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       【摘要】 
       目的建立益智药材中圆柚酮的含量测定方法，并对不同产地药材进行含量测定。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为DiamonsilC18(5 μm，250 mm×4.6 mm)，流动相为乙腈水(65∶35)，检测波长为235 nm，流速为1.00 ml·min1，柱温为40℃。结果圆柚酮在0.115 2～0.268 8μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 9；平均回收率为97.34%，RSD=1.48%（n=6）。不同产地益智药材中圆柚酮的含量在1.50～2.10 mg·g1之间。结论该法可靠、准确、简便，可作为益智药材的质量控制方法。
       【关键词】  益智； 圆柚酮
        Determination of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae by HPLCLI Xinghua，HU Changjiang*，LI Wenbing，HUANG Qinwan，XIE Xiuqiong Chengdu University of TCM，Chengdu，Sichuan 611137，ChinaAbstract：ObjectiveTo establish a method for determination of the content of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae，and to determine the content of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae from different places by this new method.MethodsThe DiamonsilC18(5 μm，250 mm×4.6 mm) column was used. The mobile phase was CH3CNH2O(65:35) and the detection wavelength was set at 235 nm.The flow rate was 1.00 ml·min-1 and the column temperature was 40℃. ResultsThe Nootkatone content showed a good linear relationship within the range of 0.115 2～0.268 8μg(r=0.999 9).The average recovery was 97.34% and RSD was 1.48%（n=6）. the content of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae from different places was within the range of 1.50～2.10 mg·g-1.ConclusionThe method is simple and the result was reliable. It can be used for the quality control of this herbal medicine.
       Key words： Fructus Alpinia oxyphyllae；  Nootkatone
        中药益智，为姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实，主产于我国的海南和广东，为四大南药之一。其功效为温脾止泻，摄唾涎，暖肾，固精缩尿，主治脾寒泄泻，腹中冷痛，口多涎唾，肾虚遗尿，小便频数，遗精白浊［1］。我们的前期研究发现，益智石油醚提取部位为其缩尿作用的有效部位，并且通过气相色谱质谱联用分析，发现此部位中的主要化学成分为圆柚酮（Nootkatone）［2］。国外已有研究报道，从益智药材中分离得到的圆柚酮，在抗实验性胃溃疡、抑制脂多糖活化巨噬细胞中NO的产生和抑制由抗原引发的RBL2H3细胞的脱落等方面具有显著的活性，为益智药材的有效成分之一［3］。而对于益智药材中圆柚酮的含量情况还未见相关报道。为了更好地控制药材质量，我们采用高效液相色谱法建立了益智药材中圆柚酮的含量测定方法，并测定不同产地药材中圆柚酮的含量。
       1  仪器与试药
        Agilent 1100高效液相色谱仪，HPChemStation 6.04软件包（美国Agilent公司）；赛多利斯Bp211DAG电子天平（德国Sartorius公司）；超声波清洗器CX100（北京医疗设备二厂）。圆柚酮对照品由美国Sigma公司提供(批号：10112423，纯度>98%)。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。不同产地的药材由成都中医药大学谢秀琼教授从各产地收集，并经成都中医药大学卢先明教授鉴定为姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实。
       2  方法与结果
       2.1 色谱条件
       色谱柱为DiamonsilC18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)；流动相为乙腈水(65∶35)；检测波长为235 nm；流速为1.00 ml·min-1；柱温为40℃。灵敏度为0.005AUFS。在选定条件下，圆柚酮与样品中其他色谱峰达基线分离，其理论塔板数(N)大于4 000。对照品溶液和供试品溶液色谱图见图1～2。
       2.2  对照品溶液的制备
       取圆柚酮对照品适量，精密称定，置25 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成含圆柚酮0.480 0 mg·ml-1的对照品溶液。
       2.3  供试品溶液的制备
       取益智药材，除去杂质及外壳，粉碎，过40目筛。取粉末约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇25 ml，称定重量，超声提取（360 W，35 kHz）30 min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
       2.4  线性关系考察
       精密吸取圆柚酮对照品溶液(0.480 0 mg·ml-1) 0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 ml，分别置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样10 μl测定峰面积。以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，则回归方程为：A=3 237.2C +4.33，r=0.999 9。表明圆柚酮在0.115 2～0.268 8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
       2.5  精密度实验
       精密吸取上述对照品溶液10 μl，重复进样5次，峰面积RSD=0.20%，表明仪器的精密度良好。
       2.6  重复性实验
       取同一批样品（海南省琼中县出产）5份，分别按供试品溶液的制备方法制备，进样10 μl，测定峰面积，计算含量。其RSD=1.23%，表明该方法重复性良好。
       2.7  稳定性实验
       取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8 h进样10 μl，测定峰面积，计算含量。其RSD=0.32%，表明供试品溶液在8 h内稳定。
       2.8  加样回收率实验
       取6份已知含量的样品（海南省琼中县出产，含量为2.10 mg·g-1）约0.1 g，精密称定，分别加入圆柚酮对照品溶液(0.480 0mg·ml-1) 0.5 ml。按供试品溶液的制备方法制备，进样10 μl，测定峰面积，计算回收率。结果见表1，平均回收率为97.34%，RSD=1.48%。表1  加样回收率实验结果 （略）
       2.9  样品的含量测定取不同产地的益智药材,用本实验方法测定。结果见表2。表2  不同产地益智药材中圆柚酮含量测量结果（略）
       3  讨论
        圆柚酮(Nootkatone)又称诺卡酮，是属于雅槛蓝烷(eremophilane)系的双环倍半萜酮。其甲醇溶液在200～400 nm波长下扫描，结果在235 nm波长处存在最大吸收峰，故选择235 nm作为检测波长。
       
       益智从《中国药典》1963版Ⅰ部即开始收载，现行版《中国药典》的含量测定项下只要求本品种子含挥发油不得少于1.0%（ml·g-1），对于其中指标性成分的含量限度暂无规定。本文建立了益智药材中圆柚酮的高效液相色谱含量测定方法，并对不同产地药材样品进行含量测定，结果重复性好、精密度高、操作简便，效果满意，可作为益智药材的质量控制方法，也可为益智药材的栽培及收购等提供参考。
       【参考文献】
         1］国家药典委员会编.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：204.
       
       ［2］黄勤挽，胡昌江，李兴迎，等.益智仁盐炙前后挥发油成分对比研究［J］.中国药业，2008，17(5)：3.
       
       ［3］Morikawa T，Matsuda H，Toguchida I，et al.Absolute stereostructures of three new sesquiterpenes from the fruit of Alpinia oxyphylla with inhibitory effects on nitric oxide production and degranulation in RBL2H3 cells［J］.J Nat Prod，2002，65(10)：1468.