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       【摘要】 
       目的通过免疫调节功能探讨膨化人参与人参的差异。方法通过测定小鼠脾淋巴细胞的增殖反应，小鼠淋巴细胞释放IL-1量的影响，探讨人参不同制品的免疫调节作用及其优劣。结果膨化人参及人参能促进免疫功能低下小鼠由ConA或LPS诱导的脾淋巴细胞增殖反应，提高小鼠血清IL-1的含量;膨化人参较人参有优势，但是二者同剂量几无显著性差异。结论膨化人参与人参均有增强机体免疫功能的作用。
       【关键词】  人参; 淋巴细胞转化; 膨化
       人参能大补元气，补脾益肺、生津、安神，具有广泛的药理作用，其中增强机体免疫机能是其扶正的主要药理基础之一。人参经膨化后，水煎出膏率提高，从理论上能提高药物的生物利用度，增强药理活性。本研究采用免疫学的实验方法研究了膨化人参与人参对小鼠淋巴细胞增殖的影响，以探讨膨化人参与人参的差异。
       1 材料与仪器
       1.1 动物健康ICR小鼠，雌雄各半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，合格证编号：医动字第08-004号。
       1.2 药品与试剂人参，购自西安市万寿路药材市场，经王盛民鉴定符合《中国药典》要求;膨化人参：人参由谷物膨化机膨化而成。实验中人参、膨化人参均采用煎煮法1.5 h 2次煎煮，制成1 g/ml悬液，置冰箱备用。三健牌注射用环磷酰胺(上海华联制药有限公司，生产批号：021006);盐酸左旋咪片(山东莒南制药厂，生产批号:030105)。
       1.3 仪器756MC型紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器厂产品);Model3350酶标仪(Bio-Rad公司);K-21N型自动血细胞计数仪(希思美康)。
       2 方法[1～3]
       2.1 对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响取ICR小鼠84只，♀♂各半，分为7组，每组12只，即对照组、模型组、左旋咪唑组(15 mg·kg-1)、膨化人参组(2，5 g生药·kg-1)和人参组(2，5g生药·kg-1)。灌胃给药，连续10 d后，在继续灌胃的同时，除对照组外，各组小鼠腹腔注射环磷酰胺70 mg·kg-1连续3 d，1次/d，末次给药后1 h，将小鼠脱臼处死，置体积分数为0.75的酒精浸泡5 min，在无菌条件下取出脾脏，去除被膜，用Hank"s液洗两次，剪碎，把组织碎块放入微型玻璃匀浆器内，反复研磨，制成脾细胞悬液，用200目网过滤脾细胞，然后进行细胞计数，配成5×10-9·L-1待用。按Mosmann法进行，将调整好的细胞悬液加入96孔细胞培养板中，每孔200 μl，然后加入终浓度10 mg·L-1ConA或20 mg·L-1LPS，置37℃5%CO2温箱培养66 h，取出培养板，每孔加5g·L-1MTT20 μl继续培养46 h。取出反应板，3 000 r·min-1 离心10 min，吸去上清液，每孔加入酸化异丙醇150 μl于振荡器振荡30 s，充分混匀，10 min后在酶标仪570 nm处或630 nm读取数值。
       2.2 对小鼠淋巴细胞分泌细胞因子白介素IL-2的影响取小鼠，分组、给药剂量造模方法同“2.1”项，连续灌胃14 d。末次给药后1 h，实验小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡5 min，无菌取脾，用RPMI-1640培养液洗涤，在200目钢丝网上剪碎，用灭菌玻璃注射芯轻磨、过滤，分别制成脾细胞悬液，0.83%Tris-NH4Cl破坏红细胞，冰浴静置10 min，2 000 r·min-1离心10 min，用RPMI-1640培养液洗涤细胞两次，经台朌蓝染色测定细胞活率大于95%，再以含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液制成1×107/ml脾淋巴细胞悬液，加ConA 5×10-6 g/ml，培养于24孔细胞培养板，在5%CO2孵箱中37℃温育24 h;离心收集上清液，-20℃保存，即为IL-2待测样品。BalB/C小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡5 min，无菌取脾，用RPMI-1640培养液洗涤，在200目钢丝网上剪碎，用灭菌玻璃注射芯轻磨、过滤，制成脾细胞悬液，0.83%Tris-NH4Cl破坏红细胞，冰浴静置10 min，2 000 r/min离心10 min，用RPMI-1640培养液洗涤细胞两次，经台酚蓝染色测定细胞活率大于95%。