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       【摘要】 
       目的确定乙醇溶液为溶剂对青阳参皂苷元的提取参数。方法采用超声处理法并对超声功率、时间、醇浓度、料液比、提取次数和溶液酸度等因素进行优化。结果提取参数确定为：超声波功率400 W，时间40 min，乙醇浓度50 %，料液比1∶10，提取次数1，酸度0.005 mol·L-1HCl。结论该方法可用于青阳参皂苷的提取。
       【关键词】  青阳参 青阳参皂苷元 超声波 提取
       青阳参Cynanchum otophyllum Scheid为萝藦科鹅绒藤属植物，彝药名为肉已勃齐，汉药名为青阳参、西河参等，主要分布于云南、贵州等地。其味甘微苦，对腰痛、子宫肌瘤、结核、癫痫等症［1］有治疗作用，所以青阳参提取物药理作用、化学成分等［2～5］的研究受到人们关注。但是青阳参皂苷提取工艺报道少有。我们采用超声波处理法，乙醇溶液为提取溶剂，以酸水解使其转化得到的稳定的皂苷元为指标，利用高效液相色谱（HPLC）法进行测定，并与回流提取法和索氏提取法比较，最后确定了超声处理法提取青阳参的工艺条件。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器Angilent 1100 型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，KQ-2250DB型超声波清洗仪(昆山市超声波仪器有限责任公司)，电子分析天平(上海奥豪斯公司)。
       1.2  试药和试剂青阳参药材(云南千草源药业有限公司，加工为60目备用)，青阳参皂苷元化学对照品(批号：20070460，纯度99.9%，云南白药集团天然药物研究院)，浓盐酸、甲醇、无水乙醇、氢氧化钠、磷酸等均为国产分析纯，水为重蒸水。
       2  方法与结果
       2.1   提取工艺
       2.1.1  水解酸浓度对提取率的影响首先对水解的酸度进行单因素考察。精密称取约1 g青阳参原药材干粉10份，置于10 ml具塞试管，分别加入5 ml乙醇和5 ml浓度为0.000～0.100 mol·L-1HCl的水溶液，密封于水浴中超声处理40 min。取出冷却后用NaOH溶液调节pH至中性。按“2.2.2”和“2.2.4”节方法测定青阳参皂苷元的提取率，每个样品平行两份，结果取均值，发现酸度为0.005 mol·L-1HCl时青阳参皂苷元的提取率基本稳定于0.21 %。见表2。
       2.1.2   正交实验设计精密称取约1 g青阳参原药材干粉16份，按正交实验优化青阳参皂苷的提取工艺条件，即以提取超声功率、时间、乙醇浓度、料液比、提取次数作为研究对象，选用L16（45）正交表(表3)，因素水平见表1。每次实验经合并提取液，调节pH至中性后过滤，浓缩定容至10 ml，按“2.2.2”和“2.2.4”节方法测定青阳参皂苷元的提取率。结果见表3。表1  因素水平 （略）表2  青阳参水解酸浓度考察（略）表3  不同提取条件下青阳参皂苷的提取率（略）
       2.2   含量测定［6，7］
       2.2.1   对照品溶液的制备精密称取青阳参皂苷对照品19.6 mg，置50 ml 量瓶中。用甲醇定容至刻度，摇匀，即为0.392 mg·ml-1的青阳参皂苷对照品溶液备用。
       2.2.2  色谱条件Hypersil C18色谱柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm)；VWD紫外检测器；甲醇-0.4%磷酸溶液(1∶1)为流动相，流速为0.8 ml·min-1；柱温35℃；进样量10 μl。
       2.2.3   标准曲线的绘制以0.392 mg·ml-1的青阳参皂苷对照品溶液准确配制浓度分别为1.57，2.35，3.14，4.02，4.70，5.49 μg·ml-1的青阳参皂苷元对照品溶液，按上述色谱条件于259 nm测定峰面积A。以峰面积A对取样量质量浓度C(μg·ml-1)做标准曲线，得回归方程A = 22.26 C- 0.88，(r = 0.9999，n = 6)。结果表明，青阳参皂苷元在上述色谱条件下的峰面积与样品质量浓度呈良好的线性关系。
