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       【摘要】 
       目的研究松针不同部位提取物对去卵巢大鼠肝脏脂质的影响。方法Wistar雌性大鼠50只，分成正常组、模型组、松针正丁醇部位组、松针水部位组、松针多糖部位组，每组10只。术后1 周开始给药，每周测量1次体质量，给药14 周后处死动物，取肝脏并且测定肝脏甘油三酯，胆固醇及血清中的甘油三酯，胆固醇。结果松针多糖能显著抑制去卵巢大鼠肝脏和血清甘油三酯的升高，但对肝脏总胆固醇变化无影响。结论松针多糖对去卵巢大鼠肝脏甘油三酯有降低作用，并且对去卵巢大鼠肝脏脂肪堆积有改善作用。
       【关键词】  松针提取物　去卵巢大鼠　肝脏脂质
       Effect of Pine Needle Extract on Liver Lipids in Ovariectomized  Rats
       ZHENG Xiaoke,WANG Xiaolan,FENG Weisheng
       Henan College of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou 450008，China
       Abstract：Objective To study the effect of pine needle"s different part extracts on liver lipids in ovariectomized rats. Methods50 female Wistar rats were randomly divided into 5 groups: normal group, model group, nbutanol part group, water part group and polysaccharides part group with 10 rats in each group. All rats were ovariectomized except for the normal group. One week after operation, the rats were treated with different medicines. Fourteen weeks after treatment, the rats were killed; the weight, the liver exponent and the levels of  TG and TC in serum and liver were measured.ResultsCompared with model group, the polysaccharides part could significantly decrease the level of triglycerde in both serum and liver of ovariectomied rats, but had no effect on the content of total cholesterol in liver.ConclusionThe polysaccharides part of pine needle extract can decrease the level of triglycerde and the fat accumulation in liver of ovariectomied rats.
       Key words： Pine needles extract;  Ovariectormized  rats;   Liver lipids
       
       近年来，随着人们膳食模式转变，人群中脂肪肝的发病率呈上升趋势。在老年人群中，女性由于绝经导致的肥胖，非酒精性脂肪肝的发病率明显增加［1，2］。松针为我国传统中药，在历代本草中均记载有“轻身益气，不饥延年”［3］的作用。现代研究表明松针具有镇静，镇痛，抗炎，延缓衰老，降血脂，降胆固醇等作用［4］。本实验室在前期对松科(Pinaceae)松属（Pinus）植物马尾松Pinus massoniana Lamb针叶化学成分的系统分离基础上［5～10］，结合文献对松针降血脂的研究报道［11～13］，采用去卵巢大鼠模型，探讨了松针中极性较强组分对其肝脏脂质含量的影响。
       1  材料与仪器
       1.1  药物马尾松松针（采自河南西峡县）2 kg用10倍量水煮提两次，过滤，合并滤液并减压浓缩得浸膏，依次用乙醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，剩余部分低温减压浓缩干燥，得到乙醚，醋酸乙酯，正丁醇部位，水部位。水煮液醇沉，离心，弃上清液，真空干燥得多糖部位，备用。
       1.2  动物Wistar雌性大鼠50只，体质量（200±10）g，购自河南省实验动物中心，合格证号为医动字第19020。
       1.3  试剂甘油三酯(TG)试剂盒总胆固醇(TC)试剂盒、购自中生北控生物科技股份有限公司，批号为011001。
       1.4  仪器BT815A半自动生化分析仪，上海三科仪器有限公司生产。SK1快速混匀器，江苏常州国华电器有限公司生产。电子读数分析天平，梅特勒托利多仪器（上海）有限公司产品生产。KDC160HR高速冷冻离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司生产。
       2  方法
       2.1  分组Wistar大鼠50只，随机分成正常组、模型组、松针正丁醇部位组、松针水部位组、松针多糖部位组，每组10只。各用药组分别灌胃松针各部位浸膏溶液（2 g·kg-1），正常组和模型组灌胃等体积蒸馏水。
       2.2  造模除正常组外，其余各组大鼠切除双侧卵巢，正常组重复去卵巢步骤但不切除卵巢。
       2.3  指标及测定方法
       2.3.1  体质量及肝脏指数 14 周后，各组大鼠禁食12 h后，称重，处死，迅速取出肝脏，将分离的完整肝脏，以生理盐水洗净表面血迹，滤纸吸干水分后，电子天平分析天平称重。肝脏指数（%）=（肝脏重量/体重）×100%。
       2.3.2  肝脏TG和TC含量迅速取出肝脏并切下1 g左右，冷冻于80 ℃保存。取保存的肝脏组织，用精密天平称取0.2 g，加入1 ml 0.9%生理盐水，匀浆制成10%的匀浆液。加入氯仿甲醇(1∶2)3.75 ml，涡漩混悬10～15 min。再加入氯仿1.25 ml，混合1 min。离心(500 r·min-1)10 min。弃上层液，收集下层液体，过滤掉杂质，真空干燥或氮气吹干［4］。挥干氯仿后，用200 ml的甲醇定容；用TG、TC试剂盒在BT815A半自动生化分析仪测定TG、TC的含量。
       2.3.3  肝脏的形态学观察取大鼠肝脏左侧叶约0.5 cm肝组织，于12%中性甲醛溶液中固定，石蜡包埋，连续切片，HE染色，光镜下观察。
       2.3.4  统计处理数据均用 ±s表示，用SPSS13.0统计软件数据包进行组间单项方差分析（OneWay ANOVA）检验。
       3  结果
       3.1  松针各部位提取物对大鼠体质量、肝脏重量和肝脏指数的影响体质量：大鼠去除卵巢15 周后，体质量明显增加，模型组与正常组比较差异极显著（P<0.01），松针各部位可明显抑制大鼠体质量增长，与模型组比差异显著（P<0.05或P<0.01）。
       
