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       【摘要】 
       目的分离和鉴定大叶蛇葡萄的化学成分。方法利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等方法进行分离纯化，根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果得到7个化合物，分别鉴定为蛇葡萄素(Ⅰ)、杨梅素(Ⅱ)、花旗松素(Ⅲ)、槲皮素(Ⅳ)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(Ⅴ)、杨梅苷(Ⅵ)、β-谷甾醇(Ⅶ)。结论化合物Ⅱ～Ⅶ均为首次从该种植物中分离并鉴定。
       【关键词】  大叶蛇葡萄; 化学成分; 分离; 鉴定
       大叶蛇葡萄A.megalophylla Diels et. Gilg为葡萄科蛇葡萄属植物,味酸涩,性平,具有清热利湿、活血化瘀的功能，用于治疗高血压病、痢疾、泄泻、小便淋痛、头昏目胀等[1]，在我国主要分布于湖北、陕西、甘肃、福建、四川、贵州、云南等地[2]。目前，国内外关于该种植物的研究较少[3]。为了更好地开发大叶蛇葡萄这味传统药材，本课题组前期已进行了一系列的研究工作，包括生药学研究[4]、抗高血压有效部位筛选实验研究[5]及HPLC指纹图谱研究[6]。笔者对湖北恩施采集的大叶蛇葡萄进行了化学成分研究，利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等方法进行分离纯化，得到7个化合物，通过理化性质和波谱数据鉴定了它们的结构。化合物Ⅱ～Ⅶ均为首次从该植物中分得。
       1 仪器与材料
       Varian INOVA-600型核磁共振仪(内标为TMS，美国Varian公司)，Finnigan-TRACE MS型质谱仪，可见-紫外分光分光光度仪(SHIMADZU，UV-2401)，显微熔点测定仪(北京西城光学仪器厂)。Sephadex LH-20(美国 Pharmacia 公司)，硅胶柱用硅胶(100～200目，试剂级，青岛海洋化工有限公司)。实验所用试剂均为分析纯，水为重蒸水。
       大叶蛇葡萄采于湖北省恩施地区，经湖北中医学院生药学教研室张秀桥副教授鉴定为葡萄科蛇葡萄属植物大叶蛇葡萄A.megalophylla Diels et. Gilg，取其茎叶为实验材料。
       2 方法与结果
       2.1 提取与分离将8.5 kg大叶蛇葡萄药材粉碎后，分别以10倍量95%，75%乙醇渗漉提取1次(浸泡24 h，流速10 ml/min)，合并提取液，减压回收乙醇并浓缩至小体积(5.5 L)。将浸膏加适量水分散，依次用石油醚、醋酸乙酯萃取。取醋酸乙酯萃取部位干浸膏200g拌样后上正相硅胶柱，以石油醚-丙酮梯度洗脱，得到各组分再反复经硅胶柱色谱、制备薄层色谱、Sephadex LH-20柱色谱得到化合物Ⅰ(55 g)，Ⅱ(19 g)，Ⅲ(20 mg)，Ⅳ(5 mg)，Ⅴ(7 mg)，Ⅵ(50 mg)，Ⅶ(10 mg)。
       2.2 结构鉴定
       2.2.1 化合物Ⅰ无色针状结晶，mp：244～245℃。盐酸-镁粉反应和三氯化铁反应均为阳性，Molish试验为阴性。FAB-MS m/z(%)：321(M++1,12)、304(3)、277(13)、241(3)、186(7)、185(100)、167(4)、149(4)。1H-NMR(CD3COCD3，600 MHz)δ：4.56(1H，d，J=11.4 Hz，H-3)，4.94(1H,d,J=11.4 Hz,H-2)，5.98(1H,d,1.8 Hz,H-8)，5.94(1H,d,1.8 Hz,H-6)，6.62(2H,s,H-2′,6′)，11.72(1H,s,5-OH)。13C-NMR(CD3COCD3,150MHz)δ：198.0(C-4)，167.8(C-7)，164.9(C-9)，164.0(C-5)，146.2(C-3′、C-5′)，134.1(C-4′)，128.9(C-1′)，107.9(C-2′、C-6′)，101.4(C-10)，96.9(C-6)，95.9(C-8)，84.6(C-2)，73.1(C-3)。以上理化常数和波谱数据与文献[7]报道一致，确定化合物Ⅰ为蛇葡萄素(ampelopsin)。
