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       【摘要】 
       目的研究乳康舒传统合煎液与其经过分煎制成的免煎配方颗粒混合物的化学成分的差异。方法采用HPLC色谱指纹图谱法，比较乳康舒免煎配方颗粒和乳康舒汤剂两者指纹图谱的差别，并通过相似度软件分析两者的相似性。结果乳康舒配方颗粒中共出13个色谱峰，确认出其中的12个色谱峰。乳康舒合煎液和混合免煎配方颗粒指纹图谱的相关系数为0.839。结论乳康舒合煎液同其分煎制成的免煎配方颗粒中的主要化学成分组成基本相同，其共有成分比例相近。
       【关键词】  乳康舒 配方颗粒 指纹图谱 高效液相色谱
       Comparative Study on Fingerprints of Traditional Herbs Decoction and Compatible Granules of Rukangshu by HPLC
       KONG Ming, QIAN Dawei ,ZHU Lingying
       1. Jiangsu Academy of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210028, China 2. Jiangsu Key Laboratory for TCM Formulae Research，Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210046, China
       Abstract：ObjectiveTo study the difference in main chemical composition between traditional herbs decoction and compatible granules of Rukangshu. MethodsHPLC was adopted to compare the  fingerprints of traditional herbs decoction and compatible granules of Rukangshu, and computer aided similarity evaluation was applied to analyze similarity.ResultsThere were 13 peaks in the fingerprints of compatible granules of rukangshu and 12 peaks were ascertained the source. The correlation of both HPLC fingerprint was 0.839. ConclusionThe main chemical substances and the composition ratio of traditional herbs decoction and compatible granules of Rukangshu are similar.
       Key words： Rukangshu;   Granules;  Fingerprints;   HPLC
       
       中医药作为中国传统医药学，经过了几千年的临床验证，建立了一套完整的理论体系。临床上中医用药，自古以来多以汤剂为主，以饮片作为原料，它具有组方灵活，随证加减，易于吸收，起效较快等特点，最能反应中医特色和医生专长。但同时患者需自己加工煎煮，费时、费力，且有剂量、质量不稳定，储存、携带不便等多方面的问题，不符合现代人的要求，故在国际上更难以被接受，影响了中医药的进一步发展。中药饮片急需改革，配方颗粒应运而生 ［1］，它突破了传统中药饮片混合煎煮的应用形式，具有免煎易服、作用迅速、安全卫生、携带方便等优点，既满足了临床辨证论治、随证加减的需要，又有利于药房调剂和药材资源的深度开发及中药的标准化和国际化［2］。但是否这种复方分煎的配方颗粒完全与传统的合煎液一致呢，是否产生差异不能一概而论，复方合煎过程中各味药是否相互作用也需要化学理论和实验数据的支持，本实验以月月舒处方为基准，考察了该方“分煎”与“合煎”的化学成分变化，为免煎配方颗粒能否替代传统水煎液提供一定的依据。
        本实验以江苏省中西医结合医院临床常用的经验方乳康舒为基准，考察了该方“分煎”与“合煎”的化学成分的变化，本方由鹿角片、淫羊藿、白芍、丹参、王不留行、郁金6味药组成。功能温肾舒肝，行气活血，调理冲任，止痛散结，用于肾虚肝郁、冲任失调型乳腺增生病。通过本实验对传统合煎液和医院配药系统中常用的免煎配方颗粒的比较，期望总结出该方“分煎”与“合煎”的化学成分的变化，为免煎配方颗粒能否替代传统水煎液提供一定的理论依据［3～8］。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器Waters高效液相色谱仪（Alliance 2695四元泵及自动进样系统，996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站）；KQ250E型医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）； Millipore纯水器。
