积，得标准曲线及线性范围。以峰面积为纵坐标，葛根素含量（μg）为横坐标计算回归方程为：A=22 158C+14 157相关系数r=0.999 4，线性范围0.016～0.080 mg。
       2.2.3  含量测定精密吸取0.45 μm微孔滤膜过滤后的提取液10 μl,注入液相色谱仪,测得峰面积,代入标准曲线计算其含量［3］。
       2.3  纯化方法的筛选
       2.3.1  纯化方法本实验将静态吸附-动态洗脱与动态吸附-动态洗脱两种方法进行对比，优选最佳纯化条件。以处方中葛根素的含量作为评判指标。
       
       静态吸附-动态洗脱方法：将处理后的AB-8大孔吸附树脂按径高比1∶3装柱，倒入过量混合药液使其充分吸附，吸附后倒入重蒸水进行冲洗，加70%乙醇以2BV/h的速度洗脱，洗脱液每5 ml为一份，测定每份中葛根素的含量。
       
       动态吸附-动态洗脱方法：将处理后的AB-8大孔吸附树脂按径高比1∶3装柱，倒入过量混合药液使其充分动态吸附，流出液速度为15 d/min,洗脱方法同静态吸附-动态洗脱。
       2.3.2  洗脱结果按“2.2.3”项含量测定方法测定每一份流出液中葛根素含量。结果见表1～2，图1。用TLC的方法验证每一份流出液的葛根素含量。结果见图2～5。结果显示第10份流出液葛根素含量极低，可认为已洗脱完成。表1  动态吸附-动态洗脱结果（略）表2  静态吸附-动态洗脱结果（略）
       3  结论
        将薄层色谱法和高效液相色谱法所得的含量测定结果结合，综合比较选择静态吸附-动态洗脱的方法较好，需3BV的70%乙醇即可将葛根素洗脱完全。
       4  讨论
        复方龙脉宁滴丸中所含化学成分极其复杂，含有葛根素、薯蓣皂苷元、阿魏酸、黄酮等多种成分，故有效成分的富集，精制，纯化存在一定的难度［4～7］。如何寻找一种既能满足精制度要求,又能在大生产中推广应用的新技术是中药产业工程化之关键。作者采用AB-8大孔吸附树脂纯化葛根素,从实验结果看，其对葛根素洗脱完全，因此大孔树脂适宜于葛根素的纯化,并通过中试研究证实了该技术放大生产亦是可行的。
       【参考文献】
         1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社, 2005:附录10.
       
       ［2］李东辉.HPLC测定参苏感冒片中葛根素的含量［J］.中国药事，2008，22（2）：135.
       
       ［3］蔡翠芳,唐 星,李积军.川芎中阿魏酸的提取纯化工艺［J］.沈阳药科大学学报,2008,25(1):71.
       
       ［4］吴平谷，叶立扬.蜂胶有效成分的分离与鉴定［J］.卫生研究，2000，29（2）：123.
       
       ［5］丁明玉，马帅武，刘德麟.阿魏酸的稳定性及其在川芎和当归药材中的存在形式［J］.中草药，2004，35(1):28.
       
       ［6］姚 丽，刘树民，王加志，等.穿山龙中薯蓣皂苷元的提取分离及测定方法研究概况［J］.中华中医药学刊，2008，26(1):164.
       
       ［7］欧英富，雍 红.川芎有效成分提取方法的选择［J］.山东医药，2007，47(14):72.