       2.2.2 化合物Ⅱ黄色针状结晶，mp：324～325℃。盐酸-镁粉反应和三氯化铁反应均为阳性，Molish试验为阴性。MS m/z(%)：320(M++2)、319(M++1)、318(M+,100)、317(M+-1,10)、303、302、301、290(6)、289(M+-CHO,9)、286、273(3)、245(5)、216(M+-C8H6,2)、153(M-C8H6O4-H,3)、136(1)、108(2)、51(2)。1H-NMR(CD3COCD3,600MHz)δ：7.42(2H,s,H-2′, 6′)，6.51(1H,d,J=1.8Hz,H-8)，6.26(1H,d,J=1.8Hz,H-6)，12.16(1H,s,5-OH)。以上理化常数和波谱数据与文献[8]报道一致，确定化合物Ⅱ为杨梅素(myricetin)。
       2.2.3 化合物Ⅲ 白色针状结晶，mp：220～221℃。盐酸-镁粉反应和三氯化铁反应均为阳性，Molish试验为阴性。1H-NMR(CD3COCD3，600MHz)δ：4.60(1H,d,J=11.4Hz,H-3)，5.02(1H,d,J=11.4Hz,H-2)，5.94(1H,d,1.2Hz,H-6)，5.98(1H,d,1.2Hz,H-8)，6.86(1H,d,8.4Hz,H-5′)，6.91(1H,dd,J=8.4Hz,1.8 Hz,H-6′)，7.06(1H，d，J=1.8Hz，H-2′)。13C-NMR(CD3COCD3,150MHz)δ：198.1(C-4)，167.7(C-7)，164.9(C-5)，164.1(C-9)，146.4(C-4′)，145.6(C-3′)，129.7(C-1′)，120.7(C-6′)，115.7(C-2′)，115.6(C-5′)，101.4(C-10)，96.9(C-6)，95.9(C-8)，84.4(C-2)，73.0(C-3)。以上理化常数和波谱数据与文献[9]报道一致，确定化合物Ⅲ为花旗松素(Taxifolin)。
       2.2.4 化合物Ⅳ 淡黄色粉末，mp：308～310℃。盐酸-镁粉反应和三氯化铁反应均为阳性，Molish试验为阴性。1H-NMR(CD3COCD3,600MHz)δ：6.26 (1H,d,J=1.8Hz,H-6)，6.52(1H,d,J=1.8Hz,H-8),6.99(1H,d,J=8.4Hz,H-5′),7.69(1H,dd,J1=8.4Hz,1.8Hz,H-6′),7.82 (1H,d,J=1.8Hz,H-2′)，12.17(1H,s,5-OH)。13C-NMR(CD3COCD3,150MHz)δ：176.4(C-4)，164.9(C-7)，162.3(C-9)，157.7(C-5)，148.2(C-3′)，146.9(C-2)，145.7(C-4′)，136.7(C-1′)，123.7(C-3)，121.4(C-6′)，116.1(C-2′)，115.6(C-5′)，104.0(C-10)，99.0(C-6)，94.4(C-8)。以上理化常数和波谱数据与文献[10]报道一致，确定化合物为槲皮素(Quercetin)。
