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       【摘要】 
       目的观察白花丹参叶制剂对于人乳腺髓样癌细胞株BCaP-37生长的抑制作用。方法以体外培养的人乳腺癌细胞株BCaP-37为靶细胞,运用四氮唑盐法(MTT法)观察白花丹参叶制剂作用12h后对于人乳腺癌细胞株生长的影响。以流式细胞仪分析其对细胞周期和凋亡率的影响。结果MTT法结果显示，白花丹参叶制剂作用12h可抑制BCaP-37的生长,并呈剂量依赖性。流式细胞仪测定结果显示，随白花丹参叶制剂浓度的增加，凋亡峰越来越显著，说明白花丹参叶制剂可在一定程度上诱导细胞凋亡,并且凋亡率与浓度呈正相关；但对细胞周期无明显影响。结论白花丹参叶制剂可抑制体外培养的人乳腺癌细胞株BCaP-37增殖并促使癌细胞凋亡且呈一定的量效关系。
       【关键词】  白花丹参叶制剂　人乳腺髓样癌细胞株　 细胞增殖　凋亡
       Inhibition of Salvia miltiorrhiza bge.f.alba Leaf Preparation on the Proliferation of Human Breast Carcinoma BCaP-37 Cells in vitro
       JIAO Peng, CHANG Qi, WANG Xingnong, LI Dawei, XIA Zuoli
       1.Institute of Life Sciences, Taishan Medical College, Taian 271000, China; 2. The Affiliated Hospital of Taishan Medical College, Taian 271000, China
       Abstract:ObjectiveTo explore the inhibition of Salvia miltiorrhiza bge.f.alba leaf preparation on the proliferation of human breast carcinoma BCaP-37 cells.MethodsBCaP-37 cells were cultivated with Salvia miltiorrhiza bge.f.alba leaf preparation for 12 hours. The effects of Salvia miltiorrhiza bge.f.alba leaf preparation on the proliferation，apoptosis and cell cycle of BCaP-37 cells were observed using MTT method and flow cytometry.ResultsSalvia miltiorrhiza bge.f.alba leaf preparation could inhibit the growth of BCaP-37 cells in dose-dependent manner. Flow cytometry analysis showed Salvia miltiorrhiza bge.f.alba leaf preparation has no effect on distribution of cell cycle but the apoptosis rate of cell was increased significantly with the increase of Salvia miltiorrhiza   bge.f.alba leaf preparation concentration.ConclusionSalvia miltiorrhiza bge.f.alba leaf preparation can enhance the growth inhibition and apoptosis of human breast carcinoma BCaP-37 cells in a concentration-dependent manner.
       Key words:Salvia miltiorrhiza bge.f.alba leaf preparation;  Human breast carcinoma cells;  Proliferation;  Apoptosis