再以含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液制成5×106/ml脾淋巴细胞悬液，加ConA 2.5×10-6g/ml，置25ml的细胞培养瓶中温育96h。细胞用10×10-3g/ml 的α-甲基甘露糖苷的Hank"s液洗两次，含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液洗一次，调节细胞浓度为1×106/ml，作为测定IL-2的反应靶细胞。取-20℃保存的各组IL-2上清液，均作1/4，1/8，和1/32稀释，分别用ConA活化的小鼠脾淋巴细胞测定其IL-2水平，即在96孔细胞培养板中，每孔加反应细胞0.1ml(1×105个)和等量的稀释后IL-2上清液，每样均设3个复孔。每孔加100×10-3g/ml的α-甲基甘露糖苷20μl。在37℃，5%CO2孵箱中温育48h，MTT比色法测定结果。
       2.3 数据处理实验数据用±s表示，采用SPSS10.0统计软件进行数据处理。
       3 结果
       3.1 对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响见表1。表1 对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响
       与模型组比较，﹡P﹤0.01，**P﹤0.01，***P﹤0.001;与同剂量人参组比较，△P﹤0.05;n=10 人参不同制品均可提高环磷酰胺降低小鼠的ConA诱导T淋巴细胞或LPS诱导B淋巴细胞的增殖反应。膨化人参和人参ConA诱导T淋巴细胞或LPS诱导B淋巴细胞的增殖反应均表现出较强活性。其中，人参2 g/kg、膨化人参5 g/kg对于T淋巴细胞增殖反应与对照组比较，有显著性差异。人参5 g/kg与膨化人参5 g/kg比较有显著性差异。
       3.2 对小鼠淋巴细胞分泌细胞因子白介素IL-2的影响见表2。腹腔给予环磷酰胺，造成小鼠免疫低下模型，模型组脾白介素-2与对照组比较，显著降低(P﹤0.01)，人参(5g/kg)、膨化人参(2，5g/kg)均能显著增加白介素含量，膨化人参与人参同剂量比较，有增加白介素含量的趋势，但是相互比较差异没有显著性意义。表2 对小鼠淋巴细胞分泌细胞因子白介素IL-2的影响与模型组相比，﹡P﹤0.05 **P﹤0.01;n=10
       4 讨论
       T淋巴细胞在体外经植物血凝素等激活后，可转化为淋巴母细胞，根据淋巴细胞的转化情况，可反应机体的细胞免疫水平，淋巴细胞转化率降低表示细胞免疫水平低下。PHA是T淋巴细胞的非特异的多克隆激活剂，由PHA刺激而测得的淋巴细胞转化，可反映受试者T细胞总体水平的应答功能。PHA淋巴细胞转化近年来越来越受到临床重视，它不但可作为变态反应性疾病和免疫缺陷病的辅助诊断，还可用于自身免疫性疾病和各种肿瘤的病因研究及其预后判断[4]。
       本研究的目的是比较人参膨化炮制与人参药理效应是否存在差异，还研究了人参及其膨化人参对记忆获得、记忆巩固和记忆再现障碍的影响并观察二者的差异性[5]。结果发现人参及其制品对小鼠记忆获得障碍、记忆巩固障碍及记忆再现障碍均有显著改善作用，能在一定范围内提高小鼠学习记忆能力，但人参普通制剂与膨化人参制剂无显著性差异。本实验以免疫低下动物模型脾淋巴细胞转化为指标，研究探讨人参经膨化炮制与人参在免疫功能药效活性的差异。结果表明，人参和膨化人参均能显著增强免疫低下动物的细胞免疫功能，膨化人参稍优于人参。
       【参考文献】
         　[1] 徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学(第2版)[M].北京：人民卫生出版社，1991.
       
       [2] 王世若，王兴龙，韩文瑜.现代动物免疫学(第2版) [M].长春：吉林科学技术出版社，2001.
       
       [3] 张海燕，郭 强，温伟业.绞股蓝总皂苷对小鼠免疫功能的影响[J].中兽医学杂志，2006(2):13.
       
       [4] 吴 铁.用PHA在小鼠体内诱发淋巴细胞转化的初步观察[J].上海免疫学杂志，1984，4(1):57.
       
       [5] 王盛民，张 瑛，盂建国，等.膨化加工对人参改善小鼠学习记忆能力的影响[J].陕西中医， 2006，27(6):732.