       肝脏重量和肝脏指数：大鼠去除卵巢14周后，模型组大鼠肝脏重量和指数明显增加，与正常组相比差异显著（P<0.05），松针各部位均可抑制因卵巢摘除导致的肝脏脂质增加，同模型组比较差异显著（P<0.05）。见表1。表1  松针各部位提取物对去卵巢大鼠体质量、肝脏重量和肝脏指数的影响(略)
       3.2  松针各部位提取物对大鼠肝脏TG和TC含量的影响肝脏TG：模型组大鼠的肝脏TG显著升高，与正常组比较差异极显著（P<0.01）。松针多糖部位可以降低肝脏甘油三酯的含量，同模型组比较差异极显著（P<0.01），与正常组比较无差异（P>0.05）。
         
       肝脏TC：模型组大鼠的肝脏TC显著升高，与正常组比较差异极显著（P<0.01）。松针各部位对去卵巢大鼠肝脏胆固醇升高无降低作用，与模型组比无显著差异（P>0.05）。结果见表2。表2  松针各部位提取物对去卵巢大鼠肝脏TG和TC的影响(略)
       3.3  松针各部位提取物对血清TG和TC的影响血清TG：模型组血清TG显著升高，与正常组相比差异极显著（P<0.01）；松针各部位提取物均有降低血清TG的作用，与模型组相比差异显著（P<0.05）。
        血清TC：模型组血清TC显著升高，与正常组相比差异显著（P<0.05）；松针各部位提取物有降低血清TC的作用，与模型组相比差异显著（P<0.05或P<0.01）。结果见表3。表3  松针各部位提取物对去卵巢大鼠血清TG 和TC 的影响(略)
       3.4  肝脏的形态学观察模型组大鼠肝细胞广泛性显著肿胀同时伴有轻度脂肪变，少数肝细胞呈现气球样变和局灶性坏死。松针多糖部位和水部位组肝细胞形态正常，排列整齐，除少数肝细胞呈现嗜酸性变外，其它均可明显恢复为正常，肝窦也恢复正常；正丁醇部位肝细胞形态正常，部分排列紊乱，肝细胞可见明显的嗜酸性变肝细胞，可见少数水肿及脂肪变（见图1）。
       4  讨论
        据文献报道［14］，松针提取物具有降血脂作用，但松针对肝脏脂质代谢的影响未见报道，本实验以松针水部位，正丁醇部位，多糖部位来探讨松针提取物对肝脏脂质代谢的影响。实验结果显示，大鼠去卵巢14周后的体重，肝脏指数、血清以及肝脏中的TG和TC都明显增加，松针各部位提取物则可不同程度地改善这些状况，提示松针各部位提取物，尤其是多糖部位对去卵巢造成的肝重增加有明显的改善作用，能减少脂肪在肝中的增加。
       
       脂肪肝发病一般认为与体内脂肪代谢异常，脂肪细胞与肝细胞之间脂肪代谢的平衡失调有关［15，16］。本次实验采用去卵巢大鼠模型，模拟绝经后妇女脂代谢紊乱导致的血脂升高的病理特征；结果显示松针多糖不仅对去卵巢大鼠血清TC和TG的升高有改善作用，同时能显著降低去卵巢大鼠肝脏中的TG含量，减少肝脏中的脂质堆积。而且，除了改善肝脂肪变化以外，对肝细胞无损伤表现，提示松针多糖对绝经后女性高脂性脂肪肝可能具有一定的防治作用。
       
       研究资料表明［17］，脂肪肝与肥胖的发生关系密切，发病率与体重指数成正相关。松针多糖能明显改善去卵巢大鼠的体质量增加，提示松针多糖对肥胖也有一定的防治作用，从而对脂肪肝有一定的改善作用。
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