        白花丹参为唇形科植物丹参的变型。常见丹参花为紫色，而白花丹参因其药用价值远大于紫花丹参且濒于灭绝而尤为珍贵。作为我国传统中草药，它安全无毒副作用，疗效确切［1，2］。现代医学研究结果表明，丹参对治疗心血管疾病，改善微循环，降脂、降压、抗菌消炎、抗肿瘤等有一定作用。丹参古今皆以根部入药。为综合开发利用丹参药物资源, 已有研究发现其各部位均含有丰富的微量元素［3，4］。本文以人乳腺髓样癌细胞株BCaP-37为靶细胞，观察白花丹参叶制剂在体外对该细胞增殖的影响，并对其作用机制进行初步研究。
       1  器材
       1.1  仪器与试剂FACScalibur流式细胞仪（美国BD公司）， LG16-W 高速微量离心机（北京医用离心机厂），Model 550酶标仪（美国BIO-RAD公司）, MCO-15AC CO2培养箱（日本三洋株式会社），RPMI1640培养基（Gibco公司），新生牛血清（杭州四季青公司），二甲基亚砜(Sigma公司)，噻唑蓝(Sigma公司), 碘化丙啶（Sigma公司）。
       1.2  白花丹参叶制剂制备白花丹参叶（产自泰山）由山东大学博士生导师夏作理教授鉴定，白花丹参叶制剂由泰山医学院微循环重点实验室制备。制备过程如下：称取50 g自然干燥的白花丹参叶，粉碎，过30目的网眼筛后在100℃水中浸泡5 min，过滤，收集上清液，旋转蒸发仪蒸馏煮剂后进行冷冻干燥，干燥48h后大约得到10 g样品，置于干燥器中避光-20℃保存待用［5，6］。每次用时称取适当样品，实验前用RPMI1640培养液(不含血清)稀释成所需浓度, 0.22 μm滤膜过滤后，用于体外实验。
       2  方法
       2.1  体外细胞增殖抑制实验(MTT比色法)选用人乳腺髓样癌细胞株，取形态良好的对数生长期细胞用于实验, 以每孔5×103个细胞100 ml接种于96孔培养板中，贴壁24 h后分别接入不同浓度的无菌的白花丹参叶制剂溶液100 μl, 使最终浓度分别为0.3, 0.5, 0.8 g/L, 各组设4个复孔, 对照组加100 μl无血清培养液, 在37℃, 50 ml/L CO2条件下继续培养12 h，实验终止前加入新配制的5 g/L的MTT溶液20 μl, 混匀, 再继续培养4 h，弃去上清, 每孔加DMSO 200 μl, 充分振荡30 min, 490 nm处测定每孔的吸光度A值［7］。计算相对存活率：相对存活率(%)=实验孔A值/对照孔A值×100%［8］。
       2.2  流式细胞仪检测细胞周期与凋亡率收集不同浓度白花丹参叶制剂处理的BCaP-37细胞为实验组,不加药的BCaP-37细胞为对照组, 1 000 r/min离心5 min收集细胞, 70%冰乙醇固定2 h,离心后每样品管中加0.5 ml碘化丙啶(PI)染液, 4℃避光染色30 min,流式细胞仪检测细胞周期与凋亡率,每样品获取20 000个细胞［9］。
       2.3  统计学处理采用SPSS11.5进行统计分析，均数比较用t检验。所有数据均用±s表示。
       3  结果
       3.1  白花丹参叶制剂对BCaP-37细胞增殖的影响白花丹参叶制剂处理BCaP-37细胞后，能使细胞存活率明显下降，并呈剂量依赖效应(见表1)。表1  不同浓度白花丹参叶制剂对细胞存活率的影响（略）
       3.2  白花丹参叶制剂对BCaP-37细胞周期和细胞凋亡的影响由流式细胞仪分析结果可见, 白花丹参叶制剂对BCaP-37细胞周期影响不大，但随着白花丹参叶制剂浓度的增加，凋亡峰越来越显著（见图1）。在对照组中，凋亡峰所占比例为0.7%；当白花丹参叶制剂作用浓度为0.5 g/L时，凋亡峰所占比例升高到3.48%；浓度为0.8 g/L时，凋亡峰所占比例为17.66%。
       4  讨论
        多年来，人们将丹参广泛应用于临床，是具有活血化瘀活性的常用中药。已有研究证明某些活血化瘀类中药有抑癌抗癌作用（比如单味中药穿山龙），目前癌症治疗已逐渐趋向统合治疗并以结合传统治疗，透过分子靶点的调控来控制癌细胞的成长，以达相辅相成之效。国内在这方面着重于中药、尿萃取物及特有食品等，主要是藉清热解毒、活血化瘀等作用，以提升免疫、促进细胞凋亡、增加分化及调控分子靶点［10］。
        本实验显示，白花丹参叶制剂在体外能有效地抑制乳腺癌细胞增殖，而且通过流式细胞仪检测也明显发现其能促进BCaP-37细胞的凋亡。现代医学研究表明, 诱导肿瘤细胞凋亡是一条有效的肿瘤治疗途径，作为我国传统中草药，白花丹参安全无毒副作用，因此该实验结果不仅对白花丹参这一中药资源的综合开发利用提供了实验资料，而且对临床乳腺癌的治疗可能具有潜在的应用价值。
       【参考文献】
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