       2.2.5 化合物Ⅴ 黄色粉末，mp：176～179℃。盐酸-镁粉反应和三氯化铁反应均为阳性。Molish反应显阳性，化合物经酸水解后，与标准糖进行薄层层析，鉴定为α-L-鼠李糖。ESI-MS在m/z447处可见[M-H]+离子峰，表明该化合物的分子量为448。1H-NMR(CD3COCD3,600 MHz)δ：7.49(1H,d,J=1.8Hz,H-2′)，6.99(1H,d,J=8.4Hz,H-5′)，7.39(1H,dd,J1=8.4,J2=1.8Hz，H-6′)，6.47(1H,d,J=2.0Hz,H-8)，6.26(1H,d,J=2.0Hz,H-6)，12.73(1H,s,5-OH)，5.51(1H,d,J=1.8Hz,Rha-H-1)，3.32～4.21(4H,m,Rha-H-2～Rha-H-5)，0.91(3H,d,J=6.0Hz,Rha-H-6)。13C-NMR(CD3COCD3,150MHz)δ：164.9(C-7)，163.0(C-5)，158.3(C-2)，157.9(C-9)，148.9(C-4′)，145.8(C-3′)，135.8(C-3)，122.8(C-1′)，122.5(C-6′)，116.6(C-2′)，116.0(C-5′)，105.7(C-10)，99.4(C-6)，94.4(C-8)，102.7(Rha-C-1)、72.9(Rha-C-4)、72.0(Rha-C-3)、71.4 (Rha-C-2)、71.2(Rha-C-5)、17.7(Rha-C-6)。由HMQC谱和HMBC谱可以得到每个C和其直接相关及远程相关的H的信息，能准确的归属每个C、H信号。由HMQC谱得到了2′、6′、5′、6、8和鼠李糖端基的C、H信号。由HMBC谱可以判断出糖的连接位置是135.8(C-3)，同时也验证了各取代基团的位置。根据以上理化常数和波谱数据，确定化合物为槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(Querceetin-3-O-α-L-rhamnoside)。
       2.2.6 化合物Ⅵ 浅黄色粉末状结晶，mp：177～178℃。盐酸-镁粉反应和三氯化铁反应均为阳性。Molish反应显阳性，化合物经酸水解后，得到沉淀和水液两部分，沉淀经TLC鉴定为杨梅素，水液部分经TLC鉴定为鼠李糖。以上信息提示糖基可能连在C-3位上。MS m/z(%)：320(5)、319(19)、318(M+-C6H10O4，100)、302(69)、286(5)、261(3)、245(6)、229(3)、153(M-C6H10O4-C8H6O4-H，10)、128(4)、85(17)、57(3)。1H-NMR(CD3OD,600MHz)δ：6.94(2H,s,H-2′,6′)，6.19(1H,d,J=1.8Hz,H-6)，6.35(1H,d,J=1.8Hz,H-8)，5.31(1H,d,J=1.8Hz,Rha-H-1),3.30～4.21(4H,m,Rha-H-2～Rha-H-5),0.96(3H,d,J=6.0Hz,Rha-H-6)。以上理化常数和波谱数据与文献[7]报道的杨梅苷相符合，确定该化合物为杨梅苷(myricetrin)。
       2.2.7 化合物Ⅶ 无色针晶，mp：137～138℃。IR(KBr)cm-1：3429、1059(-OH)、2936、1463、1379;1H-NMR(CDCI3,600MHz)：5.348(1H,s,-OH)、5.057(1H,m,H-6)、3.529(1H,m,H-3)。与对照品β-谷甾醇共薄层，经石油醚-丙酮(体积比5:1)、石油醚-醋酸乙酯(体积比4∶1)、环己烷-丙酮(体积比4∶1)3种溶剂系统展开，Rf值均一致，且与β-谷甾醇对照品混合熔点不下降，故鉴定化合物Ⅶ为β-谷甾醇。
       3 讨论
       本课题组在进行大叶蛇葡萄化学成分后续研究，以期能筛选得到专属性或特征性有效成分，为该药材的品质评价和新药开发提供科学依据。
       【参考文献】
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