       2.2.4   样品测定精密吸取样品液1 ml置50 ml量瓶中，甲醇溶解并定容，0.45 μm滤膜微滤，分别进样10 μl，测定峰面积，计算样品中青阳参皂苷元的提取率。
       3  工艺验证
       3.1   超声处理法精密称取约5 g青阳参原药材干粉4份，按A4B2C3 D 3 E2工艺提取，冷却至室温，调节提取液酸度为中性，过滤，甲醇定容至50 ml，按照上述色谱条件和样品测定方法测量。青阳参皂苷元的提取率达到0.21%以上。结果见表4。
       3.2   回流提取法参照超声处理法条件，取约5 g青阳参原药材干粉于100 ml三口烧瓶中，加入无水乙醇25 ml和0.005 mol·L-1的酸溶液25 ml，加热至70～80 ℃，蒸馏2 h，冷却后调节提取液酸度为中性，过滤。甲醇定容至50 ml，按照上述方法测定青阳参皂苷元的提取率。结果见表4。
       3.3   索氏提取法取约5 g青阳参原药材干粉于滤纸筒中，在100 ml单口烧瓶中加入无水乙醇25 ml和0.005 mol·L-1的盐酸溶液25 ml，加热至回流，磁力搅拌6 h，冷却后调节提取液酸度为中性，过滤。甲醇定容至50 ml，按照上述方法测定青阳参皂苷元的提取率。结果见表4。表4   提取工艺实验结果（略）
       4  讨论
        分析表1，2，3，从极差R看出，影响青阳参皂苷提取率的主要因素水平依次是：超声功率、时间、料液比、乙醇浓度、提取次数，即A4>B2>D3 >C3>E1 。其中超声波功率对青阳参提取影响尤为显著，4水平提取率最大，其次是超声处理时间，2水平最大，其后趋于稳定，超声处理时间过长可能皂苷不稳定，其提取率约有降低；再次为投料比，3水平最大，乙醇浓度和料液比影响较小，且乙醇浓度在2，3水平时提取率非常接近，提取次数水平在1，2时亦如此。综合考虑能源、材料、时间等因素，选择的提取工艺组合为：A4B2C2D3E1，即工艺参数为功率400 W，提取时间40 min，乙醇浓度50 %，液料比1∶10，提取次数1，酸浓度0.005 mol·L-1。
        采用乙醇为提取溶剂可减少有毒溶剂残留和降低成本；同时，比较表4中三种方法，超声波处理方法提取青阳参皂苷元，提取率略有提高，而且和回流提取法，索氏提取法相比明显降低了提取的温度和时间，能较快速地、方便地进行青阳参皂苷元的提取，且重复性较好。
        青阳参皂苷为青阳参中抗癫痫的主要活性成分［2～5］。随着人们对青阳参药理作用的进一步研究，青阳参将会得到更大的开发利用，它的提取工艺也将被研究者重视。
       【参考文献】
         　　［1］孙跃农, 闫继兰. 民族药青阳参的临床运用［J］.中国民族民间医药杂志, 1999,5: 309.
       
       ［2］陈阳美, 曾可斌, 谢运兰, 等. 青阳参对点燃癫痫大鼠脑内c-fos、c-jun基因表达的影响［J］.中药药理与临床, 2003, 19(5) : 26.
       
       ［3］杜忠德, 高学广. 青阳参片辅助治疗癫痫30例临床分析［J］.中华临床医药, 2004, 5(16):116.
       
       ［4］Zhao Yi-Bin, Shen Yue-Mao, He Hong-Ping.A New C21 Steroidal Glycoside from Cynanchum otophyllum［J］.Acta Botanica Yunnan, 2005, 27 (4): 443.
       
       ［5］杨庆雄. 人工栽培青阳参化学成分及抗抑郁活性研究［J］.贵州科学, 2007, 25(5): 421.
       
       ［6］中药部颁标准［S］.Z12-84. 标准编号：WS3-B-2343-97.
       
       ［7］明全忠, 董 媛, 邹秀云. 高效液相色谱法测定青阳参片中青阳参皂苷元的含量［J］.药物分析杂志, 2006, 26(8): 1156.