       1.2  试药淫羊藿苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为（07379709），丹酚酸B(自制，液相归一化法，质量分数为99.05%),甲醇为色谱纯，水为超纯水，配方颗粒及药材由江阴天江药业有限公司提供。
       2  方法
       2.1  色谱条件色谱柱：Lichrospher C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：起始甲醇1%冰醋酸（3∶97），15 min时，线性变化至甲醇1%冰醋酸（17∶83），17 min时，线性变化至甲醇1%冰醋酸（25∶75），95 min时，线性变化至甲醇1%冰醋酸（90∶10），97分钟时，线性变化至甲醇1%冰醋酸（3∶97），梯度结束平衡后20 min进入下一个样品分析；流速为1.0 ml/min；柱温：35℃；进样量20 μl。
       2.2  供试品溶液的制备乳康舒合煎剂：按乳康舒处方配伍量，精密称取饮片，加入10倍量蒸馏水煎煮2次，过滤，合并滤液，蒸干，残渣加甲醇10 ml，超声提取30 min，过滤，滤液浓缩并定容至10 ml，取上清液，滤过，取续滤液，即得。
        乳康舒混合配方颗粒：按乳康舒颗粒配伍量，精密称取各配方颗粒，混合均匀，加甲醇10  ml，超声提取30 min，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。
        药材：精密称取饮片，加甲醇10 ml，超声提取30 min，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。
        配方颗粒：精密称取各配方颗粒，加甲醇10ml，超声提取30 min，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。
       2.3  最佳检测波长的选择利用二极管阵列检测器的特点，对210～400 nm每隔10 nm分别观察指纹图谱，结果270 nm波长所得的图谱基线较稳，分离较好，紫外响应值合适，且反映的信息较多，故选择270 nm为测定波长。
       2.4  精密度实验取乳康舒混合配方颗粒供试品溶液，连续进样5次，对主要的13个色谱峰进行了考察，计算峰面积RSD和保留时间RSD，结果各峰的峰面积和保留时间的RSD均小于3％。
       2.5  稳定性实验乳康舒混合配方颗粒供试品溶液，分别在0，2，4，8，12 h不同时间点进样检测，记录指纹图谱。计算保留时间和峰面积，结果表明,供试品的指纹图谱在12 h内基本稳定，各共有色谱峰的保留时间和峰面积的RSD均小于3％。
       3  结果
       3.1  指纹图谱中各峰的确认以270 nm为检测波长，从乳康舒配方颗粒液、药材合煎液的色谱图中共分辨出13个峰，经过同相同波长条件下对单味配方颗粒、单味药材提取液的色谱图比较，发现由于1号峰为各药材中一些极性很大的成分，在反相色谱柱中不保留，因此在各个单味配方颗粒、单味药材提取液中均有1号峰的体现，故无法确认属于哪个单味药材，因此不将其列入相关性分析。其余色谱峰经过确认，确定 10～13号峰属于淫羊藿的峰，其中11号峰为淫羊藿苷的峰； 2，6号峰属于白芍的峰； 3，4，7～9号峰属于丹参的峰，其中8号峰为丹酚酸的峰； 5号峰属于王不留行的峰。
       3.2  乳康舒合煎液和混合免煎配方颗粒指纹图谱的比较从乳康舒合煎液和混合免煎配方颗粒得的指纹图谱两图直观比较来看（见图1），两者有一定相似性，同时也存在着一定的差异。以乳康舒免煎配方颗粒为基准，发现乳康舒合煎液的色谱中少了6，9号峰，而在5号峰的边上又有一新的峰出现。于是应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版（国家药典委员会）对两者的相关性进行分析,分析结果为两者的相关性为0.839。
       4  讨论
        配方颗粒生产与实验用药材为同一批次药材，以排除由于药材不均一而引起色谱图的差异。
        从乳康舒合煎液和混合免煎配方颗粒指纹图谱两图比较结果来看，合煎液中消失的6号峰为炒白芍的峰，而9号峰为丹酚酸B的峰，结果说明合煎过程中，由于成分间的相互作用，使白芍中类似丹酚酸B这类不稳定成分分解，或是由于成分产生了共沉淀等作用，使得该类成分减少。由于5号峰的边上又有一新的峰出现，结果表明，乳康舒在合煎的过程中，由于成分间的抑制及助溶作用，使得丹参中某些不稳定的成分分解或转化，同时有新的成分的出现。
        在实验中同时比较了方中淫羊藿、白芍、丹参、王不留行、郁金药材和配方颗粒的指纹图谱，并对各自的相关性进行了分析，结果各药材和配方颗粒的相关性分别为0.878，0.665，0.813，0.945，0.886。通过上述相关性的分析，发现除了白芍以外的药材和配方颗粒的相关性较好，说明了整方在合煎和分煎中的差异主要来自于白芍和丹参两味药。
        乳康舒全方的混合配方颗粒和全方合煎液的指纹图谱相似度有一定差异，但它对分析中药方剂的应用原理具有积极的意义，想要确定乳康舒免煎配方颗粒是否能完全替代合煎液，还需结合药理药效和临床效果来判断。
       【参考文献】
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