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       【摘要】 
       目的研究三黄补血汤对失血小鼠的补血作用。方法以剪尾法造失血模型，以红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、血红蛋白（Hgb）、促红细胞生成素（EPO）为研究指标，评价三黄补血汤的补血效果。结果造模可使红细胞数和白细胞数减少、血红蛋白含量降低,三黄补血汤有明显的增加红细胞和白细胞数量、血红蛋白含量及EPO水平。结论三黄补血汤显著的补血效果，有进一步研究的意义。
       【关键词】  三黄补血汤 红细胞 细胞 血红蛋白 促红细胞生成素
        “三黄补血汤”是中药成方中补血作用较强的一个复方，见于明代张洁所著《仁术便览》［1］，其属于中药四物汤的类方，由熟地、生地、牡丹皮、黄芪、柴胡、归身、川芎、升麻、白芍等多味药物组成，有补血益气及升阳之功，用以治疗亡血血虚，六脉俱大，按之空虚者。本实验以红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、血红蛋白（Hgb）、促红细胞生成素（EPO）为研究指标，研究三黄补血汤对失血性贫血小鼠的补血效果。
       1  仪器、药品与试剂
        OLYMPUS BX51显微镜，OLYMPUS DP70显微摄像头，Sysmex F-820半自动血球计数仪。
        中药熟地、生地、牡丹皮、黄芪、柴胡、归身、川芎、升麻、白芍均购自武汉市国药集团。
        EPO试剂盒(H-162) sc-7956 Lot.# A2505，Santa Cruz Biotechnology inc, USA；FITC标记羊抗兔IgG(ZF-0311) Lot. GC942496，产地美国Pierce。
        实验用小鼠由华中科技大学同济医学院实验动物房提供。
       2  方法
       2.1  中药的分组及提取中药根据文献［1］的相关记载，确定方剂组成及药物剂量，将药物提取。提取方法：药材粉碎至一定细度，加8倍量水，浸泡30 min，煎煮30 min，倾出药液，压滤，药渣加入4倍量水，煎煮25 min，压滤。2次煎煮均回收馏出液。合并液体，减压浓缩至一定浓度，加入乙醇至终浓度达60%，低温存放48 h，过滤沉淀，回收乙醇，调整至药材与溶液量比（g∶ml）为1∶2。
       2.2  给药量的确定根据文献［2］中动物与人体表比换算法, 由成人剂量换算成小鼠用药量。
       2.3  血虚动物模型的制备根据文献［3］取小鼠，以75%酒精擦拭尾部使血管扩张，充血后剪去尾端0.25～0.3cm，然后将尾端伤口浸入37℃温水中,直至小鼠失血0.5 ml。
       2.4  给药及取血方法将实验小鼠分为正常组、手术组（不给药）、手术后给药组。各组动物为10只，其中手术组与给药组（共3组）均需按血虚动物模型制备方式处理，而给药组（共3组）在失血后1 h给予药物，按照人与鼠的体表面积折算给药量，灌胃2次/d。共饲养3 d，第4天早晨断头取血，收集血液。
       2.5  RBC、WBC、Hgb、EPO测试进行RBC、WBC及Hgb测试,用Sysmex F-820半自动血球计数仪进行测定；运用免疫荧光法对EPO含量进行测定，老鼠血液离心（1 500 r/min,10 min）取上清液，涂片，加EPO试剂1∶200孵育12 h，再加FITC标记羊抗兔IgG反应30 min，在荧光显微镜观察。
       3  结果
        动物实验后表现:手术组小鼠手术后出现紧张、烦躁。第2天观察，逐渐出现精神活动欠佳,毛欠光泽,少饮少食的现象。给药组手术后也出现紧张，但第2，3天食量及活动量均未与正常组相比有明显变化；随着实验天数的增加，正常组小鼠体重呈稳步增长趋势,手术组及各给药组小鼠,其体重与正常组比较无显著性差异。给药4 d后,模型组小鼠出现精神萎靡,活动迟缓,聚堆,蜷卧,嗜睡,尾色苍白,给药组小鼠行为活动趋于正常。RBC、WBC、Hgb测试结果见表1。EPO测试结果见图1～3。表1  RBC，WBC及Hgb测试结果（略）
       4  讨论
        贫血通常是指外周血中血红蛋白浓度、红细胞计数和（或）红细胞压积低于同年龄和同性别正常人的最低值，其中以血红蛋白浓度低于正常值最为重要。按中医理论解释，血虚当以补血为治疗手段，但血虚易产生血行凝滞现象，所以加活血行气药；血虚还应滋阴，通过配伍达到补血效果。现代研究表明，处方中熟地［3］、当归［4］单用均有补血作用，而升麻、白芍、生地、黄芪、柴胡、牡丹皮、川芎均是按中医理论加入的药物：升麻、川芎入气分，柴胡沟通表里，黄芪补气，生地、白芍、牡丹皮滋阴。现有资料显示，黄芪甲苷等成分有补血功能［5］；升麻有降血压及扩张外周血管功能［6］；白芍有抑制血小板聚集和镇痛的作用［7］；柴胡有降低血压及镇痛、镇静作用［8］；牡丹皮有保护心肌,防止血小板聚集等作用［9］,均对失血后引起的某些症状有改善。从实验结果来看,三黄补血汤全方有明显的增加红细胞和白细胞数量及血红蛋白含量的效果，使血清EPO水平增高。结果显示三黄补血汤有明显的疗效。
       【参考文献】
         　　［1］明·张洁. 仁术便览［M］.北京：人民卫生出版社，1985：173.
       
       ［2］陈奇. 中药药理实验方法［M］. 北京：人民卫生出版社，1994：206.
       
       ［3］冯雪梅，吕艳，祝彼得，等. 熟地和制首乌多糖对贫血小鼠骨髓有核细胞数和细胞周期的影响［J］. 四川中医，2006，24(6):71.
       
       ［4］陈慧珍.当归的研究进展［J］.海峡药学，2008，20（8）：38.
       
       ［5］古今.当归补血汤中黄芪对小鼠造血功能的影响［J］. 中国中医基础医学杂志，2009，15(3)：215.
       
       ［6］林玉萍，邱明华，李忠荣.升麻属植物的化学成分与生物活性研究［J］.天然产物研究与开发，2002，14(6):58.
       
       ［7］陈四平，张 浩，李相冲，等. 中药白芍的研究进展［J］. 承德医学院学报，2008，25(3): 293.
       
       ［8］金顺姬. 柴胡的药理作用及临床应用［J］. 现代医药卫生，2009，25(7):1074.
       
       ［9］李方军. 牡丹皮化学成分及药理作用研究进展［J］. 安徽医药，2004,8(1):9.